检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2008年第5期16卷 804-809页

作者：王晗窦忠英王华岩西北农林科技大学动物医学院陕西省农业分子生物学重点实验室陕西省干细胞工程技术研究中心

取人羊水标本进行羊水干细胞原代,分离培养,并探讨人羊水标本性状等因素对原代分离培养的影响。结果表明,分离的羊水干细胞表达Oct-4等胚胎干细胞和CD29等成体干细胞的特异基因,细胞生长迅速,增殖能力较强,并可分化为Nestin阳性的神经... 详细信息

取人羊水标本进行羊水干细胞原代,分离培养,并探讨人羊水标本性状等因素对原代分离培养的影响。结果表明,分离的羊水干细胞表达Oct-4等胚胎干细胞和CD29等成体干细胞的特异基因,细胞生长迅速,增殖能力较强,并可分化为Nestin阳性的神经细胞和α-actin阳性的心肌细胞。同时,在羊水干细胞原代培养时,羊水标本性状在一定程度上影响细胞的贴壁数量及贴壁时间。羊水标本细胞的贴壁时间孕中期(4.7±0.6)d与孕晚期(6±0.5)d有明显差异(P<0.05),孕晚期贴壁时间较长。羊水中血液污染程度对贴壁时间有明显影响,重度污染组(10.8±0.3)d与无污染组(6±0.5)d、轻度污染组(6.3±0.6)d贴壁时间差异均显著(P<0.05)。羊水体积对原代细胞的贴壁数量和细胞贴壁时间有一定影响,羊水体积增大贴壁时间延长,但差异不显著,而贴壁细胞数量随羊水体积增加而增加,各组之间差异显著(P<0.05)。实验系统地检测了羊水干细胞原代培养的影响因素,为羊水干细胞研究提供了可以借鉴的资料,同时分离得到的羊水干细胞,具有分化为神经细胞和心肌细胞的潜能,有望作为种子细胞进行临床应用。

关键词：人羊水干细胞贴壁细胞数量贴壁时间

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哺乳动物精原干细胞的分子标记及调控

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四川动物 2012年第4期31卷 679-683,687页

作者：于萍华进联西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100 农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是一群生活在睾丸特殊微环境中并能自我更新和具有多向分化潜能的细胞,是精子发生的基础。近年来,通过对SSCs表面的α6-和β1-整合素、CD9、GFRA1等主要标记分子,以及对GDNF、Plzf、泛素、LI... 详细信息

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是一群生活在睾丸特殊微环境中并能自我更新和具有多向分化潜能的细胞,是精子发生的基础。近年来,通过对SSCs表面的α6-和β1-整合素、CD9、GFRA1等主要标记分子,以及对GDNF、Plzf、泛素、LIF等决定SSCs自我更新和分化的多种细胞因子和基因的研究发现,目前在SSCs的分离、鉴定和生物学特性方面已获得新的成果。本文简述了目前哺乳动物SSCs主要的标记分子及自我更新与分化的调控机理,以期为该领域及其他干细胞研究提供一定的借鉴。

关键词：精原干细胞调控机制自我更新分化

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牛sox2基因的克隆及重组反转录病毒载体的构建

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生物工程学报 2009年第10期25卷 1464-1469页

作者：辛晓玲吕长荣陈冬梅窦忠英西北农林科技大学动物医学院陕西省农业分子生物学重点实验室国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心杨凌712100 河南省农业科学院畜牧兽医研究所郑州450002

为了构建包含牛sox2基因编码序列的重组反转录病毒载体,获得有感染性的病毒颗粒,本研究以胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR方法克隆出牛sox2基因的开放阅读框序列,将其亚克隆至pMD18-T载体并测序。结果表明获得的基因片段与发表的牛sox2... 详细信息

为了构建包含牛sox2基因编码序列的重组反转录病毒载体,获得有感染性的病毒颗粒,本研究以胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR方法克隆出牛sox2基因的开放阅读框序列,将其亚克隆至pMD18-T载体并测序。结果表明获得的基因片段与发表的牛sox2基因序列(Gen Bank Accession ***-001105463)高度同源;将测序正确的重组T载体用EcoRI和BglII酶切,基因片段插入反转录病毒载体pMSCVneo的相同酶切位点,成功构建了重组反转录病毒载体pMSCV-sox2。采用脂质体法用pMSCV-sox2转染包装细胞PT67,同时用pMIG(含绿色荧光蛋白)作为阳性对照,经流式细胞仪测定,该载体转染效率达到68.3%;转染后PT67细胞经G418筛选得到稳定的产毒细胞株,其病毒滴度达8.16×107CFU/mL,为下一步特定因子诱导牛体细胞转变为牛iPS细胞的研究奠定了基础。

关键词：牛 sox2基因 iPS细胞反转录病毒载体

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兔脂肪间质干细胞的分离培养与鉴定

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中国兽医科学 2006年第9期36卷 733-737页

作者：马勇江杨学义窦忠英李玉谷张媛华南农业大学兽医学院广东广州510642 西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100

取兔腹股沟皮下脂肪组织,用Ⅰ型胶原酶消化,分离培养脂肪间质干细胞(MSCs),并用免疫组化和体外诱导分化方法对其表面分子标志和多向分化潜能进行鉴定。结果显示,兔脂肪组织中能够分离培养出脂肪MSCs,该类细胞表达CD29、CD44和CD105,不表... 详细信息

取兔腹股沟皮下脂肪组织,用Ⅰ型胶原酶消化,分离培养脂肪间质干细胞(MSCs),并用免疫组化和体外诱导分化方法对其表面分子标志和多向分化潜能进行鉴定。结果显示,兔脂肪组织中能够分离培养出脂肪MSCs,该类细胞表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34、CD45及HLA-DR表面分子标志,并具有可分化为脂肪细胞、神经细胞和成骨细胞的多向分化潜能,证实兔脂肪组织中存在具有多向分化潜能的MSCs。

关键词：脂肪组织间质干细胞兔

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梗阻性无精子症患者睾丸精子左旋肉碱培养后关键基因表达量的变化研究

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中华男科学杂志 2010年第6期16卷 504-509页

作者：师娟子张姗姗张洲梁倩石玉华进联孙婷陕西省妇幼保健院辅助生殖中心陕西西安710003 西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100

目的:探讨肉碱对人精子活力的影响及其对男性不育的治疗作用。方法:以梗阻性无精子症患者睾丸穿刺取得的精子为研究对象,通过普通培养液、培养液中添加100mmol/L及250mmol/L肉碱进行培养,比较培养前后精子活动率的变化,以及用RT-PCR检... 详细信息

目的:探讨肉碱对人精子活力的影响及其对男性不育的治疗作用。方法:以梗阻性无精子症患者睾丸穿刺取得的精子为研究对象,通过普通培养液、培养液中添加100mmol/L及250mmol/L肉碱进行培养,比较培养前后精子活动率的变化,以及用RT-PCR检测男性生殖细胞特异性基因Vasa、Dazl、Acr、Prm1及ATPase6.0表达量的变化,探讨左旋肉碱与有关精子发生和成熟过程的重要功能基因表达的关系。结果:培养24～72h,添加100mmol/L的左旋肉碱培养液运动精子数明显较未添加和添加250mmol/L组高(P<0.01);100mmol/L左旋肉碱培养液组中典型的快速前向运动精子数明显较多,巴氏染色法观察其具有正常的精子结构,RT-PCR检测表明100mmol/L的肉碱可提高精子中Acr、Prm1、Dazl及ATPase6.0基因的表达量,而250mmol/L的肉碱组Dazl、Acr、Prm1基因的表达减少。结论:合适浓度的左旋肉碱可通过上调一些生殖相关基因的表达使得睾丸精子培养后活力增强,有利于对睾丸穿刺患者行单精子注射时精子的选择。如培养液中肉碱浓度过高,可能由于肉碱的毒性作用,反而使得这些基因的表达量减少。

关键词：左旋肉碱精子活力男性不育 RT-PCR 梗阻性无精子症

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异种核移植技术与线粒体遗传

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自然科学进展 2008年第12期18卷 1369-1373页

作者：王志伟雷安民西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100

线粒体具有自身的遗传物质,在细胞生长发育过程中起着重要作用,但同时自身的增殖又受到细胞核的严格调控.克隆动物的线粒体遗传牵涉到治疗性克隆中干细胞的线粒体来源与组成,对干细胞在临床医学的应用有着重要影响.文中综述了线粒体遗... 详细信息

线粒体具有自身的遗传物质,在细胞生长发育过程中起着重要作用,但同时自身的增殖又受到细胞核的严格调控.克隆动物的线粒体遗传牵涉到治疗性克隆中干细胞的线粒体来源与组成,对干细胞在临床医学的应用有着重要影响.文中综述了线粒体遗传学的研究和异种细胞核移植中的线粒体遗传问题上,提出了异种细胞核移植研究的策略.

关键词：克隆动物线粒体异种细胞核移植

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小鼠pMSV-Slfn5-GFP表达质粒构建及基因结构分析

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重庆医学 2017年第22期46卷 3033-3035页

作者：况春燕杨藩贵州省人民医院心内科贵阳550002 西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100

目的构建小鼠pMSV-Slfn5-GFP基因重组表达质粒及基因结构分析。方法提取小鼠肝脏组织中总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增小鼠Slfn5编码序列片段,并与pGEM-T Easy载体连接,连接产物转化到大肠埃希菌DH5α中。挑取阳性克隆提取质粒,经限制性... 详细信息

目的构建小鼠pMSV-Slfn5-GFP基因重组表达质粒及基因结构分析。方法提取小鼠肝脏组织中总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增小鼠Slfn5编码序列片段,并与pGEM-T Easy载体连接,连接产物转化到大肠埃希菌DH5α中。挑取阳性克隆提取质粒,经限制性内切酶HpaⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定。酶切鉴定正确的质粒送Macrogen USA测序。测序正确的质粒通过HindⅢ和XhoⅠ与pMSV-GFP连接,并命名为pMSV-Slfn5-GFP。通过UCSC(http://***/)分析小鼠Slfn5及其家族基因组结构,并通过NCBI确定Slfn5的蛋白结构域。结果 Slfn5全长基因序列克隆到表达载体pMSV-GFP中,酶切鉴定片段大小为2.65kb。Slfn5的AAA_4蛋白结构域由***确定了该结构在Slfn蛋白家族中的保守性。结论成功构建了小鼠pMSV-Slfn5-GFP全长基因表达载体。

关键词： pMSV-Slfn5-GFP 构建基因结构分析

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家畜多能干细胞的研究现状与应用（英文）

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农业生物技术学报 2016年第5期24卷 747-754页

作者：郑丽明华进联李光鹏西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心内蒙古大学哺乳动物生殖生物学生物技术教育部重点实验室

多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)包括从胚胎内细胞团中分离出的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),外胚层干细胞(epiblast stem cells,Epi SCs),从原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离出的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EGCs)和诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)。这些细胞都具有向各种类型细胞发育的潜能,因此,PSCs为再生医学的发展,人类基因疾病的动物模型的建立,异种器官移植和高质量抗病新品种的培育提供了有效的途径。迄今为止,PSCs在小鼠(Mus musculus)模型和人类物种已经做了大量研究,同时,家畜的ESCs和iPSCs也取得了有效的进展,表明其不仅可以应用于特定家畜优良品性的稳定遗传和优育,而且可以以家畜为载体生产人类需要的化学药品和抗体,甚至应用在人类疾病的临床前应用中。然而,家畜的ESCs相对来说是难分离和富集的,体外培养建立稳定的ESCs系具有更大的难度和挑战。近年来,得益于对家畜ESCs和相关iPSCs相关的持续研究,已初步揭示了家畜ESCs的独特生物学特性。PSCs已经成为生命科学和高科技农业和生物学一个创新的研究领域。在本文中,本文综述了家畜PSCs的发展历程与应用前景。

关键词：多能干细胞(PSCs) 胚胎干细胞(ESCs) 诱导多能干细胞(iPSCs) 家畜繁育转基因动物动物模型

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父系遗传背景对小鼠超排效果及孤雌胚胎体外发育的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2008年第6期36卷 1-4页

作者：严兴荣余树民雷安民沈文正黄伟伟贾文文窦忠英西北农林科技大学动物医学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心陕西杨凌712100 四川农业大学动物科技学院四川雅安625000

【目的】研究父系遗传背景对小鼠超排效果及其孤雌胚胎体外发育的影响。【方法】以3种近交系雄鼠(129/Sv、C3H和C57BL/6J)与昆明系(KM)雌鼠的杂交一代(F1)及KM自交系小鼠为研究对象,对其进行超排处理,比较3种不同遗传背景的杂交小鼠与对... 详细信息

【目的】研究父系遗传背景对小鼠超排效果及其孤雌胚胎体外发育的影响。【方法】以3种近交系雄鼠(129/Sv、C3H和C57BL/6J)与昆明系(KM)雌鼠的杂交一代(F1)及KM自交系小鼠为研究对象,对其进行超排处理,比较3种不同遗传背景的杂交小鼠与对照KM自交系小鼠的超排效果,分析其孤雌胚胎体外激活率和囊胚率的差异。【结果】3种F1代杂交小鼠与对照KM的超排效果和孤雌胚胎的激活率没有显著差异(P>0.05);129/Sv×KM、C3H×KM孤雌胚胎的囊胚率显著高于其他各组(P<0.05);C57BL/6J×KM与KM×KM之间孤雌胚胎囊胚发育率的差异不显著(P>0.05)。【结论】129/Sv、C3H和C57BL/6J父系遗传背景对杂交F1代小鼠的超数排卵数量和激活率没有影响,但引入129/Sv和C3H父系遗传背景可促进杂交F1代小鼠孤雌胚胎的体外发育,提高囊胚发育率。

关键词：小鼠遗传背景卵母细胞孤雌发育

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脂肪间质干细胞修复犬关节软骨损伤的研究

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动物医学进展 2024年第1期45卷 72-76页

作者：滕鑫艾力·艾尔肯吕长荣张欣珂赵献军华进联西北农林科技大学动物医学院/陕西省干细胞工程技术研究中心陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物医学院西安动物医院陕西杨凌712100 天津百欧派生物技术有限公司天津300000

以手术方法建立2对共4处犬关节软骨组织损伤;使用无血清细胞培养液为对照,以标记有绿色荧光蛋白的犬脂肪间充质干细胞进行移植治疗试验。病理模型犬进行常规饲养15周后,对病理模型进行取样并系统检测。结果显示,试验组较对照组有更大面... 详细信息

以手术方法建立2对共4处犬关节软骨组织损伤;使用无血清细胞培养液为对照,以标记有绿色荧光蛋白的犬脂肪间充质干细胞进行移植治疗试验。病理模型犬进行常规饲养15周后,对病理模型进行取样并系统检测。结果显示,试验组较对照组有更大面积和体积的新生关节软骨组织。新生软骨样组织呈绿色荧光蛋白(GFP)阳性。试验组与对照组的新生组织HE染色显示,试验组的细胞外基质染色较对照组更加均一,基质切面更加平整光滑。透明软骨的标志性基因COL2a1的免疫荧光染色显示,试验组可见较强的COL2a1阳性染色,而对照组仅有少量微弱的阳性染色。实时荧光定量PCR检测结果显示,试验组的COL2a1含量显著高于对照组(P<0.05)。试验结果表明,直接移植原代犬脂肪间充质干细胞到关节腔可有效修复犬软骨组织缺损,为干细胞治疗临床软骨组织损伤提供了科学依据。

关键词：间充质干细胞软骨组织损伤干细胞移植治疗犬

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