检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2025年第4期 837-846页

作者：王聪亮陈文博万仕成李剑南任赵飞韩斌李娜雷安民杜晓敏屈雷朱海鲸华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心榆林学院陕西省绒山羊工程技术研究中心榆林市畜牧兽医服务中心

天然抗性相关性巨噬细胞蛋白1 (natural resistance-associated macrophage protein 1, NRAMP1)与结核病、布鲁氏菌病等多种胞内菌感染抗性相关。本研究旨在制备NRAMP1基因过表达山羊(Capra hircus)，并对基因过表达山羊的血液生理生化... 详细信息

天然抗性相关性巨噬细胞蛋白1 (natural resistance-associated macrophage protein 1, NRAMP1)与结核病、布鲁氏菌病等多种胞内菌感染抗性相关。本研究旨在制备NRAMP1基因过表达山羊(Capra hircus)，并对基因过表达山羊的血液生理生化和生长发育指标进行比较分析，为抗布鲁氏菌病模型建立和转基因动物遗传育种提供研究模型与平台。基于本实验室前期构建的山羊NRAMP1基因慢病毒表达载体，利用山羊超数排卵和原核胚胎显微注射技术进行NRAMP1基因过表达山羊的生产，监测评估NRAMP1基因过表达对山羊血液生理生化变化和生长发育的影响。结果显示，成年陕北白绒山羊以210IU促卵泡激素(follicle-stimulating hormone, FSH)剂量进行超数排卵的原核胚胎回收率显著高于270 IU(P<0.05)；原核胚胎显微注射后移植共获得15只山羊，经PCR鉴定，3只为阳性基因过表达山羊；qRTPCR和Western blot鉴定结果表明，NRAMP1在基因过表达山羊睾丸组织中的mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05)；血液生理与生化测定结果表明，NRAMP1基因过表达山羊与野生型山羊的各项血液生理与生化指标差异不显著(P>0.05)；生长性能测定结果表明，NRAMP1基因过表达山羊与野生型山羊初生重、1～6月龄体重和3～6月龄体高、体长等生长性状差异不显著(P>0.05)。本研究成功构建NRAMP1基因过表达山羊模型，且NRAMP1基因过表达不影响山羊自身健康。本研究为培育抗布鲁氏菌病山羊及其抗病机制研究提供了科学依据。

关键词：山羊天然抗性相关性巨噬细胞蛋白1 (NRAMP1) 过表达慢病毒显微注射布鲁氏菌病

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抗猪繁殖与呼吸障碍综合征基因编辑猪研究进展

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生物技术通报 2023年第10期39卷 50-57页

作者：李双喜华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心杨凌712100

猪繁殖与呼吸障碍综合征是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种病毒性传染病。该病是影响我国生猪产业健康发展的最重要的三大疫病之一。目前对于该病的防控主要依赖... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种病毒性传染病。该病是影响我国生猪产业健康发展的最重要的三大疫病之一。目前对于该病的防控主要依赖于养殖场内外部生物安全体系,采取合理措施降低病毒的污染,切断病毒传播途径。从保护易感动物的角度而言,抗病育种也是疫病防控的重大策略之一。近年来,随着基因编辑技术的发展和成熟,分子育种作为猪抗病育种的核心技术,已显示出其独特的优势。国内外多个研究团队已利用分子育种技术在抗PRRS育种方面取得很多突破性进展。本文以PRRSV受体为切入点,综述当前猪抗PRRS育种的研究现状,以期为PRRS的防控和猪的抗病育种研究提供参考和线索。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征猪抗病育种 CRISPR/Cas9 CD163

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猪羊水干细胞特异向跳动心肌细胞诱导分化

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生物工程学报 2011年第8期27卷 1206-1214页

作者：陈家欢魏育蕾彭莎王华岩西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心杨凌712100

为了筛选并建立一种由猪羊水干细胞向心肌细胞分化的有效方法,以猪羊水干细胞为研究对象,以5-氮胞苷(5-aza)和维生素C(Vc)为诱导剂,对猪羊水干细胞形成的类胚体(EBs)进行诱导分化。应用免疫荧光、RT-PCR、透射电镜技术检测跳动细胞团中... 详细信息

为了筛选并建立一种由猪羊水干细胞向心肌细胞分化的有效方法,以猪羊水干细胞为研究对象,以5-氮胞苷(5-aza)和维生素C(Vc)为诱导剂,对猪羊水干细胞形成的类胚体(EBs)进行诱导分化。应用免疫荧光、RT-PCR、透射电镜技术检测跳动细胞团中心肌特异性标记的表达情况。结果显示,在猪羊水干细胞形成的类胚体中加入心肌细胞诱导剂,10 d后即见到节律性跳动的细胞团,t检验发现0.1 mmol/L Vc加5μmol/L 5-aza联合诱导组的诱导效率最高,达33%。免疫荧光结果显示跳动心肌细胞团表达细胞骨架蛋白α-actin和肌钙蛋白Tnni3。RT-PCR检测跳动心肌细胞团,发现心肌细胞特异性标记分子TbX5、Gata4、α-MHC、Tnni3均呈阳性表达。借助透射电镜观察诱导后的跳动样细胞团,能清晰可见其中的肌丝、糖原粒、糖原池等结构。说明5-氮胞苷和维生素C可以促进猪羊水干细胞向心肌细胞的诱导分化。

关键词：猪羊水干细胞(pAFS) 心肌细胞 5-氮胞苷维生素C

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β-烟酰胺单核苷酸(NMN)抗衰老研究进展

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生理学报 2024年第6期76卷 1032-1042页

作者：韩苗华进联* 西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心杨凌712100

β-烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide,NMN)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的前体物质,在提高NAD水平中发挥重要作用。NMN的摄入能够改变肠道微生物的组成与活力,恢复线粒体功能,抑制炎... 详细信息

β-烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide,NMN)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的前体物质,在提高NAD水平中发挥重要作用。NMN的摄入能够改变肠道微生物的组成与活力,恢复线粒体功能,抑制炎症通路的激活,发挥改善机体代谢、抗氧化应激及减轻炎症的作用,从而在衰老相关疾病(如心脏功能减退、生育能力降低、记忆障碍、糖尿病)防控中发挥显著的恢复效果,显示出有效且安全的抗衰老作用。中国对NMN的使用已经逐步放开,探究NMN发挥抗衰老作用的机制,提高NMN的生物合成是其广泛应用的重要方向。同时,NMN协同干细胞有望治疗与衰老相关的退行性疾病,促进人类和动物的整体健康。

关键词： β-烟酰胺单核苷酸(NMN) 衰老干细胞

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诱导多能干细胞向巨噬细胞分化研究进展

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生物工程学报 2021年第11期37卷 4001-4014页

作者：杨昕淳吴晓龙华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100

诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)是通过体细胞重编程得到类似胚胎干细胞特性的一种细胞类型。通过iPSCs的体外分化,可以了解巨噬细胞的进化历史和各种特性。iPSCs来源的巨噬细胞不仅是药物筛选的良好模型,也是进... 详细信息

诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)是通过体细胞重编程得到类似胚胎干细胞特性的一种细胞类型。通过iPSCs的体外分化,可以了解巨噬细胞的进化历史和各种特性。iPSCs来源的巨噬细胞不仅是药物筛选的良好模型,也是进行免疫治疗的重要手段。本文综述了近年来iPSCs及其向巨噬细胞分化的相关研究进展、所面临的问题以及未来的发展方向。

关键词：诱导多能干细胞巨噬细胞细胞分化拟胚体诱导单层细胞诱导类器官共培养

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人多能干细胞向红细胞的诱导分化

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生物工程学报 2018年第6期34卷 983-992页

作者：王思乐王宁蔡元星王华岩西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100

目前,体外生成人红细胞的实验技术较为复杂,为优化诱导步骤,采用两步法将人多能干细胞诱导分化为红细胞。首先,利用人多能干细胞(包括Rh阴性A型的脐带间充质干细胞(hUCMSC^(Rh-A))和人iPS(hiPS)细胞)在BVF培养液中进行诱导分化得到CD31... 详细信息

目前,体外生成人红细胞的实验技术较为复杂,为优化诱导步骤,采用两步法将人多能干细胞诱导分化为红细胞。首先,利用人多能干细胞(包括Rh阴性A型的脐带间充质干细胞(hUCMSC^(Rh-A))和人iPS(hiPS)细胞)在BVF培养液中进行诱导分化得到CD31~^+和CD34^+的阳性细胞群。经PCR和流式细胞仪检测CD31和CD34的表达发现,hUCMSC^(Rh-A)细胞诱导得到的CD31和CD34阳性细胞率分别是5.3%和22.7%;hiPS细胞诱导得到的CD31和CD34阳性细胞率分别是31.2%和8.2%。第二步,将获得的CD31^+和CD34^+的阳性细胞群在多种生长因子的作用下经过36 d诱导,分化为成熟红细胞。经吉姆萨染色检测得到的红细胞在形态和大小上与正常人红细胞相近,且存在血细胞去核的现象。荧光定量RT-PCR检测到了globin的表达,其中β-globin的表达量占20%以上。将得到的红细胞收集到离心管中,自然沉降后可见红色的红细胞沉淀。上述研究为大量制备人红细胞提供了新的有效的技术方法。

关键词：人多能干细胞 CD31^+和CD34^+标记诱导分化红细胞

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层粘连蛋白基因家族在猪多能干细胞中的表达谱分析

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生物工程学报 2017年第8期33卷 1304-1314页

作者：李焕于童马洋洋王华岩西北农林科技大学动物医学院动物生物技术系陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100

层粘连蛋白(Laminin)是细胞外基质的重要成分,对细胞生长、分化、运动、组织修复和再生等发挥重要调节作用。Laminin包括有A1-5、B1-4和C1-3共12个编码基因,以不同的表达模式发挥功能。其中Laminin A5作为可以支持多能细胞生长的重要基... 详细信息

层粘连蛋白(Laminin)是细胞外基质的重要成分,对细胞生长、分化、运动、组织修复和再生等发挥重要调节作用。Laminin包括有A1-5、B1-4和C1-3共12个编码基因,以不同的表达模式发挥功能。其中Laminin A5作为可以支持多能细胞生长的重要基因,得到广泛研究。但是,在所有猪相关数据库中,均未能查到Laminin A5的信息。文中通过生物信息学分析,首次确认了猪Laminin A5的存在,并进行了克隆和测序验证。为揭示Laminin基因家族在猪诱导多能干细胞(i PSCs)中的表达特性,检测了Laminin在猪各组织、体细胞和i PS细胞中的不同表达模式。发现Laminin B1基因在猪多能干细胞中存在特异性可变剪接体(LAMB1-a),且该可变剪切体的表达量与猪多能干细胞的重编程程度呈正相关。为进一步揭示和利用Laminin作为细胞外基质,用于猪多能干细胞的获取和培养优化奠定了基础。

关键词：猪多能干细胞层粘连蛋白 LAMA5 表达模式分析

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携带CD163报告载体的猪诱导多能干细胞株的建立

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生物工程学报 2023年第1期39卷 192-203页

作者：岳威张炬庆吴晓龙杨昕淳沈巧艳于帅祝振硕王承宝张仕强华进联西北农林科技大学动物医学院、陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物医学院预防兽医系陕西杨凌712100

猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)是包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在内的多种高致病病毒的受体细胞,是研究病毒与宿主互作机制的重要模型。然而PAM来源有限... 详细信息

猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)是包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在内的多种高致病病毒的受体细胞,是研究病毒与宿主互作机制的重要模型。然而PAM来源有限,难以满足当前需求。利用猪诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)向巨噬细胞定向诱导是解决PAM细胞数量不足的有效方法。CD163是PAM细胞的重要标记,也是PRRSV等病毒的主要受体。建立实时报告CD163激活程度的报告系统对于建立并优化猪iPSCs向PAM的诱导分化体系具有指导意义。本研究利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统,设计靶向CD163终止密码子的sgRNA并构建相应的打靶载体,将其导入到猪PAM中的检测报告系统。进一步将该报告系统导入猪iPSCs中,通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和EDU染色等手段来检测其安全性。将猪内源CD163的报告载体系统转染至原代PAM中,检测到了红色荧光的表达,证明了该载体系统的可靠性;将CD163-reporter系统转染至猪iPSCs中,获得CD163 reporter-iPSCs。结果表明,CD163 reporter-iPSCs可以维持正常的多能性基因的表达,并具有与正常猪iPSCs一致的克隆形态和增殖能力。证实成功构建了CD163的报告载体,并将其转染至猪iPSCs,获得含有CD163报告载体的猪iPSCs系。该报告载体既不影响猪iPSCs的多能性,又能够实时指示CD163的表达,为深入解析猪iPSCs分化为PAM的机制以及解析PRRSV等重大病原与宿主的互作研究奠定了基础。

关键词： CD163 猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导多能干细胞报告载体 CRISPR/Cas9 猪

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奶山羊ESCO2基因克隆及其功能的初步研究

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农业生物技术学报 2016年第2期24卷 176-185页

作者：李波庄梦茹李娜华进联西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心

乙酰基转移酶2(establishment of sister chromatid cohesion N-acetyltransferase 2,ESCO2)主要作用为调控姐妹染色单体的凝聚,在细胞DNA双链断裂损伤修复中发挥着重要的作用。本研究以关中奶山羊(Capra hircus)作为实验材料,利用PCR、... 详细信息

乙酰基转移酶2(establishment of sister chromatid cohesion N-acetyltransferase 2,ESCO2)主要作用为调控姐妹染色单体的凝聚,在细胞DNA双链断裂损伤修复中发挥着重要的作用。本研究以关中奶山羊(Capra hircus)作为实验材料,利用PCR、q RT-PCR、生物信息学、免疫荧光染色等方法,分析其基因序列以及表达规律,克隆ESCO2基因,同时构建真核表达载体p ESCO2-IRES2-Ac GFP并转染奶山羊雄性生殖干细胞(m GSCs-I-SB细胞)。结果表明,奶山羊ESCO2基因(Gen Bank登录号:KP341998.1)全长为1 834bp,编码612个氨基酸。与其他物种相比,均具有较高的同源性,与牛(Bos taurus)的同源性高达97.82%。ESCO2基因在奶山羊的多个器官中广泛表达,尤其在心脏、肺部表达较高,肝、脾、睾丸次之。ESCO2基因从山羊出生后开始持续高表达,且表达量随山羊年龄增加而升高,一岁时达到最高,随之开始下降。转染p ESCO2-IRES2-Ac GFP表达载体的m GSCs-I-SB细胞的减数分裂相关基因表达量明显提高,证明ESCO2基因在奶山羊减数分裂和精子发生过程中发挥了重要的作用。本研究结果为进一步研究奶山羊精原细胞减数分裂的精密调控提供了分子基础。

关键词：乙酰基转移酶2(ESCO2) 减数分裂雄性生殖干细胞(m GSCs) 奶山羊

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超表达细胞周期蛋白A2基因(CycA2)抑制猪卵母细胞PB1体外排出

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农业生物技术学报 2016年第9期24卷 1420-1428页

作者：陈瑞余博李科瑛雷安民西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心

在卵母细胞成熟过程中,细胞周期蛋白A2(Cyclin A2,Cyc A2)可与不同周期蛋白依赖激酶(cyclindependent kinase,CDK)相互作用,通过其周期性表达和降解,参与调控细胞周期。为探讨Cyc A2基因对猪(Sus scrofa)卵母细胞体外成熟的影响,本研究... 详细信息

在卵母细胞成熟过程中,细胞周期蛋白A2(Cyclin A2,Cyc A2)可与不同周期蛋白依赖激酶(cyclindependent kinase,CDK)相互作用,通过其周期性表达和降解,参与调控细胞周期。为探讨Cyc A2基因对猪(Sus scrofa)卵母细胞体外成熟的影响,本研究从猪卵巢中克隆Cyc A2基因,构建野生型p Venus-Cyc A2和非降解型p Venus-DN157Cyc A2真核表达载体,转染至hela细胞,确认重组质粒的表达及定位情况。将p Venus-Cyc A2、p Venus-DN157Cyc A2体外转录为c RNA,对猪卵母细胞进行显微注射后,体外成熟培养一段时间后统计第一极体排出率,并观察其表达和定位。结果显示,显微注射了p Venus-Cyc A2、p Venus DN157Cyc A2c RNA的卵母细胞,其第一极体(first polar body,PB1)的排出率与对照组相比极其显著降低(P<0.001,);用Roscovitine处理的p Venus-DN157Cyc A2表达的卵可恢复排出PB1的能力,其PB1排出率与对照组相比差异不显著。本研究首次揭示了Cyc A2基因对猪卵母细胞体外成熟过程的影响,为探索Cyc A2参与染色体分离调控的分子机制提供理论依据,同时也为进一步研究第二次减数分裂过程中Cyc A2基因的作用提供了一个平台。

关键词：猪卵母细胞细胞周期蛋白A2(CycA2) 体外转录显微注射成熟培养

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