检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2013年第9期29卷 825-832页

作者：宋文聪华进联西北农林科技大学动物医学院、陕西省干细胞工程技术研究中心、农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100

早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF),也被称为ZBTB16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)或锌指蛋白145(zinc finger protein 145,ZFP145),是我国学者发现与人类疾病相关的蛋白质.人类PLZF的是由673个氨基酸残基组成的转录抑制因子,属于蛋白质超家族.该超家族以N端的BTB/POZ(bric-à-brac,tramtrack,brad complex(BTB)/poxvirus zinc finger(POZ)domain)结构为特征.PLZF蛋白的BTB/POZ结构与个体发育、胚胎发生、染色体的重构等事件相关.近年发现,PLZF在哺乳动物雄性生殖干细胞(male germline stem cells,mGSCs)发育分化过程中也发挥重要作用.探讨PLZF的生物学功能和作用机制,将有助于理解其在mGSCs发育过程中的重要作用.本文就PLZF在维持mGSCs自我更新和在发育分化调控中的作用给予综述.

关键词：早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF) 雄性生殖干细胞自我更新发育分化哺乳动物

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小鼠Dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染

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中国兽医学报 2013年第2期33卷 236-240页

作者：王龙周莹胡玥于萌白耀富华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证... 详细信息

根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证正确。将pEGFP-C1-Dazl质粒转染293和NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞。Dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,Dazl基因和GFP共同定位于胞质部分。pEGFP-C1-Dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因Dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础。

关键词：小鼠生殖细胞 Dazl基因绿色荧光蛋白

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小鼠H1foo逆转录病毒载体的构建及表达

小鼠H1foo逆转录病毒载体的构建及表达

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第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会

作者：许荣张春林宁静李建雷安民西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100

本试验通过克隆小鼠的Hlfoo基因，构建逆转录病毒载体pMX-HIfoo，验证其在体细胞中的表达定位。结果发现，Hlfoo逆转录病毒载体在分子水平上检测得到Hlfoo目的条带，且条带清晰明亮。蛋白水平上，Hlfoo与细胞核共定位，而在GFP感染组... 详细信息

本试验通过克隆小鼠的Hlfoo基因，构建逆转录病毒载体pMX-HIfoo，验证其在体细胞中的表达定位。结果发现，Hlfoo逆转录病毒载体在分子水平上检测得到Hlfoo目的条带，且条带清晰明亮。蛋白水平上，Hlfoo与细胞核共定位，而在GFP感染组和未做感染处理组中Hlfoo抗体并未见着色。这说明了载体构建在分子水平和蛋白水平均验证正确。这有利于进一步研究Hlfoo在诱导多能性干细胞方面是否发挥作用，从而探讨Hlfoo在体细胞重编程中是否存在保守的功能。

关键词：哺乳动物组蛋白转录病毒载体基因表达

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牛PLCζ-Venus真核载体的构建以及其在Hela细胞中的初步表达

牛PLCζ-Venus真核载体的构建以及其在Hela细胞中的初步表达

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第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会

作者：宁静许晓磊许荣李建雷安民西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100

本文从牛睾丸组织中提取总RNA,经RT-PCR克隆获得牛PLCδ1CDS全长，连接到本实验室提供的pMD19-T载体上，经DHSα转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切验证后送检测序。将测序结果与NCBI上公布的牛PLCδ1序列进行比对，测序正确后，选取鉴... 详细信息

本文从牛睾丸组织中提取总RNA,经RT-PCR克隆获得牛PLCδ1CDS全长，连接到本实验室提供的pMD19-T载体上，经DHSα转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切验证后送检测序。将测序结果与NCBI上公布的牛PLCδ1序列进行比对，测序正确后，选取鉴定结果正确的质粒和空pVenus载体各自进行KpnI和NheI双酶切并纯化回收目的片段和线性化的pVenus载体，通过T4DNA连接酶将目的片段和线性化的pVenus载体连接，后经DHS。转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切鉴定，而后在进行高纯度的质粒提取。提前在24孔板上接种培养Hela细胞，待其均匀分布贴壁达到70％-80%时用PLCδ-Venus转染Hela细胞，转染程序按照LipofectamineTM2000说明书进行操作。转染24h后在荧光倒置显微镜下观察荧光表达情况。以空载体pVenus组和未转染组为对照。结果经PCR扩增PLC基因，产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，在约1900bp处出现特异性条带，回收的目的DNA片段连接pMD-19T在感受肤大肠杆菌中扩增，将所得质粒进行双酶切鉴定和测序对比，结果证明所回收的DNA片段确为牛PLCδl。在PLCδ-Venus转染Hela细胞相较于对照组死亡较多，在荧光显微镜下观察，出现了绿色荧光，荧光蛋白在细胞核周围呈弥散状分布。在pVenus转染组绿色荧光蛋白在整个细胞中都有分布。未转染组在荧光显微镜下观察时未观察到绿色荧光出现。讨论试验结果说明载体构建在分子水平和蛋白水平均验证正确。这有利于进一步研究牛PLCδ1在牛卵母细胞激活中的作用，并且为牛卵母细胞激活方法的改进与生物学激活方法的研究奠定基础。

关键词：牛卵母细胞真核表达载体 Hela细胞

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关中奶山羊Prm1基因的克隆及真核表达

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中国农业科学 2012年第6期45卷 1183-1190页

作者：李明昭刘超孙军伟朱海鲸曹晖吕晓仇普斌华进联西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心/农业部动物生物技术重点开放性实验室

【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blottin... 详细信息

【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基因CDS序列,与其它物种比对,发现其与许多物种具有较高的同源性,与牛的同源性高达97.4%,最后在GC1细胞和人的脐带基质细胞中进行了超表达。【结论】得到了关中奶山羊Prm1基因的表达规律及完整的CDS序列。

关键词：关中奶山羊 Prm1基因基因克隆表达规律

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哺乳动物精原干细胞的分子标记及调控

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四川动物 2012年第4期31卷 679-683,687页

作者：于萍华进联西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100 农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是一群生活在睾丸特殊微环境中并能自我更新和具有多向分化潜能的细胞,是精子发生的基础。近年来,通过对SSCs表面的α6-和β1-整合素、CD9、GFRA1等主要标记分子,以及对GDNF、Plzf、泛素、LI... 详细信息

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是一群生活在睾丸特殊微环境中并能自我更新和具有多向分化潜能的细胞,是精子发生的基础。近年来,通过对SSCs表面的α6-和β1-整合素、CD9、GFRA1等主要标记分子,以及对GDNF、Plzf、泛素、LIF等决定SSCs自我更新和分化的多种细胞因子和基因的研究发现,目前在SSCs的分离、鉴定和生物学特性方面已获得新的成果。本文简述了目前哺乳动物SSCs主要的标记分子及自我更新与分化的调控机理,以期为该领域及其他干细胞研究提供一定的借鉴。

关键词：精原干细胞调控机制自我更新分化

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诱导人脐带间充质干细胞向心肌细胞分化及对小鼠心肌梗死的治疗作用

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中国实验动物学报 2012年第5期20卷 9-14,I0001-I0003页

作者：仇普斌刘超李伟潘少辉刘文帅华进联西北农林科技大学动物医学院、陕西省干细胞工程技术研究中心、农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100 江苏省北科生物科技有限公司江苏泰州市225300 杨凌示范区医院杨凌712100

目的研究脐带间充质干细胞(UC-MSC)体外分化为心肌细胞的可行性以及观察UC-MSC体内移植对心肌梗死模型小鼠的治疗效果。方法 10μmol/L 5-氮胞苷(5-aza)体外诱导UC-MSC 14 d,通过RT-PCR、免疫荧光染色鉴定其分化效果;采用腹腔注射盐酸... 详细信息

目的研究脐带间充质干细胞(UC-MSC)体外分化为心肌细胞的可行性以及观察UC-MSC体内移植对心肌梗死模型小鼠的治疗效果。方法 10μmol/L 5-氮胞苷(5-aza)体外诱导UC-MSC 14 d,通过RT-PCR、免疫荧光染色鉴定其分化效果;采用腹腔注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)每只3.0 mg/(kg/d),制作心肌梗死模型鼠;在注射ISO 48 h后,实验组将DAPI标记的UC-MSC经两次尾静脉移植给心肌梗死模型鼠,移植后第4周和第8周,分别采集实验小鼠的心脏、脾脏,以未移植细胞组的小鼠心肌损伤模型作为对照,通过心脏指数和脾脏指数测量,免疫荧光和碱性复红-苦味酸(HBFP)染色鉴定其体内分化和修复作用。结果 RT-PCR分析表明诱导的UC-MSC表达心肌特异性基因:心肌α-actin、TBX5、GATA4和NKx2.5,免疫荧光染色显示诱导细胞呈心肌α-actin和NKx2.5阳性,且呈双核现象。尾静脉移植后第4周和第8周,模型受体鼠心脏均发现有DAPI阳性细胞迁移至心肌组织且呈现心肌α-actin阳性,HBFP染色及心脏和脾脏指数结果显示移植UC-MSC对心肌损伤的模型鼠有明显的修复和治疗效果。结论 UC-MSC在体外经5-aza诱导可定向分化为心肌细胞,尾静脉体内移植UC-MSC对心肌损伤小鼠有明显的治疗效果。

关键词：脐带间充质干细胞心肌细胞移植心肌梗死模型小鼠治疗

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奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养

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中国兽医学报 2011年第4期31卷 583-588,593页

作者：朱海鲸华进联宋文聪黄建升田泽华西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100

以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其... 详细信息

以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其表达精原干细胞和多能性干细胞的相关特异性标记:碱性磷酸酶(AP)、CD49f、CD133、C-Myc、Oct4和Klf4阳性,证明睾丸组织冷冻可以提供一种有效的奶山羊精原干细胞的保存方法。试验中所使用的低温保存方法简便易行,效果良好,表明这些方法可为癌症治疗等造成的无精症及少精症等不育症患者的医治以及一些珍稀濒危物种和优良畜禽的生殖细胞保存提供一种简捷有效的途径。

关键词：睾丸组织低温保存精原干细胞奶山羊

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维生素A类化合物与生殖细胞发育

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解剖学杂志 2011年第4期34卷 548-552页

作者：曹晖华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100

维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活... 详细信息

维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活性代谢所产生的一种脂溶性的小分子物质，主要由环乙烯、侧链和极性基团组成。根据其双键构型的不同，可分为反式视黄酸和顺式视黄酸。

关键词：维生素A 生殖细胞发育类化合物肿瘤细胞生长组织分化小分子物质视黄酸细胞增长

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小鼠Dazl基因的克隆和真核表达载体构建

小鼠Dazl基因的克隆和真核表达载体构建

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：王龙胡玥华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室

小鼠Dazl(deleted in azoospermia like)是DAZ基因家族的成员之一,编码RNA结合蛋白。Dazl基因在生殖细胞中特异表达,参与调节生殖细胞的发育和分化,是精子发生过程中减数分裂的主要调控因子。Dazl基因突变或不表达将导致精子发生过程中... 详细信息

小鼠Dazl(deleted in azoospermia like)是DAZ基因家族的成员之一,编码RNA结合蛋白。Dazl基因在生殖细胞中特异表达,参与调节生殖细胞的发育和分化,是精子发生过程中减数分裂的主要调控因子。Dazl基因突变或不表达将导致精子发生过程中减数分裂障碍和雄性不育。研究Dazl基因及其编码蛋白对探索配子发生和成体生殖缺陷及修复具有重要意义。克隆小鼠Dazl基因编码区CDS,与pEGFP-C1拼接,构建成Dazl-C1载体,转染真核绌胞验证Dazl蛋白的定位及其超表达引起的细胞的表型及基因表达变化。将Dazl基因编码区CDS与逆转录病毒载体pMSCV拼接,构建Dazl-pMSCV载体,转染PT67细胞获得编码Dazl蛋白的病毒。结果显示,PCR克隆得到的Dazl基因CDS序列与NCBI上公布的序列完全一致。Dazl-C1载体转染293T和MEF细胞,都呈现GFP绿色荧光,并且大多数细胞有较明显的胞质定位现象。Dazl-pMSCV载体转染PT67后收细胞和上清液病毒颗粒分别进行RNA提取和RT-PCR反应,证明转染的PT67细胞基因组和病毒颗粒基因组中都含有Dazl基因CDS序列。构建了编码Dazl蛋白的两个真核载体,并做了初步验证,为进一步探究Dazl基因对生殖细胞发育分化调控奠定了基础。

关键词： Dazl基因超表达减数分裂生殖小鼠

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