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全国首届动物生物技术学术研讨会

作者：沈文正靳亚平李权武杨凌职业技术学院西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室

在手术分离、胶原酶消化法和免疫磁珠分离法的基础上,获得子宫黏膜γδ+T细胞,分别加入孕酮、CD58等因子,经体外培养66h,利用MTT法和ELISA仪比色法研究诸因子对妊娠早期山羊子宫黏膜γδ+T细胞的体外活化效果。结果表明,对妊娠20d山羊,P... 详细信息

在手术分离、胶原酶消化法和免疫磁珠分离法的基础上,获得子宫黏膜γδ+T细胞,分别加入孕酮、CD58等因子,经体外培养66h,利用MTT法和ELISA仪比色法研究诸因子对妊娠早期山羊子宫黏膜γδ+T细胞的体外活化效果。结果表明,对妊娠20d山羊,PHA-P及生理浓度孕酮分别能极显著或显著活化子宫局部的γδ+T细胞,而CD58对该γβ+T细胞仅有微弱的活化作用。对妊娠32d山羊,PHA-P、孕酮及CD58对子宫黏膜γδ+T细胞均表现显著的活化作用。PHA-P对孕酮刺激的γδ+T细胞活化具有明显的协同作用,但对CD58刺激的γδ+T细胞活化表现一定的颉颃作用。各水平CD58及孕酮对γδ+T细胞均有活化作用,且表现某种剂量依赖性。

关键词：孕酮 CD58 山羊子宫黏膜 γδ+T细胞体外活化

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布尔山羊胚胎移植技术的研究与应用

引用

中国草食动物 2001年第S1期3卷 115-118页

作者：高志敏雷安民窦忠英樊敬庄张万民魏志杰王改兰尹海科尹万林王忠林何朝林马拴林西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100 陕西省布尔山羊良种繁殖中心

1999年 10～ 11月份 ,分三批使用阴道栓 +FSH超数排卵供体布尔山羊 (Boergoat,下同 ) 13只。在放入阴道栓的第 8～ 10天 ,连续三天递减量肌肉注射FSH (澳大利亚 ) 32 0mg。 9只供体羊发情、配种、采胚 (有效率 6 9 2 3% ,9/ 13) ,平均... 详细信息

1999年 10～ 11月份 ,分三批使用阴道栓 +FSH超数排卵供体布尔山羊 (Boergoat,下同 ) 13只。在放入阴道栓的第 8～ 10天 ,连续三天递减量肌肉注射FSH (澳大利亚 ) 32 0mg。 9只供体羊发情、配种、采胚 (有效率 6 9 2 3% ,9/ 13) ,平均采胚数 18 11枚± 5 18枚 ,其中可用胚平均数 15 4 4枚± 6 31枚 (可用胚率 85 2 8% ,139/ 16 3)。将 139枚 7日龄可用胚移植受体关中奶山羊 89只 ,妊娠 5 0只 ,妊娠率 5 6 18%。其中鲜胚移植妊娠率 6 1 11% (4 4/ 72 ) ,冻胚移植妊娠率 4 1 6 7% (5 /12 ) ,二分割胚移植妊娠率 2 0 % (1/ 5 )。 5 0只妊娠受体羊共产羔 6 8只 ,每只供体羊平均获羔羊 7 5 6只。供体羊采胚后 ,平均 39 9天发情 ,配种 ,全部妊娠产羔 ,平均产羔 2只。胚胎移植羔羊性别、初生重、发病率和布尔羊自繁羔羊无显著差异 ,P >0 0 5。本次布尔山羊胚胎移植产生明显的经济效益 ,技术成熟 ,可推广应用 ,逐步产业化。

关键词：胚胎移植胚胎冷冻胚胎分割布尔山羊

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哺乳动物胚胎干细胞相关细胞因子研究进展

引用

山东农业科学 2000年第6期32卷 47-49页

作者：李松窦忠英华进联屈雷苗增民西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100 山东省莱芜市畜牧局

影响哺乳动物胚胎干细胞克隆的细胞因子可分为分化抑制因子和生长因子两大类。分化抑制因子包括白血病抑制因子 (LIF)、腺病毒E1A样激动剂A等。生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮生长因子 (EGF)、干细胞因子 (SCF)、胰... 详细信息

影响哺乳动物胚胎干细胞克隆的细胞因子可分为分化抑制因子和生长因子两大类。分化抑制因子包括白血病抑制因子 (LIF)、腺病毒E1A样激动剂A等。生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮生长因子 (EGF)、干细胞因子 (SCF)、胰岛素样生长因子 - 1(IGF - 1)、forskolin等。

关键词：哺乳动物 ES细胞细胞因子胚胎干细胞

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牛卵母细胞体外成熟的研究

引用

草食家畜 2001年第S2期 127-130页

作者：雷安民杨春荣高志敏窦忠英西北农林科技大学畜牧兽医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

为了给牛细胞核移植提供卵母细胞 ,1 997年 3月至 2 0 0 1年 3月共进行了 86次卵母细胞体外成熟的实验研究 ,核成熟率 (以出现第一极体为成熟标志 )为 6 5.1 2 %( 2 332 /372 1 )。其中 ,基础培养液为TCM1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸钠 + 1 ... 详细信息

为了给牛细胞核移植提供卵母细胞 ,1 997年 3月至 2 0 0 1年 3月共进行了 86次卵母细胞体外成熟的实验研究 ,核成熟率 (以出现第一极体为成熟标志 )为 6 5.1 2 %( 2 332 /372 1 )。其中 ,基础培养液为TCM1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸钠 + 1 0mMHepes+ 8%NCS + 1 0 μg/mlFSH + 1 0 μg/mlLH + 1 μg/mlE2 (培养液 1 )组进行 6 8批次实验 ,核成熟率为 57.97% ( 1 6 80 /2 898)。基础培养液为TCM 1 99+ 0 .1 2mg/ml丙酮酸+ 8%的发情牛血清 (为 4头发情牛的混合血清 ,培养液 2 )组进行 1 8次实验 ,核成熟率为 79.2 2 % ( 6 52 /82 3)。培养液 1组与培养液 2组之间卵母细胞成熟率差异显著(P <0 .0 5)。培养液 2的组中有 9次添加了 40IU/ml的庆大霉素 ,其核成熟率为72 .1 5% ( 342 /4 74) ;另 9次未添加庆大霉素 ,其核成熟率为 88.83% ( 31 0 /349) ,两者之间无明显差异 (P >0 .0 5)。

关键词：牛卵母细胞体外成熟核成熟质成熟

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影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的因素

引用

动物医学进展 2001年第4期22卷 45-47页

作者：杨奇史远刚窦忠英西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100 宁夏四正生物工程研究中心银川750000

本研究从丝裂霉素 - C处理时间、消化时间及细胞浓度等方面比较了诸因素对小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的影响。结果表明 ,1 0 μg/m L 丝裂霉素 - C处理以 1 .5～ 2 h为宜 ,0 .2 %胰酶 + 0 .0 4% EDTA消化时间以 2～ 3min( 37℃ )为宜 ,... 详细信息

本研究从丝裂霉素 - C处理时间、消化时间及细胞浓度等方面比较了诸因素对小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的影响。结果表明 ,1 0 μg/m L 丝裂霉素 - C处理以 1 .5～ 2 h为宜 ,0 .2 %胰酶 + 0 .0 4% EDTA消化时间以 2～ 3min( 37℃ )为宜 ,接种浓度以 3～ 3.5×1 0 5m L- 1为宜。在成纤维细胞的分离过程中 ,接种后 30 min换液 ,能达到纯化成纤维细胞的效果。

关键词：小鼠饲养层影响因素 ES细胞胎儿成纤维细胞

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胚胎干细胞生物学特性与鉴定方法

胚胎干细胞生物学特性与鉴定方法

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第五届海内外生命科学论坛

作者：王喜青冯秀亮武毅军窦忠英第四军医大学西京医院西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室

胚胎干细胞的识别和鉴定是其分离和进一步应用的前提.结合胚胎干细胞形态结构及核型、高度分化潜能、磷性磷酸酶和胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达等生物学特性,对胚胎干细胞鉴定方法进行了综述.

关键词：胚胎干细胞磷性磷酸酶特异性细胞表面抗原

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胚胎干细胞的建系方法

胚胎干细胞的建系方法

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第五届海内外生命科学论坛

作者：冯秀亮王喜青武毅军窦忠英第四军医大学西京医院西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室

有关胚胎干细胞的研究是当前生物技术领域研究的热点之一,具有极大的科研及应用价值.作者综合胚胎干细胞系研究现状及取得的成果,从胚胎干细胞分离材料的获取及处理、胚胎干细胞分化抑制培养、细胞系建立及保存等方面对胚胎干细胞建系... 详细信息

有关胚胎干细胞的研究是当前生物技术领域研究的热点之一,具有极大的科研及应用价值.作者综合胚胎干细胞系研究现状及取得的成果,从胚胎干细胞分离材料的获取及处理、胚胎干细胞分化抑制培养、细胞系建立及保存等方面对胚胎干细胞建系方法加以综述和评述.

关键词：胚胎干细胞内细胞团原始生殖细胞

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LIF和IGF-1对牛胚胎干细胞分离的影响

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草食家畜 2001年第S2期 215-219页

作者：杨奇史远刚窦忠英西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100 宁夏四正生物研究工程研究中心宁夏银川750000

本文研究比较了添加LIF、IGF - 1和LIF +IGF - 1对牛ES细胞分离的影响。结果表明 :①添加 1 0ng/mlLIF能提高胚胎贴壁率 ,促进ICM和ES细胞和增殖并抑制其分化 ;②添加 1 0ng/mlIGF - 1既能提高胚胎贴壁率 ,又能使ICM明显增殖的时间和传... 详细信息

本文研究比较了添加LIF、IGF - 1和LIF +IGF - 1对牛ES细胞分离的影响。结果表明 :①添加 1 0ng/mlLIF能提高胚胎贴壁率 ,促进ICM和ES细胞和增殖并抑制其分化 ;②添加 1 0ng/mlIGF - 1既能提高胚胎贴壁率 ,又能使ICM明显增殖的时间和传代后集落出现的时间提前 ;③添加 1 0ng/mlLIF + 1 0ng/mlIGF - 1 ,可以同时发挥两种生长因子的作用效果 ,更有利用牛胚胎干细胞的分离。因此 ,我们认为 ,在牛ES细胞的分离过程中 ,添加适量LIF和IGF -

关键词： LIF IGF-1 胚胎干细胞影响

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布尔山羊胚胎移植技术的研究与应用

布尔山羊胚胎移植技术的研究与应用

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2000年全国养羊生产与学术研讨会议

作者：高志敏雷安民窦忠英樊敬庄张万民魏志杰王改兰尹海科尹万林王忠林何朝林马拴林西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室(陕西杨凌) 陕西省布尔山羊良种繁殖中心

1999年10~11月份,分三批使用阴道栓+FSH超数排卵供体布尔山羊(Boer goat,下同)13只.在放入阴道栓的第8~10天,连续三天递减量肌肉注射FSH(澳大利亚)320mg.9只供体羊发情、配种、采胚(有效率69.23﹪,9/13),平均采胚数18.11枚±5.18枚... 详细信息

1999年10~11月份,分三批使用阴道栓+FSH超数排卵供体布尔山羊(Boer goat,下同)13只.在放入阴道栓的第8~10天,连续三天递减量肌肉注射FSH(澳大利亚)320mg.9只供体羊发情、配种、采胚(有效率69.23﹪,9/13),平均采胚数18.11枚±5.18枚,其中可用胚平均数15.44枚±6.31枚(可用胚率85.28﹪,139/163).将139枚7日龄可用胚移植受体关中奶山羊89只,妊娠50只,妊娠率56.18﹪.其中鲜胚移植妊娠率61.11﹪(44/72),冻胚移植妊娠率41.67﹪(5/12),二分割胚移植妊娠率20﹪(1/5).50只妊娠受体羊共产羔68只,每只供体羊平均获羔羊7.56只,供体羊采胚后,平均39.9天发情,配种,全部妊娠产羔,平均产羔2只.胚胎移植羔羊性别、初生重、发病率和布尔羊自繁羔羊无显著差异,P>0.05.本次布尔山羊胚胎移植产生明显的经济效益,技术成熟,可推广应用,逐步产业化.

关键词：胚胎移植胚胎冷冻胚胎分割布尔山羊

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影响牛胚胎干细胞分离克隆因素的研究

引用

生物技术通报 2002年第3期18卷 34-39页

作者：李松窦忠英华进联李相运宋文刚曲迅西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室泰山医学院免疫学教研室泰安271000 泰山医学院免疫学教研室

采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养及传统饲养层培养方式 ,以高糖DMEM ,添加 0 .1mM2 -巯基乙醇、犊牛血清、细胞因子为培养基 ,以 4～ 13周龄屠宰牛胎儿为实验材料 ,探讨影响牛原始生殖细胞分离克隆胚胎干细胞的相关因素。结果发现 :... 详细信息

采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养及传统饲养层培养方式 ,以高糖DMEM ,添加 0 .1mM2 -巯基乙醇、犊牛血清、细胞因子为培养基 ,以 4～ 13周龄屠宰牛胎儿为实验材料 ,探讨影响牛原始生殖细胞分离克隆胚胎干细胞的相关因素。结果发现 :当犊牛血清为 15 %时效果最好 ;细胞因子添加与否对胚胎干细胞的分离及同源牛胎儿成纤维细胞的贴壁与生长影响并不显著 ,而在传代过程中有一定影响 ;以 0 .2 %胰酶 +0 .0 4 %EDTA为细胞消化液效果最佳 ;以同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆牛胚胎干细胞。

关键词：牛胚胎干细胞分离克隆原始生殖细胞

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