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文献类型

25 篇 会议

馆藏范围

25 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

学科分类号

24 篇 农学
- 24 篇 兽医学

主题

6 篇 猪繁殖与呼吸综合...
5 篇 hev
5 篇 prrsv
5 篇 禽戊型肝炎病毒
3 篇 结构蛋白
3 篇 宿主细胞
3 篇 鸡传染病
2 篇 戊型肝炎病毒衣壳...
2 篇 抗体检测
2 篇 非结构蛋白
2 篇 猪繁殖与呼吸综合...
2 篇 加氧酶
2 篇 开放阅读框蛋白
2 篇 鸡肝脏
1 篇 靶向治疗
1 篇 癌症
1 篇 猪戊型肝炎病毒
1 篇 抗病毒功能
1 篇 宿主因子
1 篇 戊型肝炎病毒

机构

25 篇 西北农林科技大学
2 篇 农业部兽用药物与...
1 篇 department of pa...
1 篇 department of pa...
1 篇 农业部兽用药物与...
1 篇 中国农业科学院哈...
1 篇 大连医科大学

作者

25 篇 周恩民
10 篇 赵钦
10 篇 王鑫杰
9 篇 刘宝元
7 篇 孙亚妮
6 篇 肖书奇
5 篇 陈宜阳
5 篇 张昂克
5 篇 李慧霞
4 篇 黄柏成
4 篇 张冲
4 篇 李琼毅
4 篇 李娜
4 篇 刘红亮
4 篇 王承宝
3 篇 李治军
3 篇 王妍
3 篇 赵冀楠
2 篇 张茂东
2 篇 姬鹏超

语言

25 篇 中文

检索条件"机构=西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站"

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排序：

禽戊型肝炎病毒类病毒样颗粒的表达及鉴定

禽戊型肝炎病毒类病毒样颗粒的表达及鉴定

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王鑫杰赵钦孙亚妮刘宝元陈宜阳党露李慧霞周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

2001年禽戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）被首次从患有肝炎脾大综合症的病鸡中分离获得,其主要导致鸡大肝大脾病或肝炎脾大综合征,引起鸡死淘率升高和产蛋量下降。禽HEV感染给养禽业造成严重经济损失,而且可能具有公共卫生学意... 详细信息

2001年禽戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）被首次从患有肝炎脾大综合症的病鸡中分离获得,其主要导致鸡大肝大脾病或肝炎脾大综合征,引起鸡死淘率升高和产蛋量下降。禽HEV感染给养禽业造成严重经济损失,而且可能具有公共卫生学意义。禽HEV不稳定易降解,很难从载毒样品中分离得到,而且迄今为止也仍没有高效的体外细胞培养体系,这在一定程度上阻碍了对其抗原性、致病性及传染性等相关研究。禽HEV与人、猪HEV在抗原性和遗传性上具有一定的相关性并且禽HEV的ORF2蛋白与人和猪HEV的同源性为50%左右,据此我们假设:禽HEV的衣壳蛋白可能会像人、猪HEV的类似,通过杆状病毒表达系统表达可以自我组装成VLPs,并且VLPs能够模拟天然禽HEV颗粒的表面空间结构及病毒抗原性和对宿主细胞的吸附性等生物学活性。此外,我们前期利用生物信息学软件对国内外已在真核和原核表达系统成功获得病毒样颗粒的人源HEV毒株的氨基酸区段比对分析,发现禽HEV（CaHEV毒株）ORF2蛋白与其相对应的氨基酸区域分别为（56-554aa）和（313-549aa）,同时利用三维结构预测数据库构建两段区段三维结构模型,验证其很有可能组装形成VLPs。对于真核表达系统:我们利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统（Invitrogen）构建获得包含上述潜在区段重组杆状病毒N55C52（56-554aa）,分别以10 MOI接毒量感染昆虫细胞系sf9和Tn5,通过SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定细胞培养上清中存在55kDa、53k)a和371kDa的单体蛋白。CsCl密度梯度离心在1.286g/cm左右存在白色条带,在Western blot检测中该条带复合物能与禽HEV单克隆抗体1B5特异性反应,说明该多聚体包含N55C52区段。而针对原核表达系统:我们利用大肠杆菌表达系统无融合标签表达p237蛋白（313-549aa）,获得34kDa左右包涵体蛋白,将该包涵体蛋白透析复性液体进行液相色谱鉴定,在分离峰中存在大于400kDa多聚体峰带,Western blot鉴定该多聚体能与禽HEV单抗1B5特异性反应,推测p237蛋白可自我组成病毒样颗粒。本课题的研究为下一步利用纳米粒度仪及透射电镜观察鉴定上述两种复合物是否为禽HEV-VLPs,进而利用病毒颗粒研究禽HEV抗原性及免疫学生物学特性提供了材料支撑。

关键词：禽戊型肝炎病毒复合物 HEV 病毒样颗粒多聚体

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血红素加氧酶-1代谢产物CO抑制PRRSV复制的研究

血红素加氧酶-1代谢产物CO抑制PRRSV复制的研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张昂克蒲锋星李娜刘红亮肖书奇周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的,对全球养猪业造成重大经济损失的猪重要传染病。我们前期研究表明,诱导和过表达血红素加氧酶1（HO-1）均能够显著抑制PRRSV在PAM及Marc145细胞中的复制,但其抑制P... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的,对全球养猪业造成重大经济损失的猪重要传染病。我们前期研究表明,诱导和过表达血红素加氧酶1（HO-1）均能够显著抑制PRRSV在PAM及Marc145细胞中的复制,但其抑制PRRSV复制的机制尚不清楚。HO-1由HMOX-1基因编码,能催化血红素降解为胆绿素（BV）,Fe及一氧化碳（CO）,它们在机体中发挥重要的抗氧化、抗凋亡及抗细胞增殖作用。那么作为HO-1代谢产物之一的CO在PRRSV感染易感细胞的过程中发挥怎样的作用?有研究表明,一氧化碳释放分子-3（CORM-3）作为一种外源性的CO供体,具有抗菌活性并且能提高小鼠在病毒血症中的存活率。另有报道,CORM有显著的抗菌活性。尽管上述研究表明CO在哺乳动物的机体中具有重要的生理及生物学功能,作为HO-1的代谢产物之一,其在PRRSV感染宿主细胞中的功能并不清楚。本课题组前期的研究表明,诱导或过表达HO-1能抑制PRRS病毒的复制,而HO-1上调表达能够促进其代谢产物之一CO的产生。那么,HO-1抑制PRRSV复制的功能是否通过CO来实现?CO在PRRSV感染过程究竟发挥什么功能?本研究在前期研究基础上利用外源性CO供体CORM-2探讨了CO对PRRSV感染易感细胞系Marc145细胞的影响。PRRSV感染细胞后,加入浓度梯度的CORM-2,48hpi收集细胞及培养上清,以检测PRRSV感染量的变化。qPCR及Western blot检测结果表明,CORM-2呈浓度梯度依赖性降低了PRRS病毒N基因的RNA及蛋白的表达水平。IFA检测结果表明,CORM-2呈现浓度梯度性抑制了PRRSV对Marc145细胞的感染。进一步测定了上清中子代病毒的滴度,结果表明,CORM-2显著抑制了细胞培养上清中子代病毒滴度。最后,利用CO特异性抑制剂-血红蛋白（Hb）与CORM-2共孵育,收集细胞样品检测PRRSV感染量的变化。qPCR及Western bolt检测结果表明,Hb部分逆转了CORM-2对PRRSV感染Marc145细胞的抑制作用。从而表明,CO能特异性的介导抗PRRSV感染Marc145细胞的作用。该研究证明了HO-1的下游代谢产物之一CO在介导HO-1的抗病毒感染过程中发挥了重要的作用,这对阐明HO-1体外抑制PRRS病毒复制的分子机制具有重要意义,也为PRRSV感染的防控提供了新的思路。

关键词： PRRSV 浓度梯度代谢产物加氧酶

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基于BAC系统的表达红色荧光蛋白的HP-PRRSV感染性克隆的构建

基于BAC系统的表达红色荧光蛋白的HP-PRRSV感染性克隆的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄柏成孔宁李琼毅张昂克王承宝周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

外源基因在重组病毒中的表达常表现出不稳定性,因此,一个可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆对于研究病毒生物学特性而言将是一个有效工具。在不同的病毒拯救系统中,细菌人工染色体(bacterial artificial chromosomes... 详细信息

外源基因在重组病毒中的表达常表现出不稳定性,因此,一个可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆对于研究病毒生物学特性而言将是一个有效工具。在不同的病毒拯救系统中,细菌人工染色体(bacterial artificial chromosomes,BAC)系统较其他拯救系统具有大片段可容性和复制的高保真性,且易于操作。为构建可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆,红色荧光蛋白(DsRed)插入至PRRSV基因组N基因和3'UTR之间,作为独立转录单元由PRRSV转录调控序列TRS2来启动转录,重组病毒在Marc-145细胞上得到拯救。在Marc-145细胞上的研究表明,拯救的病毒(rSD16/TRS2/DsRed)与亲本毒株(SD16)在生长动力学曲线和病毒滴度等生物学特性上较为一致,且红色荧光蛋白的表达在至少10代内保持着高效率的荧光密度和荧光强度,流式细胞术检测结果表明随着病毒培养时间的延长,荧光阳性细胞比率也随之增加。这一重组红色荧光高致病性PRRSV可作为研究病毒机理和生物学特征的有力工具,同时也可为其他外源标签的表达提供一个骨架式载体系统。

关键词：高致病性PRRSV DsRed 细菌人工染色体转录调控序列

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血红素加氧酶-1抑制牛病毒性腹泻病毒在靶细胞中的复制

血红素加氧酶-1抑制牛病毒性腹泻病毒在靶细胞中的复制

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：蒲锋星张冲张昂克李娜闫云欢周恩民肖书奇西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

牛病毒性腹泻病(BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的牛的一种接触性传染病。本病主要感染牛,亦可引起猪、山羊、绵羊、白尾鹿、骆驼等动物发病,给全球养殖业,尤其是养牛业造成了巨大经济损失。尽管近年来国内外学者对该病做了大量研... 详细信息

牛病毒性腹泻病(BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的牛的一种接触性传染病。本病主要感染牛,亦可引起猪、山羊、绵羊、白尾鹿、骆驼等动物发病,给全球养殖业,尤其是养牛业造成了巨大经济损失。尽管近年来国内外学者对该病做了大量研究,但对该病的致病机制仍不十分清楚。在病毒与宿主细胞的相互作用过程中,病毒的复制依赖于宿主细胞内某些基因转录及表达水平的调节。血红素加氧酶-1(1eme oxygenase-1,HO-1),是血红素代谢过程中的限速酶,研究发现,HO-1在病原感染过程中发挥着重要的调控作用,对于不同的病原感染,其发挥的作用也不尽相同,如HO-1上调表达可促进疟原虫的感染,但却抑制HIV、HCV、HBV、Ebola和PRRRSV的感染。然而,HO-1在BVDV感染过程中的作用完全未知。本论文研究了BVDV感染对宿主细胞HO-1的影响,并明确了HO-1对BVDV感染的调控作用。首先通过荧光定量PCR和Westemblot检测发现,BVDV感染显著下调了MDBK细胞中HO-1的表达水平。然后用HO-1的激动剂钴原卟啉(CoPP)处理MDBK细胞,结果发现,无论是在BVDV感染前还是感染后,用CoPP处理靶细胞均能显着抑制BVDV复制。为了证明HO-1特异性的发挥抗BVDV感染作用,进一步应用腺病毒介导的HO-1过表达和siRNA介导的HO-1敲低表达,结果表明,腺病毒介导HO-1过表达显著抑制了BVDV对MDBK细胞的感染;而HO-1特异性siRNA敲低正常MDBK细胞中的HO-1表达,则显著促进了BVDV的感染。最后,用HO-1特异性siRNA预处理靶细胞然后再用CoPP诱导HO-1表达,则部分逆转了CoPP诱导的HO-1对BVDV感染的抑制作用。该研究证明了BVDV能够下调靶细胞中的HO-1表达,而上调HO-1表达则能显着抑制BVDV在宿主细胞中的复制。上述研究表明HO-1是一种抗病毒因子,诱导HO-1表达有望成为一种抑制BVDV感染的有效防控途径。

关键词：靶细胞宿主细胞特异性牛病毒性腹泻病毒加氧酶

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猪戊型肝炎病毒抗体检测阻断ELISA方法的建立

猪戊型肝炎病毒抗体检测阻断ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：陈宜阳赵钦刘宝元孙亚妮李慧霞王鑫杰周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是一种由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的人急性病毒性肝炎。近年来,该病已成为许多发展中国家严重的公共健康问题,而我国是HEV感染的主要流行区之一。HEV感染大多数以自限性和低致死率为特点,但已... 详细信息

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是一种由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的人急性病毒性肝炎。近年来,该病已成为许多发展中国家严重的公共健康问题,而我国是HEV感染的主要流行区之一。HEV感染大多数以自限性和低致死率为特点,但已有研究发现包括孕妇在内以及一些具有免疫损伤的患者(HIV和器官移植者等)都存在HEV感染高致死性或转为慢性肝炎的风险。猪HEV是第一个动物HEV分离株,虽然其感染仅引起猪的亚临床感染,但是由于其人畜共感染性,正在被引起越来越多的重视。目前普遍认为,猪是HEV主要的自然储存宿主。因此,时刻监测猪HEV在猪群中的感染情况,为防控人HEV的感染具有重要的意义。然而,目前对猪群中猪HEV抗体的检测主要是利用商品化人HEV抗体检测ELISA试剂盒,并没有针对特异性猪HEV抗体检测试剂盒。此外,比较不同的商品化人HEV抗体ELISA试剂盒检测猪血清发现,其相互之间重合率低,特异性较差,往往造成许多假阳性和假阴性的结果。因此,为了能够准确、快速了解猪HEV在猪群中的感染情况,本实验建立了一种猪血清中猪HEV抗体检测的阻断ELISA方法,从而为猪HEV跨种系感染的防控提供方法支撑。本实验以原核表达制备的基因Ⅳ型猪HEV(CHN-SD-sHEV)的ORF2蛋白C端268个氨基酸(sORF2-C)为包被抗原,以HRP标记的针对上述蛋白的单克隆抗体1E4为阻断抗体,通过优化抗原和单抗浓度、血清最佳稀释比例等条件,确定了阻断ELISA的操作程序;同时利用已知的230份猪HEV阴性血清,确定了该方法的Cut-off值(Cut-off值=230份样品PI的平均值+2或3倍的标准差);最后,对建立的阻断ELISA方法进行了敏感性,特异性和重复性的评价,同时将该方法与Western blot和商品化人HEV抗体ELISA试剂盒的检测一致性进行了分析。结果发现,当抗原浓度为8μg/mL(100μL/孔)、HRP-1E4稀释比例为1:1000(6μg/孔),血清稀释度为1:20时为阻断ELISA方法的最佳反应条件;阴性血清检测确定的Cut-off值为16.9%;利用建立的方法对6份阳性血清进行板内及板间重复性试验,其变异系数分别为4.3%和7.9%,表明该方法具有良好的重复性;应用该方法对50份阳性血清进行敏感性试验,其敏感性为96%,对50份阴性血清进行特异性试验,其特异性为100%,表明该方法具有。较高的敏感性和特异性;通过交叉反应试验揭示,本方法不与PCV,PPV和PRRSV的阳性血清发生交叉反应;同时通过对150份临床猪血清用Western blot和商品化ELISA试剂盒检测发现,该方法与二者的一致性分别为92%和95%,33份bEIISA检测为阳性的血清中,Western Blot与ELISA试剂盒检测为阳性的个数均为33份,117份bELISA检测为阴性的血清中,Western Blot与ELISA试剂盒检测同为阴性的个数分别为105和110份。综上所述,本实验建立了一种快速、准确的猪HEV抗体检测的阻断ELISA方法,该方法的建立为猪群中猪HEV感染的流行病学调查提供了一种方法支撑。

关键词： ELISA 抗体检测猪戊型肝炎病毒阳性血清 HEV

来源：评论

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禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白与鸡肝脏组织互作蛋白的筛选

禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白与鸡肝脏组织互作蛋白的筛选

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中国畜牧兽医学会2016年学术年会、中国畜牧兽医学会禽病学分会第十八次学术研讨会

作者：李慧霞周恩民赵钦孙亚妮刘宝元王鑫杰陈宜阳王立珍西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是鸡肝炎脾大综合症或大肝大脾病的主要病原,引起蛋鸡和肉种鸡的死淘率升高和产蛋率下降,严重影响我国养禽业的健康发展。高效体外培养体系的缺乏以及对该病毒与宿主互作研究的不深入,导致对该病... 详细信息

禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是鸡肝炎脾大综合症或大肝大脾病的主要病原,引起蛋鸡和肉种鸡的死淘率升高和产蛋率下降,严重影响我国养禽业的健康发展。高效体外培养体系的缺乏以及对该病毒与宿主互作研究的不深入,导致对该病毒的细胞吸附、感染入侵、致病机理的研究几乎空白。为了探索该病毒感染宿主细胞的分子机制,本研究利用GST pull down和SOUTGUN质谱等技术首次筛选并鉴定了禽HEV衣壳蛋白与鸡肝脏组织中互作的宿主因子,为研究禽HEV吸附或侵入宿主细胞的过程及其致病机理奠定了基础。利用构建的禽HEV衣壳蛋白截短区域(aa313-539)的原核表达载体,表达获得了可溶性重组蛋白GST-ap237。将纯化的重组蛋白GST-ap237与鸡肝脏组织裂解产物互作孵育,

关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白 HEV 鸡肝脏宿主因子互作蛋白

来源：评论

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禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白与鸡肝脏组织中相互作用蛋白的筛选与鉴定

禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白与鸡肝脏组织中相互作用蛋白的筛选与鉴定

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李慧霞赵钦刘宝元王鑫杰陈宜阳王立珍周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是鸡肝炎脾大综合症或鸡大肝大脾病的主要病原。禽HEV主要感染蛋鸡,引起肝脾肿大出血等病变,并导致产蛋量下降,严重影响了蛋鸡养殖产业的发展。目前关于该病毒的感染机制尚未有明确报道,限制了该... 详细信息

禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是鸡肝炎脾大综合症或鸡大肝大脾病的主要病原。禽HEV主要感染蛋鸡,引起肝脾肿大出血等病变,并导致产蛋量下降,严重影响了蛋鸡养殖产业的发展。目前关于该病毒的感染机制尚未有明确报道,限制了该病的防治。禽HEVORF2基因编码病毒的衣壳蛋白,在病毒感染宿主过程中发挥着重要的作用。在前期对衣壳蛋白的结构分析发现。该蛋白aa 313-549区域位于天然病毒颗粒的突起部分,参与病毒与宿主细胞的相互作用。因此,为了了解禽HEV感染宿主细胞的分子机制,本研究利用GSTpull down和蛋白质谱鉴定等技术首次筛选并鉴定了禽HEV衣壳蛋白与鸡肝脏组织中相互作用的蛋白,并通过体外共转染进行了验证,为研究病毒吸附或侵入细胞等过程及其致病机理奠定了基础。本研究通过分子生物学技术,构建了禽HEV衣壳蛋白截短区域(aa313-539)的原核表达载体pGEX-6P-1-ap237,并原核表达获得了可溶性重组蛋白GST-ap237。然后将将纯化的GST-ap237与鸡肝脏组织裂解产物进行GSTPulldown,将其互作产物进行蛋白质谱鉴定,结果显示与GST对照组相比,GST-ap237实验组中特异性的蛋白有四种:分别是ATP柠檬酸合成酶/裂解酶(ACLY),甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶(BHMT),甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH),溶质载体-有机阴离子转运蛋白家族成员1A2(SLCO1A2),并且四种蛋白可能参与禽HEV感染宿主靶细胞的过程。在此基础上,我们挑选了SLCO1A2蛋白进行了进一步体外互作的验证。通过构建pCAGEN-HA-ap237,pCAGEN-HA-ORF2和pCMV-SLCO1A2-3Flag重组真核表达质粒,然后将pCAGEN-HA-ap237和pCAGEN-HA-ORF2与pCMV-SLCO1A2-3Flag共转染293T细胞后,进行Co-IP实验,Western blot实验结果表明ap237与ORF2蛋白均可与SLCO1A2形成复合物,证明SLCO1A2与病毒衣壳蛋白存在相互作用。本研究为进一步探索SLCO1A2蛋白在病毒感染宿主细胞过程中的作用,以及研究禽HEV感染宿主细胞的机制奠定了基础。

关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白 GST HEV 鸡肝脏宿主细胞相互作用蛋白筛选与鉴定

来源：评论

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猪繁殖与呼吸综合征病毒类似microRNA的病毒小RNA的预测验证及功能分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒类似microRNA的病毒小RNA的预测验证及功...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李娜肖书奇闫云欢张冲张昂克周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种严重危害世界养猪业的重要病毒性传染病,其主要特征为妊娠母猪流产、死产、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍、各年龄阶段猪的呼吸道症状,对于该病迄今仍无确实有效... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种严重危害世界养猪业的重要病毒性传染病,其主要特征为妊娠母猪流产、死产、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍、各年龄阶段猪的呼吸道症状,对于该病迄今仍无确实有效的防制措施。病毒进入细胞以及复制增殖的过程,触发和调控了宿主细胞的抗病毒免疫反应等一系列相互作用。microRNA是一类小的单链非编码RNA,其在病毒与宿主的相互作用中发挥着极其重要的转录后调控作用。一方面,病毒感染能够导致宿主编码的microRNA表达水平的改变,后者通过靶向病毒或者自身的基因,对病毒生命过程的诸多环节进行调控,有利于病毒的持续感染或发挥抗病毒作用。另一方面,许多病毒同样可以编码microRNA调节病毒及宿主基因的表达,在病毒感染宿主细胞的过程中发挥重要的作用。对于PRRSV病毒能否编码vsRNA/microRNA目前尚未有报道。本研究旨在探索PRRSV感染过程中是否存在PRRSV编码的vsRNA/microRNA调控自身的感染。通过生物信息学预测和实验验证,本研究首次证明了PRRSV编码类似microRNA的病毒小分子RNA（vsRNAs）,四个vsRNAs分别位于PRRSV基因组的ORF1a、ORF1b以及GP2a区域。利用茎环引物的实时定量PCR方法检测vsRNAs在PRRSV感染周期中的动态变化,发现PRRSV-vsRNA4感染期间显示较高的表达水平。利用人工合成的PRRSV-vsRNAs模拟物并构建相应的荧光素酶活性检测报告系统,检测发现PRRSV-vsRNA4能够特异性地结合到PRRSV基因组中非结构蛋白3（NSP3）区域。进一步利用PRRSV-vsRNAs的模拟物转染PRRSV易感细胞后进行病毒感染检测,通过观察细胞病变情况,流式细胞术,检测上清液中的病毒TCID,PRRSV的ORF7基因的mRNA转录水平,间接免疫荧光检测以及Western blot检测PRRSV的N蛋白的表达,从转录水平和转录后水平综合分析PRRSV-vsRNAs在PRRSV感染过程中对病毒复制及抗病毒免疫反应均存在负调控作用,转染PRRSV-vsRNA4模拟物能够显著抑制PRRSV在PAM细胞以及Marc-145细胞中的复制。研究发现并验证了PRRSV-vsRNA4能够靶向PRRSV不同毒株的Nsp3基因从而负调控PRRSV的感染进程,结果揭示了PRRSV能够利用病毒感染过程中所产生的vsRNAs调节自身基因的表达,进而调控病毒复制和增殖,这为我们深入了解PRRSV感染过程中病毒与宿主的相互作用以及PRRSV病毒的防控提供了全新的视角和策略。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒模拟物 PRRSV RNA 宿主细胞 microRNA 功能分析

来源：评论

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禽戊型肝炎病毒中国分离株跨种系感染兔子致病性分析

禽戊型肝炎病毒中国分离株跨种系感染兔子致病性分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘宝元赵钦孙亚妮陈宜阳李慧霞王鑫杰周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

禽、人和猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)同属于戊型肝炎病毒家族。虽然猪HEV仅引起猪的亚临床感染,但是目前越来越多的数据证实猪HEV具有人畜共感染性。而禽HEV,流行病学调查发现其感染能够导致鸡肝脾肿大和产蛋量率下降(20-40... 详细信息

禽、人和猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)同属于戊型肝炎病毒家族。虽然猪HEV仅引起猪的亚临床感染,但是目前越来越多的数据证实猪HEV具有人畜共感染性。而禽HEV,流行病学调查发现其感染能够导致鸡肝脾肿大和产蛋量率下降(20-40%),是危害养禽业尤其是蛋鸡和种禽养殖业发展的重要疾病之一。此外,禽HEV与人、猪HEV在遗传性和抗原性上具有相关性,因此禽HEV是否也像猪HEV能够感染人或其它哺乳类动物是研究的热点。最近,兔HEV的分离证明HEV感染宿主范围广泛,同时动物实验证实,猪和人HEV可以跨种系感染兔子。据此,我们推测兔子或许可以作为禽HEV跨种系研究的理想的动物模型。从某医学院实验动物中心购买6-8周龄新西兰兔16只,随机分为两组(8只/组)。其中一组每只兔子耳缘静脉注射实验室制备保存的1 rnLCaHEV悬液(GenBank accession number:GU954430;10sGE/mL);另一组注射PBS作为空白对照。攻毒后3、7、10、14、21、28、35、42、49、56、63、70和77天收集血清和粪便样品,第84天剖杀所有兔子。通过检测粪便排毒、病毒血症、血清中谷丙转氨酶(ALT)的量和抗体消长规律及观察肝脏的病理学损伤等致病性表现,分析CaHEV是否能够跨种系感染兔子。RT-PCR检测的粪便排毒结果显示在攻毒后第10天3只兔子开始排毒,其中1只兔子排毒持续到攻毒后第63天;荧光定量RT-PCR检测病毒血症结果显示在攻毒后28天所有攻毒兔子血液中病毒拷贝数达到峰值,随后开始下降;生化分析仪检测血清中ALT含量结果显示在攻毒后第14天4只兔子血清中ALT含量显著升高,随后迅速下降恢复到正常值;间接ELISA检测血清中抗禽HEV抗体结果显示3只兔子在攻毒后第14天检测到禽HEV特异性抗体,其余兔子在攻毒后第21天检测到;攻毒后第84天剖杀所有兔子,组织病理学观察结果显示所有攻毒兔子肝脏均无明显病理学损伤;通过对粪便中的病毒全基因测序结果揭示CaHEV跨种系感染兔子后,其ORF1,2和3基因均发生了部分非沉默突变,并且突变主要集中在ORF1上。对照组的所有兔子没有出现粪便排毒,病毒血症,抗体转阳,血清中ALT升高和肝脏的病理学损害。综上结果所示,CaHEV悬液耳缘静脉感染兔子后,可以成功引起兔子粪便排毒,病毒血症,血清中ALT的瞬时升高和抗体转阳的HEV感染宿主的致病表现,但其并没有引起任何的肝脏的病理学损伤。因此上述结果说明,禽HEV可以成功在兔子体内复制,但其可能仅引起亚临床感染。

关键词： HEV 中国分离株病毒血症禽戊型肝炎病毒

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猪繁殖与呼吸综合症病毒非结构蛋白Nsp9纳米抗体的制备及其抗病毒功能研究

猪繁殖与呼吸综合症病毒非结构蛋白Nsp9纳米抗体的制备及其抗病毒...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：刘红亮王妍肖书奇周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reprodluctive and respiratory syndrome,PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）感染所致的一种急性传染病,是目前严重危害我国乃至世界养猪业的重要病毒性传染病。目前尚无针对该病确实有效的防止措施,研发新型的... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reprodluctive and respiratory syndrome,PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）感染所致的一种急性传染病,是目前严重危害我国乃至世界养猪业的重要病毒性传染病。目前尚无针对该病确实有效的防止措施,研发新型的抗病毒方法已经成为PRRS研究的热点。PRRSV非结构蛋白Nsp9具有RNA依赖的RNA聚合酶活性,在病毒基因复制和转录过程中发挥着关键的作用,并且Nsp9在不同毒株之间相对比较保守,因此Nsp9是研发抗病毒药物的理想靶蛋白。本实验表达并纯化了可溶性Nsp9重组蛋白,将其免疫成年雄性双峰驼。经过5轮免疫后采集实验动物血液,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录cDNA,利用巢式PCR扩增VHH基因,将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体,转化TG1感受态细胞构建双峰驼重链抗体可变区抗体文库。利用噬菌体展示技术筛选Nsp9特异性纳米抗体,经过3轮淘选,筛选到8株Nsp9特异性纳米抗体。co-IP实验表明在细胞质中表达的纳米抗体Nb6和Nb7可以特异性结合Nsp9。为了研究纳米抗体潜在的抗病毒功能,我们构建了稳定表达Nb6和Nb7的Marc-145细胞系,细胞增殖实验结果表明纳米抗体并不影响细胞的生长。病毒感染实验结果表明Nb6可以抑制不同PRRSV毒株（SD-16、JX-A1、GD-HD、VR2332）在Marc-145细胞中的增殖。研究还发现,稳定表达Nb6的Marc-145细胞细胞病变（CPE）出现的时间要明显晚于对照组。用0.01 MOI或更低的毒量接种Marc-145细胞系,感染后5天细胞没有出现CPE,并且上清中未检测到感染性的PRRSV。进一步的研究发现,Nb6是通过抑制PRRSV基因的复制和转录进而抑制病毒的增殖。本实验制备了PRRSV Nsp特异性纳米抗体,为Nsp9及其功能的研究提供了有用的工具。其中Nb6可以抑制病毒的增殖,其有望开发成为新型的PRRS治疗药物。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 PRRSV 抗病毒功能非结构蛋白纳米抗体

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