检索结果-内蒙古大学图书馆

机械敏感性离子通道Piezo对干细胞增殖、迁移、分化的影响

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中国病理生理杂志 2023年第6期39卷 1095-1102页

作者：谢诚李鹏云程俊西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

在细胞外的物理刺激如声、光、温度和机械力等转化为胞内生物信号反应的过程中,例如听力、疼痛、触摸、本体感觉、血压调节等,机械敏感性离子通道都在其中发挥了关键性作用。近年来,瞬时受体电位通道家族、机械活化双孔钾通道家族、上... 详细信息

在细胞外的物理刺激如声、光、温度和机械力等转化为胞内生物信号反应的过程中,例如听力、疼痛、触摸、本体感觉、血压调节等,机械敏感性离子通道都在其中发挥了关键性作用。近年来,瞬时受体电位通道家族、机械活化双孔钾通道家族、上皮钠通道家族。

关键词： Piezo蛋白机械转导钙离子干细胞

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小鼠血管壁CD34^(+)干细胞的分离、培养及鉴定

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生理学报 2023年第2期75卷 205-215页

作者：杨礼菊马颖李源党青亚程俊杨艳李鹏云西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心泸州646000 西南医科大学附属医院心内科泸州646000

血管壁干细胞(vascular wall-resident stem cells,VW-SCs)在维持血管正常功能以及损伤血管的修复过程中发挥着关键性的作用,对其功能特性的研究将有助于干细胞的调控及应用。本文旨在建立稳定的VW-SCs分离、培养及分选鉴定技术,为进一... 详细信息

血管壁干细胞(vascular wall-resident stem cells,VW-SCs)在维持血管正常功能以及损伤血管的修复过程中发挥着关键性的作用,对其功能特性的研究将有助于干细胞的调控及应用。本文旨在建立稳定的VW-SCs分离、培养及分选鉴定技术,为进一步深入研究VW-SCs在生理和疾病状态下的增殖、迁移和分化等机制提供丰富、可靠的细胞来源。首先利用组织块贴壁法获取小鼠主动脉外膜以及肠系膜动脉血管壁细胞,传代培养到细胞数量至少达到1×10^(7)后经磁珠分选和流式细胞术鉴定CD34^(+)的VW-SCs;其次采用细胞免疫荧光染色检测干细胞标志物(CD34、Flk-1、c-kit、Sca-1)以及平滑肌标志物(SM22、SM MHC)、内皮标志物(CD31)和细胞核内分裂增殖相关蛋白(Ki-67);血管壁CD34^(+)干细胞的定向分化采用EBM-2内皮分化诱导培养基和FM-2成纤维细胞培养基分别培养7天和3天;利用细胞免疫荧光染色和q-PCR检测内皮细胞标志物(CD31,VWF)和成纤维细胞标志物(Vimentin,PDGFRα)的表达。此外,采用TILLvisION胞内钙信号检测系统结合Ca^(2+)荧光探针Fura-2/AM观察CD34^(+)干细胞胞内钙库Ca^(2+)释放和胞外Ca^(2+)内流特性。结果显示,血管组织块贴壁法和磁珠分选可获取较高纯度(>90%)的小鼠主动脉外膜以及肠系膜动脉血管壁CD34^(+)干细胞。体外培养的血管壁CD34^(+)干细胞可诱导分化为内皮细胞和成纤维细胞。咖啡因和ATP可显著激活CD34^(+)干细胞胞内钙库Ca^(2+)释放,毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)耗竭内质网钙库Ca^(2+)后触发钙库操纵的外钙内流(store-operated Ca^(2+)entry,SOCE)。该方法建立了稳定、高效的血管壁CD34^(+)干细胞分离、培养和鉴定技术,为体外深入研究VW-SCs的调控机制以及靶向药物的筛选提供了保障。

关键词：血管壁干细胞细胞分离细胞鉴定磁珠分选

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儿茶酚胺检测技术的研究进展

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中国现代应用药学 2022年第2期39卷 253-260页

作者：叶珂君周小琳欧贤红医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心西南医科大学心血管医学研究所四川泸州646000

儿茶酚胺(catecholamines,CAs)是一类生物源性化合物,它们作为神经递质和激素在人和动物体内发挥着重要的生理作用。它们是诊断疾病和功能障碍的重要标志物,也是拟交感神经药物制剂的成分。因此生物样品、活细胞中CAs的测定方法,以及它... 详细信息

儿茶酚胺(catecholamines,CAs)是一类生物源性化合物,它们作为神经递质和激素在人和动物体内发挥着重要的生理作用。它们是诊断疾病和功能障碍的重要标志物,也是拟交感神经药物制剂的成分。因此生物样品、活细胞中CAs的测定方法,以及它们的精确度、灵敏度、选择性及实时性,对疾病的诊断及病理生理机制的研究具有重要意义。本文从临床生物样品、活体细胞、活体等不同层次综述近5年来CAs的检测方法,描述包括荧光成像法、电化学法、质谱法、光度分析法、非损伤成像技术等检测方法的性能特征及应用。

关键词：儿茶酚胺荧光成像法质谱法电化学法非损伤成像技术

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Synaptotagmin 1基因敲除对小鼠行为的影响

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中国应用生理学杂志 2022年第2期38卷 97-101页

作者：武南南封芮芮张宇李光曹济民殷丽天山西医科大学生理学系细胞生理学教育部重点实验室细胞生理学山西省重点实验室太原030001 西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

目的:研究Synaptotagmin 1基因敲除(Syt1^(+/-))对小鼠情绪行为的影响并初步探讨其可能机制。方法:选取8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及同窝野生型(WT)小鼠各5只,采用免疫荧光染色方法观察小鼠前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹... 详细信息

目的:研究Synaptotagmin 1基因敲除(Syt1^(+/-))对小鼠情绪行为的影响并初步探讨其可能机制。方法:选取8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及同窝野生型(WT)小鼠各5只,采用免疫荧光染色方法观察小鼠前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区等6个脑区中Syt1的表达;选用8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠9只,以及WT小鼠10只为对照,通过旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验检测比较成年Syt1^(+/-)小鼠和WT小鼠的焦虑样行为;另选用8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及WT小鼠各5只,检测小鼠前额叶皮层、海马和杏仁核的谷氨酸含量。结果:与WT小鼠相比,Syt1^(+/-)小鼠在前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区Syt1阳性细胞数目显著减少(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠在旷场中总移动距离显著减少(P<0.01),并更偏爱在外周区域活动(P<0.01),对中心区域的探索欲望显著下降(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠更偏好待在封闭安全环境中(P<0.01),开臂探索次数(P<0.05)和在其中运动的时间显著减少(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠在强迫游泳实验中不动时间明显增加(P<0.01);同时,Syt1^(+/-)小鼠杏仁核中谷氨酸的含量显著增加(P<0.01)。结论:Syt1基因敲除可以引起小鼠显著的焦虑样行为,推测与杏仁核中谷氨酸含量增加有关。

关键词： Synaptotagmin 1 焦虑谷氨酸小鼠

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通过足细胞Cdc50a基因敲除构建一种全新的肾小球硬化症小鼠模型

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四川动物 2022年第5期41卷 509-516页

作者：赵月张倩李静怡陈桂兰曾博西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

细胞膜内外层磷脂分布的不对称性是由磷脂翻转酶维持的,当磷脂翻转酶功能缺失时,细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸会暴露至细胞表面,引发细胞凋亡。CDC50A是磷脂翻转酶的重要组成亚基。本研究敲除小鼠足细胞Cdc50a基因后,发现足细胞变形受损,... 详细信息

细胞膜内外层磷脂分布的不对称性是由磷脂翻转酶维持的,当磷脂翻转酶功能缺失时,细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸会暴露至细胞表面,引发细胞凋亡。CDC50A是磷脂翻转酶的重要组成亚基。本研究敲除小鼠足细胞Cdc50a基因后,发现足细胞变形受损,产生慢性肾病的早期症状,即产生蛋白尿;随着月龄的增加,基因敲除鼠足细胞损伤及丢失加剧、肾小球的滤过屏障功能严重受损,出现肾小球滤过率降低、肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质堆积、局灶性节段性肾小球硬化等一系列病理表型改变。结果证实了细胞膜磷脂分布的不对称性对足细胞的存活和肾小球滤过屏障的完整性至关重要,并由此构建了一种全新的自发性肾小球硬化症小鼠模型。

关键词： Cdc50a基因足细胞蛋白尿肾小球硬化

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激酶抑制剂类抗肿瘤药作用机制及心脏毒性的研究进展

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华西药学杂志 2023年第5期38卷 581-586页

作者：季芳李妙龄西南医科大学心血管医学研究所、医学电生理学教育部重点实验室、医学电生理四川省重点实验室四川泸州646000

激酶作为极具潜力的抗肿瘤药物靶点被广泛研究,与激酶抑制剂靶向治疗相关的心脏不良反应使癌症患者面临更高的生存风险。现综述激酶抑制剂的分类、分子机制及不良反应(特别是心脏方面)的研究进展。

关键词：激酶激酶抑制剂小分子靶向抗肿瘤药 BCR-ABL融合基因酪氨酸激酶抑制剂血管内皮生长因子受体抑制剂表皮生长因子受体抑制剂布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂心脏毒性靶向治疗

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补骨脂酚启动自噬减轻β-GP诱导的小鼠主动脉中膜钙化

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重庆医科大学学报 2023年第7期48卷 784-792页

作者：何虎强朱俊龙李勤罗泽恩代江红胥雄飞曾宏刘勇西南医科大学附属医院血管外科、西南医科大学心血管医学研究所、医学电生理学教育部重点实验室、四川心血管病防治协同创新中心泸州646000

目的:在选定的36种中药单体中筛选能够启动细胞自噬的药物;探究补骨脂酚对小鼠血管平滑肌细胞自噬的影响以及对血管平滑肌细胞钙化的影响。方法:从中草药中提取的黄酮类化合物以不同浓度处理人脑胶质瘤细胞(human glioma cells,U87)72 h... 详细信息

目的:在选定的36种中药单体中筛选能够启动细胞自噬的药物;探究补骨脂酚对小鼠血管平滑肌细胞自噬的影响以及对血管平滑肌细胞钙化的影响。方法:从中草药中提取的黄酮类化合物以不同浓度处理人脑胶质瘤细胞(human glioma cells,U87)72 h,用MTT法得到药物对U87细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50)),并以小于IC_(50)浓度的条件下以不同浓度梯度处理U87细胞,观察U87细胞GFP-LC3微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein light chain 3,LC3)的荧光信号和Western blot检测自噬指标LC3从而观察细胞自噬活动激活情况,以筛选出能够启动自噬的药物。后续选取补骨脂酚进行进一步实验,探究药物启动自噬后对血管平滑肌细胞钙化的影响。使用β-GP构建小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化模型,分为对照组(C-CTR组)和钙化组(C-CAL组),并通过Western blot检测Runx2、BMP2及LC3的表达。使用补骨脂酚干预后,分为对照组(C-CTR组)、钙化组(C-CAL组)、钙化+补骨脂酚组(C-CAL+Administration组)、对照+补骨脂酚组(C-CTR+Administration组)4组,分别用Western blot检测LC3、Runx2和BMP2,用茜素红染色观察细胞钙化结节的形成。在动物实验中使用高脂饮食同时在腹腔注射维生素D的方式构建小鼠主动脉钙化模型,使用腹腔注射补骨脂酚的方式对小鼠进行干预,分为对照组(CTR组)、钙化组(CAL组)、钙化+补骨脂酚组(CAL+Administration组)、对照+补骨脂酚组(CTR+Administration组)4组。通过冯库萨染色观察主动脉中膜钙沉积情况,使用HE染色法观察小鼠主动脉中膜的厚度。结果:观察LC3的荧光强度和Western blot提示:细辛脂素(Asarinim)、补骨脂甲素(Bavachin)、灯心草酚(Juncusol)、桑黄酮(Mullberrin)、地榆皂苷2(Ziyuglycoside 2)、补骨脂酚(Bakuchiol)、补骨乙素(Corylifolinin)、五味子甲素(Schisandrin A)、五味子乙素(Schisandrin B)可以显著增加自噬小体的表达(P<0.05)。Western blot结果提示,在钙化的血管平滑肌细胞中,BMP2、Runx2以及LC3的表达显著增加(P<0.05)。使用补骨脂酚干预后Western blot结果提示BMP2和Runx2表达降低(P<0.05),LC3-Ⅱ表达显增加(P<0.05)。茜素红结果显示钙结节沉积也显著降低(P<0.05)。动物实验中,补骨脂酚干预后HE结果显示中膜厚度较钙化组显著增厚,冯库萨染色结果提示补骨脂酚可以显著减轻钙沉积。结论:补骨脂酚可以激活VSMCs的自噬,并减缓小鼠主动脉钙化的进程。

关键词：补骨脂酚自噬血管平滑肌细胞动脉中膜钙化

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低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠心肌细胞膜电位的影响及其机制研究

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中国病理生理杂志 2021年第11期37卷 1980-1985页

作者：李东梅杨雅雯党喜同左东川西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

目的:探讨在细胞外低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠HL-1心肌细胞膜电位的影响及其分子机制。方法:构建载有人TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体基因序列的慢病毒载体。通过病毒转染的方法使中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)或HL-1小鼠心肌细胞表达... 详细信息

目的:探讨在细胞外低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠HL-1心肌细胞膜电位的影响及其分子机制。方法:构建载有人TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体基因序列的慢病毒载体。通过病毒转染的方法使中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)或HL-1小鼠心肌细胞表达TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体。通过膜片钳记录在细胞外正常钾(5.4 mmol/L)及低钾(2.7 mmol/L)条件下的膜电位及全细胞电流。结果:电流钳结果显示,在2.7 mmol/L钾条件下,表达人TWIK-1通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现去极化,当细胞外液的钠离子被替换为N-甲基-D-葡萄糖胺(NMDG)时,膜电位去极化现象消失;而表达人TWIK-1-T118i突变体通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现超极化。电压钳结果显示,在2.7 mmol/L钾条件下,在表达人TWIK-1通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞可记录到内向阳离子电流,当细胞外液的钠离子替换为NMDG时,该内向阳离子电流消失。结论:在细胞外低钾条件下,TWIK-1通道介导的内向钠离子电流能够引起HL-1小鼠心肌细胞膜电位发生去极化。

关键词：低钾血症心肌细胞膜电位去极化 TWIK-1双孔钾通道

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新生与成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体蛋白质组学差异分析

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西南医科大学学报 2024年第2期47卷 130-135页

作者：高小平倪潇周文李畅李光西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心泸州646000

目的幼体心脏具有再生修复功能,通过分析新生大鼠与成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体的差异蛋白,从分子水平上探讨心肌受损后可能的治疗靶点。方法分别从新生和成年大鼠心脏成纤维细胞中分离出外泌体,并提取蛋白质进行高效液相色谱法(h... 详细信息

目的幼体心脏具有再生修复功能,通过分析新生大鼠与成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体的差异蛋白,从分子水平上探讨心肌受损后可能的治疗靶点。方法分别从新生和成年大鼠心脏成纤维细胞中分离出外泌体,并提取蛋白质进行高效液相色谱法(high per-formance liquid chromatography,HPLC)和液相色谱串联质谱法(liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析,鉴定差异表达的蛋白质。使用DAVID数据库对差异表达蛋白基因进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析。并进一步使用STRING数据库和Cytoscape软件进行蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)分析,以筛选出关键基因。结果在新生大鼠中共发现241个差异表达蛋白,其中上调表达的蛋白有117个,下调表达的蛋白有124个。GO分析显示上调表达基因主要涉及整合素介导的信号通路和对缺氧的反应,而对内肽酶活性负调控的基因下调表达。KEGG分析结果表明上调表达基因主要富集于Hippo信号通路,而下调表达基因主要涉及细胞外基质与受体相互作用。通过PPI分析得出有6个关键基因(Lamc1、Agrn、Itih3、Tfrc、Bgn和Atp5pd)下调,有1个关键基因(Rp17a)上调。结论通过蛋白组学和生物信息学方法,筛选出了新生大鼠和成年大鼠心脏成纤维细胞来源外泌体的差异蛋白,以及相关的信号通路和关键基因,为心肌受损精准治疗提供了潜在的靶点。

关键词：新生大鼠心脏成纤维细胞外泌体蛋白质组学

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光标测技术在心脏电生理和心律失常研究中的应用

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西南医科大学学报 2023年第4期46卷 293-297,319页

作者：李阳鹏郑雨晴李剑鸿陈唐葶谭晓秋西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室泸州646000 西南医科大学基础医学院泸州646000

光标测技术(optical mapping)自20世纪末问世以来已逐渐成为心脏电生理研究的重要技术,主要原因是:一方面,荧光探针技术和高分辨率采集技术不断发展;另一方面,单细胞和整体水平电生理技术已无法满足目前的研究需求。光标测技术具有较高... 详细信息

光标测技术(optical mapping)自20世纪末问世以来已逐渐成为心脏电生理研究的重要技术,主要原因是:一方面,荧光探针技术和高分辨率采集技术不断发展;另一方面,单细胞和整体水平电生理技术已无法满足目前的研究需求。光标测技术具有较高的时空分辨率、广阔的采样面积和较小的损伤等特点,可以直观、动态显示心脏整体的电传导和钙处理的动力学改变,在研究心脏电生理和心律失常发生机制时发挥了重要作用。光标测技术的基本原理是将电压和钙敏感染料灌注到心脏各个细胞,使用荧光激发两种荧光染料,发射光经滤波处理后被相机同时获取,采集系统可同时获得心肌膜电位和钙瞬变的高通量数据。通过后续数据分析,可获得动作电位和钙瞬变多个电生理参数及二者的耦联关系以明确疾病模型或药物干预下的电生理特性,从而揭示心律失常的机制和用于抗心律失常药物筛选。本文旨在介绍光标测技术及在常见疾病模型下的数据分析和应用,并为抗心律失常药物的研究提供技术参考。

关键词：光标测技术心脏电生理心律失常抗心律失常药物

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