检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2008年第3期16卷 436-442页

作者：林慧赵明涛张玉玲刘风军王国华张涌杨凌 712100 西北农林科技大学生物工程研究所农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室

采用RT-PCR获得人乳铁蛋白cDNA,通过Long and Acute PCR扩增山羊(Capra hircus)β-酪蛋白5’端6.5kb的调控序列,以pEGFP-C1为骨架构建乳腺特异性表达载体p6.5hLF-EGFP。脂质体介导法转染山羊胎儿成纤维细胞,G418抗性筛选3-4周后,经PCR... 详细信息

采用RT-PCR获得人乳铁蛋白cDNA,通过Long and Acute PCR扩增山羊(Capra hircus)β-酪蛋白5’端6.5kb的调控序列,以pEGFP-C1为骨架构建乳腺特异性表达载体p6.5hLF-EGFP。脂质体介导法转染山羊胎儿成纤维细胞,G418抗性筛选3-4周后,经PCR扩增和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞系;同时在稳定转染p6.5hLF-EGFP的乳腺上皮细胞系的上清中检测到重组人乳铁蛋白的组织特异性表达。这为制备高效表达人乳铁蛋白的转基因山羊乳腺生物反应器提供可靠的核移植供体细胞。

关键词：人乳铁蛋白山羊β-酪蛋白 EGFP报告基因供体细胞核移植

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Zhangfei融合蛋白的纯化及其免疫效果

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2008年第10期36卷 7-13页

作者：张鸯史薇靳亚平路保通翁伟平郭廷伟西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 宝鸡市畜牧兽医中心陕西宝鸡721001

【目的】纯化Zhangfei融合蛋白并检测其免疫原性,为研究其在生殖内分泌调节中的作用提供理论依据。【方法】通过大肠杆菌原核表达系统进行Zhangfei融合蛋白的表达,筛选出最佳诱导表达条件,采用SDS-PAGE凝胶检测Zhangfei融合蛋白的表达情... 详细信息

【目的】纯化Zhangfei融合蛋白并检测其免疫原性,为研究其在生殖内分泌调节中的作用提供理论依据。【方法】通过大肠杆菌原核表达系统进行Zhangfei融合蛋白的表达,筛选出最佳诱导表达条件,采用SDS-PAGE凝胶检测Zhangfei融合蛋白的表达情况,比较谷胱甘肽琼脂糖凝胶和电洗脱2种纯化Zhangfei融合蛋白的方法,并测定纯化的Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠和家兔的效果。【结果】成功筛选出了表达Zhangfei融合蛋白的最佳诱导条件为IPTG终浓度3 mmol/L,诱导时间7 h;应用电洗脱方法可得到纯度较高的Zhangfei融合蛋白,其质量浓度为1.269 mg/mL,免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5×103以上,免疫兔的血清抗体效价高达1∶3×106。【结论】电洗脱纯化Zhangfei融合蛋白的方法优于谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化法,Zhangfei融合蛋白具有良好的免疫原性。

关键词： Zhangfei 融合蛋白诱导表达电洗脱谷胱甘肽琼脂糖凝胶抗体效价

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四种冷冻保护剂对小鼠2-细胞胚胎渗透性和毒性作用的比较

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动物学报 2008年第4期54卷 725-732页

作者：雷晓华曹宇静段恩奎马保华西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室北京100101

作为胚胎冷冻保存的基础性研究,冷冻保护剂的渗透性和毒性研究非常重要。本试验选用1,2-丙二醇、甘油、乙二醇和二甲基亚砜4种常用冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚胎进行渗透性和毒性研究。结果显示:1.5mol/L的1,2-丙二醇、乙二醇和二甲基亚... 详细信息

作为胚胎冷冻保存的基础性研究,冷冻保护剂的渗透性和毒性研究非常重要。本试验选用1,2-丙二醇、甘油、乙二醇和二甲基亚砜4种常用冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚胎进行渗透性和毒性研究。结果显示:1.5mol/L的1,2-丙二醇、乙二醇和二甲基亚砜冷冻保护剂对2-细胞胚胎的渗透性显著高于甘油保护剂;4种冷冻保护剂对细胞膜的完整性没有影响;1.5mol/L的乙二醇、1,2-丙二醇和甘油保护剂处理后的2-细胞胚胎的囊胚发育率和孵化率与对照组胚胎比较差异不显著(P>0.05),但显著高于二甲基亚砜处理后的2-细胞囊胚发育率和孵化率(P<0.01)。结果表明:在4种冷冻保护剂中,乙二醇和1,2-丙二醇适合于小鼠2-细胞胚胎冷冻保存。

关键词：冷冻保护剂渗透性毒性 2-细胞胚胎小鼠

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两种冷冻保护剂对小鼠2-细胞胚冷冻效果的比较

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动物学报 2008年第6期54卷 1098-1105页

作者：雷晓华曹宇静宁立娜马保华中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室北京100101 西北农林科技大学动物医学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

乙二醇(ETG)和1,2-丙二醇(PROH)具有高细胞渗透性和低毒性特点,常被用于人及多种哺乳动物早期胚胎冷冻保存。为了比较ETG和PROH对小鼠2-细胞胚的冷冻保护效果,本试验分别采用这两种冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚进行冷冻保存,并采用冻后体... 详细信息

乙二醇(ETG)和1,2-丙二醇(PROH)具有高细胞渗透性和低毒性特点,常被用于人及多种哺乳动物早期胚胎冷冻保存。为了比较ETG和PROH对小鼠2-细胞胚的冷冻保护效果,本试验分别采用这两种冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚进行冷冻保存,并采用冻后体外培养和囊胚移植进行冷冻效果检测。结果表明,PROH组胚胎解冻后胚胎存活率与ETG组无显著差异,但PROH组4-细胞胚发育率和囊胚发育率显著高于ETG组(82.7%vs.64.6%,61.2%vs.29.1%,P<0.01)。囊胚移植结果表明,2-细胞胚胎冻存后能够发育为正常的后代,PROH组和ETG组的囊胚移植后妊娠产仔率无统计学差异(P>0.05),但均显著低于对照组(P<0.05)。为了分析两组胚胎冻存后损伤情况,对解冻后的胚胎细胞微丝进行检测,结果显示ETG组微丝受损的胚胎数高于PROH组。本研究结果证明采用PROH作为冷冻保护剂冷冻保存小鼠2-细胞胚的冻存效果优于ETG。

关键词：冷冻保护剂冷冻 2-细胞胚胎小鼠

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家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养

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畜牧兽医学报 2007年第11期38卷 1242-1247页

作者：陈秀荔赵永贞靳亚平张彦明西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室杨凌712100

本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添... 详细信息

本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L雌二醇(E2)、7.14nmol/L孕酮(P4)的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度。结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长。本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20%FBS、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L E2、7.14 nmol/L P4的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内膜细胞和平滑肌细胞的生长。

关键词：子宫内膜细胞平滑肌细胞免疫组织化学免疫荧光蜕膜化

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山羊子宫内膜基质细胞的分离培养及鉴定

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第4期35卷 11-14,18页

作者：吴庆侠丰艳妮楚元奎吴瑞崔贞亮靳亚平西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

对山羊子宫内膜基质细胞进行分离与体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果表明,山羊子宫内膜在37℃条件下,以2 g／L的胶原酶Ⅰ型消化3～4 h效果最好;采用过滤—低速离心—沉降相结合的方法分离山羊子宫内膜基... 详细信息

对山羊子宫内膜基质细胞进行分离与体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果表明,山羊子宫内膜在37℃条件下,以2 g／L的胶原酶Ⅰ型消化3～4 h效果最好;采用过滤—低速离心—沉降相结合的方法分离山羊子宫内膜基质细胞效果较好,所得细胞在培养后0．5 h开始贴壁,培养12 h后,可见梭形和多角形2种形态的细胞,3～4 d呈网状铺满皿底,有明显的重叠生长现象;免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95％以上,不表达角蛋白。说明采用本文所述的消化和分离方法可获得高纯度的子宫内膜基质细胞。

关键词：山羊子宫内膜基质细胞免疫细胞化学

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E_2、P_4、OT和PGF_(2α)对猪PBMC活性的影响

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西北农业学报 2007年第4期16卷 52-54,66页

作者：吴瑞楚元奎丰艳妮吴庆侠靳亚平西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:P... 详细信息

应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:PGF2α、OT、E2、P4。在试验剂量范围内,E20.1 pg/mL、P41 ng/mL、OT 10 pg/mL、PGF2α100 ng/mL时,其共同作用对PBMC转化活性最强。提示在不同生理时期,由于机体内各种激素浓度变化不同,免疫系统也发生相应的变化。

关键词：激素淋巴细胞正交试验

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二甲基苯蒽诱导山羊乳腺上皮细胞体外转化研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第4期35卷 19-22页

作者：王莉安志兴张涌西北农林科技大学生物工程研究所农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

分别用5,10和15μg／mL二甲基苯蒽(DMBA)的完全培养液处理体外培养的山羊乳腺上皮细胞36, 24和12 h,再以25 ng／mL佛波酯(TPA)作用2周,研究DMBA和TPA对山羊乳腺上皮细胞的诱导转化作用,确定最佳诱导转化条件,探讨二甲基亚砜(DMSO)对细... 详细信息

分别用5,10和15μg／mL二甲基苯蒽(DMBA)的完全培养液处理体外培养的山羊乳腺上皮细胞36, 24和12 h,再以25 ng／mL佛波酯(TPA)作用2周,研究DMBA和TPA对山羊乳腺上皮细胞的诱导转化作用,确定最佳诱导转化条件,探讨二甲基亚砜(DMSO)对细胞增殖的影响。结果表明,用含15μg／mL DMBA的完全培养液培养12 h,再用TPA连续作用4 d,几乎无山羊乳腺上皮细胞存活,10μg／mL DMBA培养24 h转化效果较差,5μg／mL DMBA培养36 h转化效果最佳;转化的山羊乳腺上皮细胞体积增大、核浓缩、生长排列紊乱、无规则并出现转化灶; DMSO对细胞生长有抑制作用．随培养时间延长抑制作用减弱。试验初步建立了乳腺上皮细胞的体外转化系统。

关键词：二甲基苯蒽细胞转化山羊乳腺上皮细胞

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不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

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西北农业学报 2007年第6期16卷 8-13页

作者：原巨强陈静波刘赛海里且木赵晓娥马保华西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 新疆畜牧科学院新疆乌鲁木齐830000

采用胞质内精子注射法(ICSI)构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)卵体外发育的影响。结果显示:成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI... 详细信息

采用胞质内精子注射法(ICSI)构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)卵体外发育的影响。结果显示:成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%(175/185)、97.2%(173/178)和96.4%(189/196)(P>0.05);成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率(73.4%和70.9%)和囊胚发育率(31.8%和29.6%)显著高于成熟培养20 h的卵母细胞(61.1%和20.6%)(P<0.05)。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率(72.7%和31.4%)高于未获能精子组(69.4%和29.3%)和不运动精子组(71.5%和30.4%),但无统计学差异(P>0.05)。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率(73.2%和66.9%)和囊胚发育率(32.7%和29.7%)差异不显著(P>0.05),但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率(51.0%和16.3%)(P<0.01)。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。

关键词：显微受精卵母细胞体外成熟精子状态聚乙烯吡咯烷酮 ICSI卵体外培养牛

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培养液中血清或其替代物对牛体外受精卵体外发育的影响

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安徽农业科学 2007年第12期35卷 3556-3557,3613页

作者：刘赛陈静波原巨强海丽且木赵晓娥马保华西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 新疆畜牧科学院新疆乌鲁木齐830000

探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液。在SOF液中分别添加10%血清(NBS)8、mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙... 详细信息

探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液。在SOF液中分别添加10%血清(NBS)8、mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙烯醇(PVA)进行牛体外受精卵的全程培养,添加NBS组的卵裂率(66.3%)显著高于添加BSA组(51.0%)(P<0.05),极显著高于添加PVA组(47.6%)(P<0.01);添加NBS组的囊胚发育率(30.9%)显著高于添加PVA组(20.7%)(P<0.05),极显著高于添加BSA组(13.6%)(P<0.01)。在培养液中添加不同浓度(10%、5%)的NBS及无血清培养液全程培养时,3组之间卵裂率(65.6%、60.0%、58.0%)差异不显著(P>0.05);10%NBS组囊胚发育率(30.0%)极显著高于5%NBS组(17.6%)和无血清组(6.0%)(P<0.01)。5%NBS组的囊胚发育率极显著地高于无血清组(P<0.01)。在受精卵培养的最初48 h用5%NBS,之后用10%NBS培养液时,卵裂率(58.6%)和囊胚发育率(29.3%)与SOF+10%NBS全程培养组(66.3%、30.9%)差异都不显著(P>0.05)。试验结果表明,SOF培养液中添加PVA、BSA替代血清时卵裂率和囊胚发育率都明显下降,可能SOF培养液中添加血清比添加PVA或BSA更有利于牛体外受精卵的体外发育。体外培养时在SOF培养液中添加一定浓度的血清以及改变血清的添加方式,可提高牛体外受精卵体外发育效果。

关键词：体外受精牛血清白蛋白聚乙烯醇血清体外培养牛

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