检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第6期33卷 49-52页

作者：马保华宋小飞艾小云王有柱郝捷西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

　采用腹腔注射染毒法,将体重(16±1)g的性成熟期公鼠随机分为高剂量(1/10LD50)、中剂量(1/50LD50)、低剂量(1/250LD50)染毒组和溶剂对照组,每组10只,高、中、低剂量染毒组于试验的第0,3,6,9和12天以0.01mL/g注射量,分别腹腔注射1.2... 详细信息

　采用腹腔注射染毒法,将体重(16±1)g的性成熟期公鼠随机分为高剂量(1/10LD50)、中剂量(1/50LD50)、低剂量(1/250LD50)染毒组和溶剂对照组,每组10只,高、中、低剂量染毒组于试验的第0,3,6,9和12天以0.01mL/g注射量,分别腹腔注射1.20,0.24,0.048g/L的醋酸铅[Pb(CH3COO)2·3H2O]溶液,对照组注射灭菌蒸馏水。30d后,处死小鼠,采集输精管精子,研究醋酸铅对小鼠精子的发生毒性。结果表明:(1)各试验组公鼠的睾丸、附睾湿重及其与体重的比值均无明显差异(P>0.05);(2)采用输精管精子进行精子发生毒性检验是可行的;(3)各试验组公鼠精子相对密度及精子活力无统计学差异(P>0.05);(4)各染毒组公鼠畸形精子比率显著高于对照组(P<0.01);(5)高剂量和中剂量试验公鼠输精管顶体异常精子比率与对照组之间差异显著(P<0.05)。说明本试验所用醋酸铅剂量未明显影响性成熟期公鼠的性腺发育及精子密度和活力,各剂量醋酸铅染毒显著影响了精子的形态发生和顶体形成。

关键词：醋酸铅精子发生毒性小鼠

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PHA-P及孕酮对孕早期山羊子宫内膜γδ~+T细胞体外分泌TGF-βs的影响

引用

农业生物技术学报 2005年第4期13卷 503-506页

作者：沈文正靳亚平王爱华李引乾薛海斌西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室杨凌职业技术学院杨凌712100 杨凌职业技术学院杨凌712100 杨凌712100 杨凌712100 杨凌712100 杨凌712100

测定山羊孕早期子宫内膜γδ+T细胞体外分泌转化生长因子(TGF-β1及TGF-β2)水平,研究PHA-P及孕酮对该细胞体外分泌此二种细胞因子的影响。手术分离妊娠32d莎能山羊子宫内膜,经胶原酶消化及淋巴细胞分离液离心制得子宫内膜淋巴细胞,采... 详细信息

测定山羊孕早期子宫内膜γδ+T细胞体外分泌转化生长因子(TGF-β1及TGF-β2)水平,研究PHA-P及孕酮对该细胞体外分泌此二种细胞因子的影响。手术分离妊娠32d莎能山羊子宫内膜,经胶原酶消化及淋巴细胞分离液离心制得子宫内膜淋巴细胞,采用免疫磁珠分离法(MACS)从中获得γδ+T细胞(1×106/mL),以RPMI1640+FCS完全培养液培养于96孔细胞培养板上,并向部分孔加入20mg/mLPHA-P和10ng/mL孕酮溶液作实验处理。体外分泌测定显示,(1)PHA-P极显著地(P<0.01)促进妊娠32d山羊子宫内膜γδ+T细胞分泌TGF-β1(42.550±4.789ng/mL)及TGF-β2(4.2998±0.012ng/mL)。(2)生理水平孕酮能极显著抑制该γδ+T细胞分泌TGF-β1(3.533±1.914ng/mL,P<0.01),且能使TGF-β1的分泌保持在一定水平,但对TGF-β2分泌的抑制作用不显著(0.7931±0.009ng/mL,P>0.05),证明生理水平孕酮参与体内TGF-β1水平的下调和分泌维持,但可能不参与TGF-β2分泌活动的下调。(3)PHA-P处理、孕酮处理及γδ+T细胞对照的TGF-β1分泌水平均明显高于TGF-β2,证明γδ+T细胞是妊娠早期山羊母-胎界面TGF-β1的主要来源。

关键词：妊娠早期山羊子宫内膜γδ+T细胞 TGF-β 孕酮 PHA-P

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骨髓间充质干细胞的研究进展

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莱阳农学院学报 2005年第1期22卷 56-62页

作者：胡亮董雅娟柏学进马保华西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100 莱阳农学院胚胎工程中心

在骨髓基质中存在一种非造血系的干细胞称为间充质干细胞。骨髓间充质干细胞不但能够在体外扩增,同时在体内和体外有可以诱导分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌管细胞、骨骼肌、星型胶质细胞、神经元样细胞以及造血支持... 详细信息

在骨髓基质中存在一种非造血系的干细胞称为间充质干细胞。骨髓间充质干细胞不但能够在体外扩增,同时在体内和体外有可以诱导分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌管细胞、骨骼肌、星型胶质细胞、神经元样细胞以及造血支持基质等,但是在MSCs能够安全和有效的作为细胞和基因治疗应用于临床之前,仍需解决大量的基础性问题。本文介绍了MSCs的生物学特性,MSCs的分离、扩增和鉴定,MSCs的表面标记物的表达,讨论了MSCs分化为神经元样细胞的机制,并简要论述了MSCs在生理和医学临床应用上的重要意义。

关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化细胞培养鉴定神经元样细胞

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孕酮及CD58对山羊妊娠早期子宫黏膜γδ+T细胞的体外活化

孕酮及CD58对山羊妊娠早期子宫黏膜γδ+T细胞的体外活化

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全国首届动物生物技术学术研讨会

作者：沈文正靳亚平李权武杨凌职业技术学院西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室

在手术分离、胶原酶消化法和免疫磁珠分离法的基础上,获得子宫黏膜γδ+T细胞,分别加入孕酮、CD58等因子,经体外培养66h,利用MTT法和ELISA仪比色法研究诸因子对妊娠早期山羊子宫黏膜γδ+T细胞的体外活化效果。结果表明,对妊娠20d山羊,P... 详细信息

在手术分离、胶原酶消化法和免疫磁珠分离法的基础上,获得子宫黏膜γδ+T细胞,分别加入孕酮、CD58等因子,经体外培养66h,利用MTT法和ELISA仪比色法研究诸因子对妊娠早期山羊子宫黏膜γδ+T细胞的体外活化效果。结果表明,对妊娠20d山羊,PHA-P及生理浓度孕酮分别能极显著或显著活化子宫局部的γδ+T细胞,而CD58对该γβ+T细胞仅有微弱的活化作用。对妊娠32d山羊,PHA-P、孕酮及CD58对子宫黏膜γδ+T细胞均表现显著的活化作用。PHA-P对孕酮刺激的γδ+T细胞活化具有明显的协同作用,但对CD58刺激的γδ+T细胞活化表现一定的颉颃作用。各水平CD58及孕酮对γδ+T细胞均有活化作用,且表现某种剂量依赖性。

关键词：孕酮 CD58 山羊子宫黏膜 γδ+T细胞体外活化

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牛卵泡卵母细胞体外受精和发育的研究

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黑龙江畜牧兽医 2003年第7期 8-10页

作者：马云杨春荣雷安民窦忠英昝林森西北农林科技大学家畜生殖内分泌与奶牛胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

利用屠宰黄牛卵巢作为供试材料 ,对卵巢表面 2～8mm卵泡卵母细胞体外受精(IVF) -受精卵的体外发育 (IVD)进行了系列研究 ,采用上游法、Percoll法和本实验室沿用的直接洗涤法处理牛冻精 ,观察 3种精子处理方法处理牛冷冻精子对卵母细胞... 详细信息

利用屠宰黄牛卵巢作为供试材料 ,对卵巢表面 2～8mm卵泡卵母细胞体外受精(IVF) -受精卵的体外发育 (IVD)进行了系列研究 ,采用上游法、Percoll法和本实验室沿用的直接洗涤法处理牛冻精 ,观察 3种精子处理方法处理牛冷冻精子对卵母细胞体外受精胚胎发育的影响。实验结果 ,就卵裂率指标 ,采用Percoll法处理的精子进行卵母细胞体外受精 ,和上游法及洗涤法分别比较 ,差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ;桑囊率指标 ,只有上游法比洗涤法高 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,其余差异均不显著。以FERT -TALP液作为受精液采用常规培养方法 ,精卵作用 18～ 2 0h后分开 ,与精卵作用 6～ 8h后分开卵母细胞受精后的 8-细胞发育率及桑囊率变化不大 (P >0 .0 5 ) ;卵裂率指标 ,18～ 2 0h处理组高于 6～ 8h处理组 ,但两组之间差异也不显著。表明 ,在生产中采用FERT -TALP液做为受精液 ,应用上游法处理精子 ,不需要另购试剂 ,精卵孵育时间由 18～ 2 4h缩短至 6～ 8h是可行的 ,其现实意义是可以简化胚胎体外生产的程序 ,节省人力。

关键词：牛卵泡卵母细胞体外受精发育

来源：评论

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成年山羊皮肤干细胞体外克隆与诱导分化

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中国修复重建外科杂志 2003年第2期17卷 93-96页

作者：杨学义曹斌云冯秀亮马勇江窦忠英西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物科技学院奶山羊研究室陕西杨凌712100

目的　探索山羊皮肤干细胞的分离方法与培养体系 ,为进一步研究皮肤干细胞增殖分化的分子机制打下基础。　方法　从成年关中奶山羊耳尖获取皮肤 ,用组织块培养法分离皮肤干细胞 ,碱性磷酸酶 (AL P)染色及体外分化实验鉴定 ,用条件培养... 详细信息

目的　探索山羊皮肤干细胞的分离方法与培养体系 ,为进一步研究皮肤干细胞增殖分化的分子机制打下基础。　方法　从成年关中奶山羊耳尖获取皮肤 ,用组织块培养法分离皮肤干细胞 ,碱性磷酸酶 (AL P)染色及体外分化实验鉴定 ,用条件培养基与细胞因子相结合行皮肤干细胞的体外诱导分化。　结果　山羊耳尖皮肤分离得到类干细胞集落并传 5代 ,细胞集落具有典型鸟巢状结构 ,AL P染色阳性 ,体外分化能形成类胚体。在细胞因子 (IGF- 1)及条件培养基的诱导下 ,所分离获取的皮肤干细胞能分化形成类毛囊 ,类星形胶质细胞及类成骨细胞。　结论　用组织块培养法可以获得多能性皮肤干细胞 ;在体外培养条件下不仅能进行定向分化 ,还能进行横向分化。

关键词：皮肤干细胞细胞增殖细胞分化

来源：评论

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某些因素对牛和小鼠类胚胎干细胞分离与培养的影响

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中国兽医学报 2002年第2期22卷 187-190页

作者：安立龙杨奇窦忠英高志敏雷安民杨春荣邱怀湛江海洋大学农学院广东湛江524088 西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100

以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 E... 详细信息

以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 ES细胞分离与克隆中 ,以 15 %～ 2 0 %犊牛血清为宜 ,在 DMEM(L)培养基中添加 0 .1μmol/LNa2 Se O3 +0 .1mmol/Lβ-巯基乙醇 +10 μg/L IGF+10 0 0 IU/m L L IF,能显著提高牛 ES细胞分离与克隆效率 ;在TCM199、DMEM(高糖 )和 DMEM(低糖 ) 3种培养基中 ,低糖 DMEM更适宜于牛 ES细胞的分离 ;优秀胚胎形成的团状 ICM更适宜于分离与克隆 ES细胞 ,在 37℃用低浓度消化液处理 ICM或 ES细胞集落 ,再以机械将其离散为细胞小块 ,ES细胞克隆效率最高。

关键词：牛小鼠胚胎干细胞内细胞团分离克隆

来源：评论

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影响牛胚胎干细胞分离克隆因素的研究

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生物技术通报 2002年第3期18卷 34-39页

作者：李松窦忠英华进联李相运宋文刚曲迅西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室泰山医学院免疫学教研室泰安271000 泰山医学院免疫学教研室

采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养及传统饲养层培养方式 ,以高糖DMEM ,添加 0 .1mM2 -巯基乙醇、犊牛血清、细胞因子为培养基 ,以 4～ 13周龄屠宰牛胎儿为实验材料 ,探讨影响牛原始生殖细胞分离克隆胚胎干细胞的相关因素。结果发现 :... 详细信息

采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养及传统饲养层培养方式 ,以高糖DMEM ,添加 0 .1mM2 -巯基乙醇、犊牛血清、细胞因子为培养基 ,以 4～ 13周龄屠宰牛胎儿为实验材料 ,探讨影响牛原始生殖细胞分离克隆胚胎干细胞的相关因素。结果发现 :当犊牛血清为 15 %时效果最好 ;细胞因子添加与否对胚胎干细胞的分离及同源牛胎儿成纤维细胞的贴壁与生长影响并不显著 ,而在传代过程中有一定影响 ;以 0 .2 %胰酶 +0 .0 4 %EDTA为细胞消化液效果最佳 ;以同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆牛胚胎干细胞。

关键词：牛胚胎干细胞分离克隆原始生殖细胞

来源：评论

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牛卵母细胞体外成熟的研究

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草食家畜 2001年第S2期 127-130页

作者：雷安民杨春荣高志敏窦忠英西北农林科技大学畜牧兽医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

为了给牛细胞核移植提供卵母细胞 ,1 997年 3月至 2 0 0 1年 3月共进行了 86次卵母细胞体外成熟的实验研究 ,核成熟率 (以出现第一极体为成熟标志 )为 6 5.1 2 %( 2 332 /372 1 )。其中 ,基础培养液为TCM1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸钠 + 1 ... 详细信息

为了给牛细胞核移植提供卵母细胞 ,1 997年 3月至 2 0 0 1年 3月共进行了 86次卵母细胞体外成熟的实验研究 ,核成熟率 (以出现第一极体为成熟标志 )为 6 5.1 2 %( 2 332 /372 1 )。其中 ,基础培养液为TCM1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸钠 + 1 0mMHepes+ 8%NCS + 1 0 μg/mlFSH + 1 0 μg/mlLH + 1 μg/mlE2 (培养液 1 )组进行 6 8批次实验 ,核成熟率为 57.97% ( 1 6 80 /2 898)。基础培养液为TCM 1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸+ 8%的发情牛血清 (为 4头发情牛的混合血清 ,培养液 2 )组进行 1 8次实验 ,核成熟率为 79.2 2 % ( 6 52 /82 3)。培养液 1组与培养液 2组之间卵母细胞成熟率差异显著(P <0 .0 5)。培养液 2的组中有 9次添加了 40IU/ml的庆大霉素 ,其核成熟率为72 .1 5% ( 342 /4 74) ;另 9次未添加庆大霉素 ,其核成熟率为 88.83% ( 31 0 /349) ,两者之间无明显差异 (P >0 .0 5)。

关键词：牛卵母细胞体外成熟核成熟质成熟

来源：评论

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