检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2001年第5期29卷 5-10页

作者：安立龙高志敏杨奇冯秀亮窦忠英雷安民杨春荣邱怀西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室

研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛和小鼠类胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离和克隆 ;在 ES细胞培养液中 ,犊牛血清体积分数以 1... 详细信息

研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛和小鼠类胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离和克隆 ;在 ES细胞培养液中 ,犊牛血清体积分数以 15 %～ 2 0 %为宜 ,在 DMEM(L )培养液中添加 0 .1μm ol/ L Na2 Se O3+0 .1mm ol/ Lβ-巯基乙醇 +10 ng/ m L IGF+10 0 0 ng/ m L L IF,能显著提高牛 ES细胞分离与克隆效率 ;低糖 DMEM比TCM199和高糖 DMEM更适宜于牛 ES细胞的分离。优秀胚胎形成的团状 ICM更适宜于分离与克隆 ES细胞 ,在37℃用低体积分数消化液处理 ICM或 ES细胞集落 ,再以机械将其离散为细胞小块。

关键词：牛小鼠胚胎干细胞内细胞团克隆效率添加物消化液

来源：评论

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牛类胚胎干细胞的分离与克隆

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中国农业科学 2001年第5期34卷 550-555页

作者：安立龙杨奇冯秀亮杨春荣雷安民高志民窦忠英邱怀西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室

选用荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎 ,以 PMOL/ L EF细胞为饲养层 ,以 DMEM+ 15 ml/ 10 0 m l NBS+ 0 .1μm ol/L Na2 Se O3+ 0 .1mm ol/ Lβ-巯基乙醇 + 10 ng/ ml IGF+ 10 0 0 IU/ m l L IF为培养液 ,用消化法 ( ICM用 0 .2 5 g/ 10 0 ml胰... 详细信息

选用荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎 ,以 PMOL/ L EF细胞为饲养层 ,以 DMEM+ 15 ml/ 10 0 m l NBS+ 0 .1μm ol/L Na2 Se O3+ 0 .1mm ol/ Lβ-巯基乙醇 + 10 ng/ ml IGF+ 10 0 0 IU/ m l L IF为培养液 ,用消化法 ( ICM用 0 .2 5 g/ 10 0 ml胰蛋白酶 + 0 .0 4 g/ 10 0 ml EDTA) ,ES细胞集落用 ( 0 .12 5 g/ 10 0 ml胰蛋白酶 + 0 .0 2 g/ 10 0 m l EDTA)和机械剥离法离散ICM细胞集落和隆起明显的 ES细胞集落为细胞小块 ,获得了 9个传至 6代的牛类 ES细胞系和 2 2个传至 9代的小鼠类 ES细胞系。从形态特征、组织化学染色、核型分析和 ES细胞分化能力等方面对所分离与克隆的细胞进行鉴定 ,证明其具有 ES细胞的诸多特性

关键词：牛小鼠胚胎干细胞内细胞团分离克隆

来源：评论

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牛胚胎在小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的生长行为

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中国农业科学 2001年第6期34卷 667-671页

作者：安立龙杨奇窦忠英雷安民杨春荣高志敏西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室

比较了牛胚胎与小鼠胚胎在体外培养过程中的生长行为，结果表明，牛滋养层细胞与内细胞团（ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ，简称ＩＣＭ）连接不紧密，其迅速增殖，形成半透明囊腔结构；小鼠胚胎滋养层与ＩＣＭ密切相连，形成盘状结构，... 详细信息

比较了牛胚胎与小鼠胚胎在体外培养过程中的生长行为，结果表明，牛滋养层细胞与内细胞团（ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ，简称ＩＣＭ）连接不紧密，其迅速增殖，形成半透明囊腔结构；小鼠胚胎滋养层与ＩＣＭ密切相连，形成盘状结构，并推移原代小鼠胎儿成纤维细胞（Ｐｒｉｍａｒｙｍｕｒｉｎｅｅｍｂｒｙｏｓｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＰＭＥＦ）饲养层。牛ＩＣＭ形态呈现多样性，表现为团状、条状、网状和混合型；小鼠ＩＣＭ形态单一，多呈圆盘状。体外培养的牛胚胎发育速度比小鼠胚胎迟缓，牛ＩＣＭ初次传代时间为胚胎体外培养开始后５～６ｄ，小鼠ＩＣＭ初次传代时间为胚胎体外培养后３～４ｄ。牛ＩＣＭ分化程度由小到大依次为团状ＩＣＭ、条状ＩＣＭ、混合型正和网状ＩＣＭ。牛和小鼠胚胎附着率及ＩＣＭ克隆率由大到小均依次为孵化胚、囊胚和桑褡胚，但桑褡胚和囊胚附着率和ＩＣＭ克隆率均无显著差异（Ｐ＞０．０５）。与全胚相比较，牛和小鼠裸胚（无透明带或透明带不完整的胚胎）贴壁时间提前，但ＩＣＭ形成率和ＩＣＭ的生长行为均无显著差异；小鼠和牛桑椹胚卵裂球（中、晚期）体外分化抑制培养，形成亚囊胚而不能获得ＥＳ细胞；剥离牛胚胎滋胚层细胞，ＩＣＭ细胞更易分化。

关键词：小鼠牛内细胞团培养生长行为

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CD58与山羊早孕因子之间关系的研究

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畜牧兽医学报 2003年第2期34卷 152-156页

作者：马勇江靳亚平王爱华曹斌云李引乾沈文正西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室杨凌712100

应用猪淋巴细胞Ea花环抑制试验 ,建立了山羊EPF测定的方法 ,检测了山羊妊娠早期血清中EPF的活性并对EPF与CD5 8的活性关系进行了研究。结果证明 :猪淋巴细胞Ea花环抑制试验可应用于山羊EPF活性的测定 ;妊娠早期 ( 1～ 2ld)山羊血清中存... 详细信息

应用猪淋巴细胞Ea花环抑制试验 ,建立了山羊EPF测定的方法 ,检测了山羊妊娠早期血清中EPF的活性并对EPF与CD5 8的活性关系进行了研究。结果证明 :猪淋巴细胞Ea花环抑制试验可应用于山羊EPF活性的测定 ;妊娠早期 ( 1～ 2ld)山羊血清中存在EPF活性 ,第 1,8d有活性峰值 (RIT值分别为 18 8± 1 1,2 1 2± 1 8) ,其余时间EPF活性相对稳定 ,呈现一定规律性变化 ;CD5 8( 1∶10 0 )孵育淋巴细胞后 ,RIT值显著高于HBSS液对照组(P <0 0 5 ) ,CD5 8( 1∶2 ,1∶10 )孵育淋巴细胞后 ,RIT值极显著高于HBSS液对照 (P <0 0 1) ,认为CD5 8活性可以用Ea花环抑制试验进行测定并具有与EPF协同抗淋巴细胞血清使RIT值升高作用相似的功能 ;妊娠山羊血清经CD5 8,CD2 ,HBSS液等处理后孵育淋巴细胞 ,经CD5 8处理组RIT值极显著高于HBSS液处理组 (P <0 0 1) ,经CD2处理组RIT值极显著低于HBSS液处理组 (P <0 0 1)而与HBSS液对照组差异不显著 (P >0 0 5 ) ,表明CD5 8与EPF可共同协同抗淋巴细胞血清抑制Ea花环形成 ,CD2对EPF有一定程度的封闭作用。进一步认为CD5 8与EPF具有一定程度的抗原交叉性。

关键词： Ea花环抑制试验 CD58 EPF 山羊

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家兔卵巢间质细胞的分离培养与形态观察

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2004年第8期32卷 85-88页

作者：利光辉陈秀荔王贇林炜明靳亚平西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100

　采用0.1% 型胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶-0.2g/LEDTA,分别用热消化法和冷消化法消化分离家兔卵巢间质细胞,以探讨其体外培养条件和生长特点。结果表明,无论用热消化法还是冷消化法,0.1% 型胶原酶的消化效果均好于2.5g/L胰蛋白酶-0.2g/LEDT... 详细信息

　采用0.1% 型胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶-0.2g/LEDTA,分别用热消化法和冷消化法消化分离家兔卵巢间质细胞,以探讨其体外培养条件和生长特点。结果表明,无论用热消化法还是冷消化法,0.1% 型胶原酶的消化效果均好于2.5g/L胰蛋白酶-0.2g/LEDTA的消化效果,前者的细胞活率在90%以上,可用于体外培养;经74μm滤网过滤后的卵巢组织分离培养出梭形和不规则形的间质细胞,且2种类型的细胞能在同一培养体系中贴壁生长。说明0.1% 型胶原酶可用于家兔卵巢间质细胞的分离。

关键词：卵巢间质细胞分离培养形态观察

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胚胎干细胞体外定向诱导分化研究进展

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2003年第2期31卷 161-165页

作者：宋晓平窦忠英西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100

胚胎干细胞是由早期内细胞团分离的一种多潜能细胞 ,在体外分化抑制培养时 ,可保持未分化状态而无限增殖。一旦撤除分化抑制因素 ,或添加适当的诱导剂 ,ES细胞可分化为内胚层、中胚层和外胚层的多种类型的特化细胞。文章综述了体外定向... 详细信息

胚胎干细胞是由早期内细胞团分离的一种多潜能细胞 ,在体外分化抑制培养时 ,可保持未分化状态而无限增殖。一旦撤除分化抑制因素 ,或添加适当的诱导剂 ,ES细胞可分化为内胚层、中胚层和外胚层的多种类型的特化细胞。文章综述了体外定向诱导 ES细胞分化为造血细胞、心肌细胞、神经细胞、脂肪细胞、胰岛细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软骨细胞和黑素细胞等的途径和方法。

关键词：胚胎干细胞体外分化诱导剂定向诱导

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牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2002年第4期30卷 95-97页

作者：雷安民高志敏杨春荣窦忠英西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100

1997- 12～ 2 0 0 1- 0 8共进行了 97批牛卵母细胞体外成熟试验 ,总成熟率为 70 .75 % (35 6 1/ 5 0 33)。其中培养液为 TCM199+0 .12 g/ L 丙酮酸钠 +10 mm ol/ L Hepes+体积分数 8% NCS+10 mg/ L FSH+10 mg/ LL H+1mg/ L E2 (培养液 1... 详细信息

1997- 12～ 2 0 0 1- 0 8共进行了 97批牛卵母细胞体外成熟试验 ,总成熟率为 70 .75 % (35 6 1/ 5 0 33)。其中培养液为 TCM199+0 .12 g/ L 丙酮酸钠 +10 mm ol/ L Hepes+体积分数 8% NCS+10 mg/ L FSH+10 mg/ LL H+1mg/ L E2 (培养液 1组 )组进行 5 0批试验 ,成熟率为 6 5 .75 % (14 15 / 2 15 2 )。培养液 1组有 5批次未添加 Hep-es 盐 ,其成熟率为 75 .2 1% (88/ 117) ;另 4 5批次添加 Hepes盐 ,成熟率为 6 5 .2 1% (132 7/ 2 0 35 )。培养液为TCM199+体积分数 8%发情牛血清 +0 .12 g/ L 丙酮酸 (培养液 2组 )组进行 4 7批次试验 ,成熟率为 74 .4 9%(2 14 6 / 2 881)。培养液 2组中有 9批次添加了 4 0 m g/ L 的庆大霉素 ,其成熟率为 72 .15 % (342 / 4 74 ) ;另 38批次未添加庆大霉素 ,其成熟率为 74 .95 % (180 4 / 2 4 0 7)。试验同时表明。

关键词：牛卵泡卵母细胞体外成熟培养

来源：评论

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哺乳动物胚胎干细胞的研究历史和现状

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西北农业大学学报 2001年第1期29卷 118-121页

作者：李谱华杨奇窦忠英西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100

与胚胎细胞相比 ,胚胎干细胞占有数量优势 ,与体细胞相比 ,则有低分化的优势。本研究在综述哺乳动物胚胎干细胞研究历史的基础上 ,概述了胚胎干细胞的分离方法和存在的问题。

关键词：胚胎干细胞生物工程哺乳动物分离方法

来源：评论

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自原始生殖细胞分离克隆小鼠ES细胞研究初报

引用

西北农业大学学报 2001年第1期29卷 22-24,29页

作者：华进联窦忠英李松雷安民杨春荣西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100

自交配后 9.5～ 13.5 d小鼠胎儿生殖嵴 /腺或其类似物及周围组织 ,采用与其同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆到具小鼠 ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞 ( EG细胞 )系。即具有连续传代的能力 ( 1例来自交配后 11.5 d胎儿类 ES细胞传... 详细信息

自交配后 9.5～ 13.5 d小鼠胎儿生殖嵴 /腺或其类似物及周围组织 ,采用与其同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆到具小鼠 ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞 ( EG细胞 )系。即具有连续传代的能力 ( 1例来自交配后 11.5 d胎儿类 ES细胞传至 10代 ) ,部分细胞集落呈典型鸟巢状结构 ,AP染色呈阳性 ,体外分化或延迟传代、堆叠培养具有分化形成类胚体、上皮细胞、成纤维细胞或神经细胞等的能力。同样培养交配后 7.5～ 8.5 d和14.5～ 15 .5 d的小鼠胎儿 ,原代观察到类 ES细胞集落 ,继代培养未观察到类 ES细胞集落 ,16 .5～ 18.5 d小鼠胎儿原代培养未观察到

关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞 ES细胞小鼠哺乳动物

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LIF和IGF-1对牛胚胎干细胞分离的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2002年第3期30卷 13-16页

作者：杨奇窦忠英西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100

比较了添加 L IF,IGF- 1和 L IF+IGF对牛胚胎干细胞 (ES)分离的影响。结果表明 :1添加10 ng/m L L IF能提高胚胎贴壁率 ,促进内细胞团 (ICM)和 ES细胞的增殖并抑制其分化 ;2添加 10 ng/m L IGF- 1既能提高胚胎贴壁率 ,又能使 ICM明显增... 详细信息

比较了添加 L IF,IGF- 1和 L IF+IGF对牛胚胎干细胞 (ES)分离的影响。结果表明 :1添加10 ng/m L L IF能提高胚胎贴壁率 ,促进内细胞团 (ICM)和 ES细胞的增殖并抑制其分化 ;2添加 10 ng/m L IGF- 1既能提高胚胎贴壁率 ,又能使 ICM明显增殖的时间和传代后集落出现的时间提前 ;3添加 10 ng/m L L IF+10 ng/m L IGF- 1,可以同时发挥两种生长因子的作用效果 ,更有利于牛胚胎干细胞的分离。

关键词： LIF IGF-1 牛胚胎干细胞分离

来源：评论

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