检索结果-内蒙古大学图书馆

华西口腔医学杂志 2022年第2期40卷 139-147页

作者：张鹏左东川牟思宇钟宇彤袁小平曾锦西南医科大学附属口腔医院正畸科泸州646000 西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室泸州646000 西南医科大学电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所泸州646000

目的探讨内向整流钾(Kir)2.1通道蛋白对人牙囊细胞(hDFC)成骨分化的影响及其机制。方法组织块结合酶消化法分离、培养hDFC,流式细胞术鉴定细胞来源,成骨诱导鉴定hDFC成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kir2.1编码基因KCNJ2在h... 详细信息

目的探讨内向整流钾(Kir)2.1通道蛋白对人牙囊细胞(hDFC)成骨分化的影响及其机制。方法组织块结合酶消化法分离、培养hDFC,流式细胞术鉴定细胞来源,成骨诱导鉴定hDFC成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kir2.1编码基因KCNJ2在hDFC中的表达,定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Kir2.1在hDFC成骨诱导前和诱导后KCNJ2基因表达量的变化;膜片钳技术检测hDFC在成骨诱导前和诱导后的细胞膜电位变化;提高细胞外钾离子的浓度(50 mmol·L^(-1))观察膜电位去极化对hDFC成骨分化能力的影响,应用Kir2.1钾通道阻断剂氯化铯(CsCl)和4-甲氧基苄基-1-萘基甲基-胺盐(ML133)观察阻断Kir2.1通道对hDFC成骨分化能力的影响,同时行RT-qPCR检测观察2种干预措施前后成骨分化相关基因[RUNX相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)]的表达变化情况。降低细胞外钾离子的浓度(2 mmol·L^(-1)),钙离子成像检测膜电位超极化对细胞内钙离子浓度的变化。结果RT-PCR结果显示,hDFC表达Kir2.1通道基因KCNJ2;RT-qPCR结果显示,成骨诱导7 d后,KCNJ2在hDFC中的表达量上调;膜片钳结果显示,成骨诱导7 d后,hDFC膜电位由(-12±3.2)mV超极化为(-47±5.2)mV;茜素红和碱性磷酸酶染色结果显示,提高细胞外钾离子的浓度或阻断Kir2.1通道蛋白的功能,能够明显抑制hDFC的成骨矿化能力;钙离子成像结果显示,膜电位超极化能够引起细胞内钙离子浓度的增高。结论Kir2.1通道蛋白介导的膜电位超极化在hDFC成骨分化的过程中起重要的作用。

关键词：人牙囊细胞内向整流钾2.1通道蛋白成骨分化膜电位超极化

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膜电位对人牙囊干细胞成骨分化的作用及其电生理机制研究

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口腔医学研究 2025年第5期41卷 413-419页

作者：顾煜婕杨宜丹廖思琪王荷一周蕊兰小蓉徐晓梅左东川曾锦西南医科大学附属口腔医院正畸科西南医科大学口腔医学院西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室

目的:探讨膜电位对人牙囊干细胞（human dental follicle stem cells, hDFCs）成骨分化的作用及其电生理机制。方法:组织块结合酶消化法分离、培养hDFCs。构建载有人Kir2.1钾通道特异短发卡RNA（short hairpin RNA,shRNA）基因序列的慢... 详细信息

目的:探讨膜电位对人牙囊干细胞（human dental follicle stem cells, hDFCs）成骨分化的作用及其电生理机制。方法:组织块结合酶消化法分离、培养hDFCs。构建载有人Kir2.1钾通道特异短发卡RNA（short hairpin RNA,shRNA）基因序列的慢病毒载体。采用慢病毒转染结合Kir2.1钾通道特异阻断剂（4-甲氧基苄基-1-萘基甲基-胺盐，ML133）,通过成骨分化诱导、茜素红染色、定量逆转录聚合酶链反应（real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-qPCR）以及全细胞膜片钳实验方法，观察药物阻断Kir2.1钾通道的功能或抑制Kir2.1钾通道的表达对hDFCs成骨分化能力以及膜电位的影响。降低细胞外钾离子的浓度（1 mmol/L）,通过钙离子成像观察促使膜电位超极化对细胞内钙离子浓度的影响。采用钙池操纵钙通道(store-operated Ca2+channels, SOCs)阻断剂(La3+)以及内质网钙泵阻断剂毒胡萝卜素（Thapsigargin, TG）,通过钙离子成像鉴定SOCs通道在hDFCs介导的钙离子内流，并评估其在膜电位超极化导致hDFCs胞内钙离子浓度变化中的作用。结果:茜素红染色、RT-qPCR以及全细胞膜片钳结果显示，药物阻断Kir2.1钾通道的功能或抑制Kir2.1钾通道的表达能够抑制hDFCs成骨矿化能力、成骨相关基因（RUNT相关转录因子2、骨钙素）的表达，并能够逆转hDFCs成骨分化过程中发生的膜电位超极化。钙成像结果显示：（1）SOCs通道介导hDFCs的钙离子内流。（2）促使膜电位超极化能够引起hDFCs胞内钙离子浓度的升高，该作用可被药物阻断Kir2.1钾通道的功能或抑制Kir2.1钾通道的表达抑制；可通过移除细胞外钙离子抑制；可被SOCs通道阻断剂抑制。结论:Kir2.1钾通道介导的膜电位超极化参与hDFCs成骨分化的调控，其机制与hDFCs胞内钙离子浓度的升高有关，而SOCs通道介导的钙离子内流在这一过程中起到重要作用。

关键词：人牙囊细胞成骨分化 Kir2.1通道膜电位超极化钙离子

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T型钙通道对人牙囊细胞成骨分化的影响

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口腔医学研究 2021年第10期37卷 900-905页

作者：杨晶晶左东川谢沂航蔡欣袁小平曾锦西南医科大学附属口腔医院正畸科四川泸州646000 西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室四川泸州646000 西南医科大学电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所四川泸州646000

目的:探讨Ca^(2+)对人牙囊细胞(hDFCs)成骨分化的影响及其分子机制。方法:分离培养hDFCs,免疫荧光染色及流式细胞术检测hDFCs的来源。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测L型钙通道、T型钙通道、三磷酸肌醇受体以及雷诺定受体在hDFCs的表达... 详细信息

目的:探讨Ca^(2+)对人牙囊细胞(hDFCs)成骨分化的影响及其分子机制。方法:分离培养hDFCs,免疫荧光染色及流式细胞术检测hDFCs的来源。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测L型钙通道、T型钙通道、三磷酸肌醇受体以及雷诺定受体在hDFCs的表达及-成骨分化相关基因RUNX相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达。茜素红染色分别检测移除细胞外Ca^(2+)、细胞内Ca^(2+)以及应用电压门控钙通道及Ca^(2+)/CaMKⅡ信号通路特异阻断剂后,hDFCs的成骨水平。结果:移除细胞外Ca^(2+)或细胞内Ca^(2+)后,hDFCs成骨能力显著降低。RT-PCR结果显示,hDFCs表达L型钙通道、T型钙通道、三磷酸肌醇受体以及雷诺定受体。L型钙通道阻断剂Nifedipine对细胞成骨能力没有影响,而T型钙通道阻断剂Amlioride能够明显抑制细胞的成骨水平。提高细胞外Ca^(2+)的浓度(5 mmol/L)能够促进hDFCs成骨分化,应用CaMKⅡ特异性阻断剂KN-93(10μmol/L)后,Ca^(2+)对hDFCs成骨分化的促进作用明显受到抑制。结论:T型钙通道介导的钙离子内流参与调控hDFCs的成骨分化。

关键词：人牙囊细胞钙离子 T型钙通道成骨分化

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钙离子对人牙囊细胞增殖、迁移和成骨分化的影响

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上海口腔医学 2019年第6期28卷 572-577页

作者：赵娴曾锦左东川徐洁余京泓徐晓梅西南医科大学附属口腔医院正畸科四川泸州646000 西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所四川泸州646000

目的:探讨Ca2+对人牙囊细胞增殖、迁移及成骨分化能力的影响。方法:分离、培养人牙囊细胞(human dental follicle cells,hDFCs),免疫荧光染色检测hDFCs来源,茜素红S和油红O染色鉴定多向分化能力;设置不同Ca2+浓度,CCK8法检测1、3、5、7 ... 详细信息

目的:探讨Ca2+对人牙囊细胞增殖、迁移及成骨分化能力的影响。方法:分离、培养人牙囊细胞(human dental follicle cells,hDFCs),免疫荧光染色检测hDFCs来源,茜素红S和油红O染色鉴定多向分化能力;设置不同Ca2+浓度,CCK8法检测1、3、5、7 d时hDFCs的增殖能力;Transwell小室检测24 h时hDFCs的迁移能力;茜素红染色半定量分析法检测钙结节形成;反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨分化相关基因RUNT相关转录因子2(runtrelated transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,3、5、7 d时,3、4、5 mmol/L Ca2+显著促进hDFCs增殖(P<0.05);3、4、5、6 mmol/L Ca2+显著促进hDFCs迁移(P<0.01),高浓度Ca2+对其增殖、迁移无显著影响(P>0.05)。茜素红染色结果表明,Ca2+浓度达4 mmol/L时,可显著促进矿化结节生成(P<0.01),矿化物生成与Ca2+呈浓度依赖性。RT-qPCR结果表明,Ca2+上调成骨分化相关基因RUNX2、OCN的表达(P<0.01)。结论:低浓度Ca2+有利于人牙囊细胞增殖与迁移,而高浓度Ca2+更有利于人牙囊细胞成骨分化。

关键词：人牙囊细胞钙离子迁移增殖成骨分化

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4NQO诱导大鼠舌黏膜癌变过程中波形蛋白的表达研究

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重庆医学 2016年第16期45卷 2194-2197页

作者：邓婷婷谭红毛亮聂敏海西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室/心血管医学研究所心肌电生理实验室四川泸州646000

目的研究舌黏膜癌变过程各阶段中波形蛋白的表达,探讨其在舌鳞状细胞癌(TSCC)发生、发展中的意义。方法采用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水法诱导大鼠TSCC的发生,收集发生过程中正常舌黏膜、上皮单纯增生、轻度上皮异常增生、中度上皮... 详细信息

目的研究舌黏膜癌变过程各阶段中波形蛋白的表达,探讨其在舌鳞状细胞癌(TSCC)发生、发展中的意义。方法采用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水法诱导大鼠TSCC的发生,收集发生过程中正常舌黏膜、上皮单纯增生、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生及TSCC组织标本共56例。采用免疫组织化学法检测波形蛋白的表达情况,并采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组织的波形蛋白mRNA表达量。结果免疫组织化学中,随着大鼠舌黏膜异常增生程度的增加,波形蛋白表达阳性率明显上升,各组间差异有统计学意义(χ2=10.685,P<0.05)。病变各组与正常舌黏膜组比较,mRNA表达差异均具有统计学意义(P<0.05);轻度、中重度上皮异常增生组、鳞癌组与上皮单纯增生组进行比较,鳞癌组差异有统计学意义(P<0.05)。上皮单纯增生、轻度、中重度上皮异常增生组、鳞癌组波形蛋白mRNA表达量分别是正常舌黏膜组的1.22、1.28、1.29、1.42倍。结论在4NQO诱导大鼠舌黏膜癌变过程中,波形蛋白随病变程度的增加表达增高,这与肿瘤的侵袭密切相关,有可能作为舌黏膜上皮癌变的预测指标。

关键词：波形蛋白 mRNA 舌鳞状细胞癌实时荧光定量PCR 4-硝基喹啉-1-氧化物

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