检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2013年第1期44卷 135-139页

作者：屈延延齐雪峰南志春苏运芳李义赵献军王爱华靳亚平西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室杨凌712100

为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC... 详细信息

为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC对该作用的影响。结果显示:与未加激素对照组相比,单独添加P4或与E2同时加入均可显著抑制单独培养EEC中PR与ER的表达(P<0.05);而单独添加E2可轻微促进2种激素受体表达水平。在添加有ESC条件培养液的EEC培养模式中,E2单独作用对EEC中PR与ER表达水平无显著影响;P4单独或与E2共同作用下,EEC中PR与ER表达水平均较未加激素对照组显著降低(P<0.05)。性腺激素对单独培养及与ESC共培养模式下的EEC中PR与ER表达水平的调节作用相似,P4对山羊EEC中PR与ER表达水平具有显著抑制作用。

关键词：性腺激素子宫内膜上皮细胞免疫荧光技术激素受体

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性腺激素对山羊子宫内膜细胞TNF-α与TGF-β分泌活性的影响

引用

畜牧兽医学报 2012年第3期43卷 476-481页

作者：屈延延齐雪峰南志春王爱华赵献军靳亚平西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室杨凌712100

为探讨性腺激素对山羊子宫内膜细胞分泌活性的影响,基于套皿培养技术构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)共培养体外研究模型,通过ELISA检测性腺激素E2和/或P4对单独培养EEC中TNF-α与TGF-β分泌活性的调节作用以及ESC... 详细信息

为探讨性腺激素对山羊子宫内膜细胞分泌活性的影响,基于套皿培养技术构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)共培养体外研究模型,通过ELISA检测性腺激素E2和/或P4对单独培养EEC中TNF-α与TGF-β分泌活性的调节作用以及ESC对该培养体系的影响。结果显示:与未加激素对照组相比,单独或混合添加E2和P4均可显著增加单独培养EEC向顶端分泌TNF-α水平(P<0.05),而对细胞基底端TNF-α分泌活性影响不显著;E2单独作用较对照组显著降低EEC向细胞顶端分泌TGF-β水平(P<0.05),P4单独或与E2共同作用下则主要对单独培养EEC顶端及基底端分泌TGF-β水平具有显著增强作用(P<0.05)。对于EEC-ESC共培养细胞模式,E2和/或P4显著降低EEC顶端和基底端TNF-α分泌水平(P<0.05);EEC顶端TGF-β分泌水平在E2和/或P4作用下显著降低(P<0.05),而EEC基底端TGF-β分泌水平不受激素作用所影响。激素对单独培养及与ESC共培养模式下的极化EEC顶端及基底端TNF-α与TGF-β分泌水平的差异,提示ESC对激素作用下山羊子宫内膜上皮细胞分泌方向及分泌水平的重要调节作用。

关键词：山羊子宫内膜细胞性腺激素 TNF-α TGF-β

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山羊子宫内膜基质细胞对上皮细胞IL-18分泌活性的调节作用

引用

中国兽医学报 2012年第5期32卷 701-704页

作者：南志春齐雪峰屈延延靳亚平赵献军王爱华西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

为了探究性腺激素作用下山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)中白细胞介素-18(IL-18)的分泌活性,以及子宫内膜基质细胞(ESC)对其分泌活性的调节作用。基于套皿共培养永生化山羊EEC和ESC为体外研究模型,通过ELISA和Western blot方法检测E2和/或P4... 详细信息

为了探究性腺激素作用下山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)中白细胞介素-18(IL-18)的分泌活性,以及子宫内膜基质细胞(ESC)对其分泌活性的调节作用。基于套皿共培养永生化山羊EEC和ESC为体外研究模型,通过ELISA和Western blot方法检测E2和/或P4对EEC中IL-18分泌水平的作用以及ESC对该作用的影响。ELISA结果显示,E2较无激素对照组可显著增强单独培养EEC中IL-18的分泌水平(P<0.05),P4单独或与E2联合作用则进一步增强其分泌活性(P<0.01);EEC与ESC共培养模式下,ESC细胞对性激素作用下EEC中IL-18分泌活性具有显著的抑制作用。Western blot结果显示,在单独培养或与ESC共培养模式下,EEC培养上清液中IL-18均以相对分子质量大小18 300的具有生物活性的蛋白形式存在。本研究结果表明,山羊ESC对性腺激素作用下EEC中IL-18的分泌活性具有重要调节作用。

关键词：永生化山羊子宫内膜细胞子宫内膜基质细胞白细胞介素-18 性腺激素

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山羊输卵管上皮细胞的分离与培养

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第6期38卷 71-76,82页

作者：李港杨艳王爱华靳亚平李倩西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

【目的】分离并培养山羊输卵管上皮细胞,研究其生长特性。【方法】采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果;选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定;向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、EGF和血清,探讨其对输... 详细信息

【目的】分离并培养山羊输卵管上皮细胞,研究其生长特性。【方法】采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果;选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定;向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、EGF和血清,探讨其对输卵管上皮细胞体外培养的影响。【结果】胰酶对山羊输卵管上皮细胞的分离效果较差,胶原酶次之,机械刮取方法较好。机械刮取法分离的细胞以细胞团居多,接种后8~12 h开始贴壁生长,生长2~3d细胞呈现明显的铺路石形态。免疫细胞化学染色显示,细胞角蛋白阳性率在95%以上。上皮细胞培养体系中含少量血清及人EGF、胰岛素,能有效促进原代和传代输卵管上皮细胞的生长,以体积分数5%血清＋EGF的培养效果较好。【结论】采用机械刮取法分离培养的输卵管上皮细胞,在体外可连续传到第8代,传代细胞活性强、纯度高,可为输卵管上皮细胞相关功能的研究提供材料。

关键词：山羊输卵管上皮细胞胶原酶

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小鼠子宫内膜细胞对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC转化与分泌活性的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第1期38卷 1-5页

作者：周丽梅贺亚媚牛雅静付胜勇靳亚平西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

【目的】探索小鼠子宫内膜细胞培养上清液对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood Monouclear Cells,PBMC)的转化及分泌活性的影响。【方法】采用噻唑蓝(MTT)比色法和酶联免疫吸附测定法(ELISA),分别研究小鼠子宫... 详细信息

【目的】探索小鼠子宫内膜细胞培养上清液对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood Monouclear Cells,PBMC)的转化及分泌活性的影响。【方法】采用噻唑蓝(MTT)比色法和酶联免疫吸附测定法(ELISA),分别研究小鼠子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)和基质细胞(Endometrial Stro-mal Cells,ESCs)培养上清液,对离体培养的小鼠脾脏淋巴细胞、山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood MonouclearCells,PBMC)的增殖转化及白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)和白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)分泌活性的影响。【结果】小鼠子宫内膜基质细胞和上皮细胞培养上清液,均可无种属差异地刺激小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC的增殖转化,同时抑制植物血球凝素(Plant hemaggluti min PHA-P)诱导的小鼠淋巴细胞和山羊PBMC分泌IL-2的活性,但对PHA-P诱导的IL-4分泌有促进或协同作用。【结论】EECs和ESCs通过影响小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PB-MC的增殖转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。

关键词：子宫内膜细胞淋巴细胞外周血单个核细胞(PBMC) 白细胞介素-2 白细胞介素-4 小鼠山羊

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山羊子宫内膜基质细胞永生化研究

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畜牧兽医学报 2009年第6期40卷 818-823页

作者：盛宏霞吴庆侠靳亚平秦新喜董海龙西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室杨凌712100

将真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过DNA转染技术导入山羊子宫内膜基质细胞（ESCs）,筛选稳定转染的细胞克隆,进行表型鉴定、生长特性及E2、P4等性腺激素的反应性测定。结果,传至2代的山羊ESCs经转染pCI-neo-hTERT,G418筛选2~3周后,抗性克... 详细信息

将真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过DNA转染技术导入山羊子宫内膜基质细胞（ESCs）,筛选稳定转染的细胞克隆,进行表型鉴定、生长特性及E2、P4等性腺激素的反应性测定。结果,传至2代的山羊ESCs经转染pCI-neo-hTERT,G418筛选2~3周后,抗性克隆形成,滤纸片法转移,扩增并连续培养,共获得5个细胞克隆,扩大培养后的细胞呈典型的长梭形和三角形,相互平行排列成束,与原代培养形态一致。转染后细胞有较高的端粒酶活性,细胞增殖加速,传代时间缩短,传至50代仍稳定增殖。波形蛋白检测阳性,角蛋白检测阴性,具有转染前山羊子宫内膜基质细胞特性。雌激素（100 nmol.L-1）和少量孕激素（10 nmol.L-1）对转染后基质细胞增殖有促进作用。获得了永生化的ESCs,为子宫内膜细胞体外研究奠定了基础。

关键词：山羊子宫内膜基质细胞永生化细胞

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山羊ESC培养上清液对PBMC和PBL转化及分泌活性的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2009年第9期37卷 13-17页

作者：吴庆侠杨普光王爱华郭挺伟董海龙靳亚平西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

【目的】探索山羊子宫内膜基质细胞(ESC)培养上清,对山羊外周血单核细胞(PBMC)和外周血淋巴细胞(PBL)的转化与分泌活性的影响。【方法】分离山羊PBMC和PBL,制备原代ESC(ESC0)及永生化传至30代的ESC(ESC30)培养上清,将不同培养上清与PHA... 详细信息

【目的】探索山羊子宫内膜基质细胞(ESC)培养上清,对山羊外周血单核细胞(PBMC)和外周血淋巴细胞(PBL)的转化与分泌活性的影响。【方法】分离山羊PBMC和PBL,制备原代ESC(ESC0)及永生化传至30代的ESC(ESC30)培养上清,将不同培养上清与PHA组合刺激PBMC与PBL转化,应用MTT法检测ESC0及ESC30培养上清对PBMC和PBL转化的作用,ELISA检测PBMC和PBL分泌IL-2I、L-4的相对含量。【结果】ESC0及ESC30上清可刺激PBMC/PBL转化并分泌IL-2和IL-4,抑制PHA-P诱导的PBMC/PBL增殖及IL-2的分泌,但对PHA-P引起的PBMC/PBL分泌IL-4有促进或协同作用。【结论】ESC能通过旁分泌作用影响PBMC和PBL的转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。

关键词：山羊原代子宫内膜基质细胞传至30代的子宫内膜基质细胞外周血单核细胞外周血淋巴细胞 IL-2 IL-4

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山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法的建立

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2009年第8期37卷 25-30页

作者：高纪振周丽梅王爱华靳亚平宋毓民吴庆侠西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放性实验室陕西杨凌712100

【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD5... 详细信息

【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD58间接竞争ELISA检测方法,对不同生理时期山羊血清中CD58的含量进行检测。【结果】筛选出1株稳定分泌抗CD58单克隆抗体的杂交瘤细胞株G6;玫瑰花环抑制试验和Western-blotting试验表明,制备的细胞株能分泌针对CD58的特异性单克隆抗体;对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测CD58的间接竞争ELISA方法,该方法最适可测范围为10-1000000 ng/mL,理论最低检测限为3.087 ng/mL,批内和批间平均变异系数分别为3.50%和5.22%;用建立的方法检测未发情和发情山羊血清中CD58含量分别为（32.160±3.69）和（35.929±3.08）μg/mL,怀孕山羊血清中CD58含量为（61.564±5.10）μg/mL。【结论】建立了山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法,该方法敏感、特异,具有良好的重复性对不同生理时期山羊血清中CD58含量的检测表明，怀孕山羊血清中CD58含量显著高于未发情和发情山羊。

关键词： CD58蛋白单克隆抗体间接竞争ELISA方法

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饲养层细胞的接种密度对分离培养胚胎干细胞的影响

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中国兽医学报 2009年第4期29卷 494-501页

作者：赵晶董雅娟柏学进靳亚平张廷龙封纪武西北农林科技大学农业部家畜内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 青岛农业大学动物胚胎工程中心山东青岛266109 山东小黑牛集团公司山东淄博255000

建立有效的昆明白小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)饲养层培养体系,用于分离和培养小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)的研究。(1)取怀孕14.5 d昆明白小鼠胎儿分离成纤维细胞,利用体外培养体系分离传代,选... 详细信息

建立有效的昆明白小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)饲养层培养体系,用于分离和培养小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)的研究。(1)取怀孕14.5 d昆明白小鼠胎儿分离成纤维细胞,利用体外培养体系分离传代,选取生长旺盛并且已纯化的P3代的MEF,经丝裂霉素处理后,用细胞计数板计算活细胞数,分别按1×104、1×106、1×108/mL密度接种,制备饲养层,观察不同密度饲养层的生长状况。(2)取怀孕4 d的昆明白小鼠囊胚,接种在不同密度饲养层上。观察不同密度饲养层上囊胚、ICM及ES细胞的克隆生长情况。结果显示:囊胚在密度为1×106/mL的饲养层上,贴壁率和ICM孵出率分别为(97.0±3.606)%和(96.3±2.887)%,显著高于其他2组;密度为1×106/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率高于密度为1×104/mL(差异极显著,P<0.01)和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率(差异显著,P<0.05);而1×104/mL饲养层和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率差异不显著(P>0.05)。结果表明:以1×106/mL密度接种的MEF作为饲养层,最适合用于分离培养昆明白小鼠ES细胞,有利于囊胚的发育,ICM的增殖,促进ES细胞的增殖,并起到抑制其分化的作用。

关键词：昆明白小鼠胎儿成纤维细胞饲养层胚胎干细胞

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CD58抗体的制备及其检测方法的建立

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2008年第11期36卷 61-65页

作者：秦新喜盛宏霞靳亚平宋毓民席丽苏圣华李倩杨艳西北农林科技大学动物医学院农业部家畜内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

【目的】建立CD58特异性抗体的制备方法,及检测CD58抗体的间接ELISA方法。【方法】用CD58混合弗氏佐剂和兔淋巴细胞吸附CD58的方法免疫家兔获取CD58的抗体,双向免疫扩散试验检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体水平。【结果】两种方法都... 详细信息

【目的】建立CD58特异性抗体的制备方法,及检测CD58抗体的间接ELISA方法。【方法】用CD58混合弗氏佐剂和兔淋巴细胞吸附CD58的方法免疫家兔获取CD58的抗体,双向免疫扩散试验检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体水平。【结果】两种方法都能够使动物机体产生免疫应答;双向免疫扩散试验证实,弗氏佐剂法获得2种抗体,淋巴细胞吸附法制备抗原可获得1种抗体;间接ELISA检测法CD58的最适包被浓度为10.0μg/mL,最佳封闭液为10 g/L明胶,辣根酶标记的羊抗兔IgG工作浓度为1∶2 000。【结论】兔淋巴细胞吸附法可制备针对CD58的单一抗体,间接ELISA检测方法可以用于CD58抗体水平的检测。

关键词： CD58 ELISA 抗体

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