检索结果-内蒙古大学图书馆

西南医科大学学报 2017年第3期40卷 236-239页

作者：毛亮黄文俊黄鹂李雪党喜同西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

目的:用重叠PCR方法将IKBA基因三个碱基进行点突变A94G、G95C、T106G。方法:根据重叠PCR原理设计IKBA基因两条末端引物及A94G、G95C、T106G突变引物,从HUVEC细胞克隆IKBA基因,将其作为模板进行第一次PCR,将第一次PCR产物稀释10 000~50 ... 详细信息

目的:用重叠PCR方法将IKBA基因三个碱基进行点突变A94G、G95C、T106G。方法:根据重叠PCR原理设计IKBA基因两条末端引物及A94G、G95C、T106G突变引物,从HUVEC细胞克隆IKBA基因,将其作为模板进行第一次PCR,将第一次PCR产物稀释10 000~50 000倍后作为模板,扩增突变体IKBAm,并克隆到p LVX-IRES-Zs Green载体,用双酶切及DNA测序筛选阳性质粒。结果:从HUVEC细胞克隆的IKBA基因及其突变体IKBAm基因长度均为954 bp,编码317个氨基酸,与IKBA基因相比,突变体IKBAm基因3个位点发生突变94A→G,95G→C,106T→G,编码的32/36位氨基酸由Ser突变为Ala。结论:成功克隆人IKBA基因及其32/36 Ser→Ala突变体IKBAm。

关键词：重叠PCR IKBA 点突变 NF-κB

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注射异丙肾上腺素建立大鼠心肌肥厚模型

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中国医科大学学报 2017年第5期46卷 406-408,412页

作者：赵美眯李卓杨艳张翀翯陈思充曾晓荣郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室、四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

目的采用异丙肾上腺素诱导心肌肥厚,建立大鼠模型,并研究该动物模型的基本特性。方法大鼠背部皮下注射剂量为5 mg/kg的异丙肾上腺素,每日1次,连续注射14 d。结果模型组大鼠的全心重/体质量,左心室重/体质量均明显增加。模型组大鼠血清... 详细信息

目的采用异丙肾上腺素诱导心肌肥厚,建立大鼠模型,并研究该动物模型的基本特性。方法大鼠背部皮下注射剂量为5 mg/kg的异丙肾上腺素,每日1次,连续注射14 d。结果模型组大鼠的全心重/体质量,左心室重/体质量均明显增加。模型组大鼠血清中羟脯氨酸(HYP)含量显著增加。模型组大鼠心肌组织中总超氧化物歧化酶(SOD)含量与对照组相比显著降低,而丙二醛(MDA)含量明显升高。结论皮下注射异丙肾上腺素14 d,可成功诱导大鼠心肌肥厚模型,为深入研究心肌肥厚的确切机制奠定基础。

关键词：心肌肥厚异丙肾上腺素动物模型

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TRPV4调节血管张力作用的研究进展

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西南医科大学学报 2017年第6期40卷 603-607页

作者：张晓东(综述) 杨艳(审校) 西南医科大学电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所四川泸州646000

瞬时感受器电位通道（transientreceptorpotentialchan一nel,TRP通道）是一类非选择性阳离子通道,主要对钠离子和钙离子通透,几乎在机体的所有细胞均有分布.

关键词： TRPV4 血管平滑肌细胞内皮细胞血管张力调节

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右美托咪定对乳大鼠心肌细胞线粒体活性氧和细胞凋亡的影响

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四川生理科学杂志 2017年第1期39卷 6-8页

作者：曹露周丹李涛陈琳琳谭晓秋刘力刘雪茹西南医科大学附属医院麻醉科医学电生理学教育部重点实验室.西南医科大学心血管医学研究所四川泸州646000

目的:探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)对线粒体介导的乳大鼠心肌细胞氧化应激通路的作用。方法:取新生乳大鼠(3~4天)的心肌进行原代培养,培养24h后分为对照组(C组)、H_2O_2组(终浓度500μM,H组)、右美托咪定组(5μM DEX,D组)、联... 详细信息

目的:探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)对线粒体介导的乳大鼠心肌细胞氧化应激通路的作用。方法:取新生乳大鼠(3~4天)的心肌进行原代培养,培养24h后分为对照组(C组)、H_2O_2组(终浓度500μM,H组)、右美托咪定组(5μM DEX,D组)、联合用药组(500μM H_2O_2+5μM DEX,DH组)。各组细胞分别给予相应药物刺激6h,采用流式细胞仪测定活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)水平及心肌细胞凋亡变化;并通过ELISA法测定各组乳大鼠心肌细胞线粒体介导的凋亡因子Caspase-3,Caspase-9表达的变化。结果:与H_2O_2组相比,DEX明显抑制H_2O_2介导的乳大鼠心肌细胞的ROS水平增加(P<0.05);下调线粒体介导的下游凋亡因子Caspase-3,Caspase-9的表达(P<0.05),从而减少H_2O_2诱导的凋亡(P<0.05)。结论:右美托咪定通过抑制心肌细胞活性氧水平以及下调线粒体介导的Caspase-3和Caspase-9的表达发挥抑制凋亡作用,对心肌细胞有一定的保护作用。

关键词：右美托咪定心肌细胞活性氧氧化应激细胞凋亡

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异丙酚对新生大鼠心肌细胞线粒体活性氧和细胞凋亡的影响

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西南医科大学学报 2017年第2期40卷 105-108页

作者：刘雪茹曹露范学慧李涛陈琳琳余奕言西南医科大学附属医院麻醉科四川泸州646000 医学电生理学教育部重点实验室西南医科大学心血管医学研究所

目的:探讨异丙酚对线粒体介导的乳大鼠心肌细胞氧化应激通路的作用。方法:取新生大鼠乳鼠(3~4 d)心肌细胞作为研究对象,实验分为对照组(C组)、H_2O_2组(终浓度500μM,H组)、异丙酚组(50μM异丙酚,P组)、同时使用H_2O_2和异丙酚组(500μM... 详细信息

目的:探讨异丙酚对线粒体介导的乳大鼠心肌细胞氧化应激通路的作用。方法:取新生大鼠乳鼠(3~4 d)心肌细胞作为研究对象,实验分为对照组(C组)、H_2O_2组(终浓度500μM,H组)、异丙酚组(50μM异丙酚,P组)、同时使用H_2O_2和异丙酚组(500μM H_2O_2+50μM异丙酚,PH组)。采用流式细胞分析仪测定异丙酚对大鼠乳鼠心肌细胞ROS水平的影响,使用ELISA法测定各组心肌细胞线粒体途径介导的凋亡因子Caspase 3和Caspase 9活性变化。结果 :异丙酚对H_2O_2介导的大鼠乳鼠心肌细胞ROS水平增加具有明显的抑制作用(P<0.05)。异丙酚可明显下调线粒体途径介导的凋亡因子Caspase 9和Caspase 3的活性(P<0.01)。结论:异丙酚通过抑制心肌细胞ROS水平以及下调线粒体介导的凋亡因子Caspase 9和Caspase 3的活性发挥对心肌细胞的保护作用。

关键词：异丙酚心肌细胞活性氧氧化应激细胞凋亡

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异丙酚对表达在HEK293细胞上的大电导钙激活钾(BKCa)通道的作用

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西南医科大学学报 2017年第1期40卷 39-42页

作者：刘雪茹刘力程俊黄文俊谭晓秋西南医科大学附属医院麻醉科四川泸州646000 西南医科大学医学电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所四川泸州646000

目的:研究异丙酚对表达在HEK293细胞上的BK_(Ca)通道的作用,探讨异丙酚降低血压的作用机制。方法:将含有人血管平滑肌BK_(Ca)通道α亚单位(h Slo1)的表达质粒pc DNA3.1-h Slo1使用脂质体转染法(lipofectamine 2000)转染至培养的HEK293细... 详细信息

目的:研究异丙酚对表达在HEK293细胞上的BK_(Ca)通道的作用,探讨异丙酚降低血压的作用机制。方法:将含有人血管平滑肌BK_(Ca)通道α亚单位(h Slo1)的表达质粒pc DNA3.1-h Slo1使用脂质体转染法(lipofectamine 2000)转染至培养的HEK293细胞,使用膜片钳全细胞和单通道记录方式研究异丙酚对BK_(Ca)通道的作用。结果:在全细胞构型下,56μM异丙酚能够明显增加BK_(Ca)宏观电流(P<0.01或P<0.05),在膜电位(Vm)为+60 mV时,56μM异丙酚明显增加BK_(Ca)宏观电流密度(87.29±7.10 pA/pF到131.21±9.68 pA/p F,n=6),两组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。在内面向外式膜片下,56μM异丙酚能够明显增加BK_(Ca)单通道开放概率(0.015±0.002到0.066±0.013,n=10),两组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:异丙酚能够明显激活表达在HEK293细胞上的BK_(Ca)通道,BK_(Ca)通道的激活可能参与了异丙酚介导的血管舒张。

关键词：异丙酚大电导钙激活钾通道血管张力基因转染

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人心房肌AT1R和AT2R表达质粒的构建和鉴定

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西南医科大学学报 2017年第1期40卷 31-34页

作者：余奕言李涛谭晓秋李妙龄西南医科大学心血管医学研究所、医学电生理学省部教育部重点实验室、四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

目的:血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作为肾素-血管紧张素系统(RAS)中重要的致心律失常的肽类物质,主要通过与细胞膜上AT1、AT2两种受体亚型结合而发挥其生物学作用。本研究构建带有荧光蛋白标记的AT1R和AT2R质粒,旨在为进一步观察其生物学效应奠... 详细信息

目的:血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作为肾素-血管紧张素系统(RAS)中重要的致心律失常的肽类物质,主要通过与细胞膜上AT1、AT2两种受体亚型结合而发挥其生物学作用。本研究构建带有荧光蛋白标记的AT1R和AT2R质粒,旨在为进一步观察其生物学效应奠定基础。方法:通过PCR扩增出含有Bam HⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的目的基因(AT1R、AT2R)片段,然后分别与有着相同酶切位点的载体pDs Red-N1、pEGFP-N3连接。将重组子转入TOP10感受态细胞中,通过抗生素筛选、酶切鉴定等方法挑选出阳性克隆,并经测序鉴定。结果:经过定向克隆的方法,最后得到的表达质粒酶切结果正确,测序结果与基因库数据基本一致。结论:成功构建带有红色荧光表达人心房肌AT1R、AT2R的质粒pDs Red-N1-AT1R、pDs Red-N1-AT2R和带有绿色荧光表达人心房肌AT1R、AT2R的质粒pEGFP-N3-AT1R、pEGFP-N3-AT2R。

关键词：血管紧张素II受体质粒构建肾素-血管紧张素系统

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窦性心律与心房颤动患者心房成纤维细胞大电导钙激活钾通道表达差异研究

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中国胸心血管外科临床杂志 2017年第12期24卷 937-942页

作者：毕红亲李妙玲周伟李光董亚辉黄涛于风旭西南医科大学附属医院心胸外科四川泸州646000 西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学省部教育部重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

目的通过分析窦性心律与心房颤动患者心房肌成纤维细胞BKCa通道表达差异,探索心肌纤维化产生的机制,为治疗和逆转心房颤动结构重构提供新的治疗策略。方法选择西南医科大学附属医院心胸外科2015年6月至2016年12月收治确诊为风湿性心脏... 详细信息

目的通过分析窦性心律与心房颤动患者心房肌成纤维细胞BKCa通道表达差异,探索心肌纤维化产生的机制,为治疗和逆转心房颤动结构重构提供新的治疗策略。方法选择西南医科大学附属医院心胸外科2015年6月至2016年12月收治确诊为风湿性心脏病且行体外循环瓣膜置换术的10例患者,其中窦性心律患者(窦性心律组)5例,男2例、女3例,年龄(49.1±8.3)岁;心房颤动患者(心房颤动组)5例,男3例、女2例,年龄(50.3±5.8)岁。于术中获取右心耳组织约100 mg,采用组织块贴壁法培养心房成纤维细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测培养的成纤维细胞中BKCa通道m RNA表达水平及western blotting检测BKCa通道蛋白的表达情况。结果 (1)比较心房颤动组及窦性心率组患者的一般情况,两组患者年龄(t=1.21,P=0.67)、性别(t=2.56,P=0.75)差异无统计学意义。两组患者左房内径、右房内径差异有统计学意义(t=19.45,P=0.01;t=23.52,P=0.06)。(2)两组BKCaα和BKCaβ1的m RNA表达差异无统计学意义(t=3.14,P=0.79;t=2.88,P=0.69);(3)两组BKCaα和BKCaβ1的蛋白表达差异均无统计学意义(t=0.55,P=0.31;t=0.73,P=0.46)。结论 BKCa通道可能不参与心房颤动的发生及维持,其在心肌纤维化进程中可能发挥着作用。

关键词：心房颤动窦性心律成纤维细胞 BKCa

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外泌体介导的靶向基因运送及在心血管疾病中的应用

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第12期32卷 1286-1294页

作者：李雪党喜同曾晓荣西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

外泌体是体内几乎所有细胞分泌的具有双层脂质膜结构的纳米级小囊泡。外泌体大小均匀,平均直径为40-120 nm,存在于所有体液中。外泌体曾一度被认为是细胞成熟过程中清除废弃细胞器的‘垃圾袋’。但近年研究显示：外泌体含有丰富的来源... 详细信息

外泌体是体内几乎所有细胞分泌的具有双层脂质膜结构的纳米级小囊泡。外泌体大小均匀,平均直径为40-120 nm,存在于所有体液中。外泌体曾一度被认为是细胞成熟过程中清除废弃细胞器的‘垃圾袋’。但近年研究显示：外泌体含有丰富的来源于‘供体细胞’的信号分子,如蛋白质、DNA、mRNA、miRNA以及lncRNA等。当外泌体与‘受体细胞’融合时,这些信号分子便被运送到‘受体细胞’,从而实现细胞-细胞之间的通讯,影响‘受体细胞’的生理病理过程。虽然外泌体的研究目前主要集中在癌症等疾病的预防、诊断与治疗中,但是越来越多的研究显示,外泌体在心血管系统的生理及病理过程中同样发挥着重要作用。本文将对外泌体的起源、分离与纯化方法及外泌体介导的‘细胞-细胞’之间的通讯机制进行综述,并重点论述利用基因工程技术对外泌体进行靶向运输的方法及靶向外泌体运送在心血管疾病治疗中的应用。

关键词：外泌体 miRNA 靶向基因运送心血管疾病基因治疗

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Flag和GFP双标记的SK2通道表达质粒的构建、鉴定和序列分析

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泸州医学院学报 2016年第6期39卷 527-530页

作者：黄文俊李涛范学慧余奕言杨艳曾晓荣谭晓秋西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

目的:采用Overlapping PCR(重叠PCR)法进行人源SK2通道Flag和GFP融合表达质粒的构建,为下一步胞外运用Flag抗体进行SK2通道的转运调控研究奠定基础。方法:在既往克隆的人SK2通道基因的表达质粒p IRES-SK2的基础上,采用重叠PCR法构建Flag... 详细信息

目的:采用Overlapping PCR(重叠PCR)法进行人源SK2通道Flag和GFP融合表达质粒的构建,为下一步胞外运用Flag抗体进行SK2通道的转运调控研究奠定基础。方法:在既往克隆的人SK2通道基因的表达质粒p IRES-SK2的基础上,采用重叠PCR法构建Flag和GFP双标签标记的表达质粒pEGFP-N3-Flag-SK2(简写为Flag-SK2-GFP)。结果:构建的表达质粒Flag标签插入SK2通道的S1-S2胞外环区域,GFP标签连接SK2通道胞内的C末端,通过酶切、测序等证实质粒构建成功。结论:成功构建人心房肌SK2通道基因表达质粒Flag-SK2-GFP,为下一步研究SK2通道转运过程及调控机制奠定了基础。

关键词：小电导钙激活钾通道重叠PCR 基因工程

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