检索结果-内蒙古大学图书馆

生理学报 2023年第2期75卷 205-215页

作者：杨礼菊马颖李源党青亚程俊杨艳李鹏云西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心西南医科大学附属医院心内科

血管壁干细胞（vascular wall-resident stem cells, VW-SCs）在维持血管正常功能以及损伤血管的修复过程中发挥着关键性的作用，对其功能特性的研究将有助于干细胞的调控及应用。本文旨在建立稳定的VW-SCs分离、培养及分选鉴定技术，... 详细信息

血管壁干细胞（vascular wall-resident stem cells, VW-SCs）在维持血管正常功能以及损伤血管的修复过程中发挥着关键性的作用，对其功能特性的研究将有助于干细胞的调控及应用。本文旨在建立稳定的VW-SCs分离、培养及分选鉴定技术，为进一步深入研究VW-SCs在生理和疾病状态下的增殖、迁移和分化等机制提供丰富、可靠的细胞来源。首先利用组织块贴壁法获取小鼠主动脉外膜以及肠系膜动脉血管壁细胞，传代培养到细胞数量至少达到1×10～7后经磁珠分选和流式细胞术鉴定CD34+的VW-SCs；其次采用细胞免疫荧光染色检测干细胞标志物（CD34、Flk-1、c-kit、Sca-1）以及平滑肌标志物（SM22、SM MHC）、内皮标志物（CD31）和细胞核内分裂增殖相关蛋白（Ki-67）；血管壁CD34+干细胞的定向分化采用EBM-2内皮分化诱导培养基和FM-2成纤维细胞培养基分别培养7天和3天；利用细胞免疫荧光染色和q-PCR检测内皮细胞标志物（CD31, VWF）和成纤维细胞标志物（Vimentin, PDGFRα）的表达。此外，采用TILLvisION胞内钙信号检测系统结合Ca2+荧光探针Fura-2/AM观察CD34+干细胞胞内钙库Ca2+释放和胞外Ca2+内流特性。结果显示，血管组织块贴壁法和磁珠分选可获取较高纯度（> 90%）的小鼠主动脉外膜以及肠系膜动脉血管壁CD34+干细胞。体外培养的血管壁CD34+干细胞可诱导分化为内皮细胞和成纤维细胞。咖啡因和ATP可显著激活CD34+干细胞胞内钙库Ca2+释放，毒胡萝卜素（thapsigargin, TG）耗竭内质网钙库Ca2+后触发钙库操纵的外钙内流(store-operated Ca2+entry, SOCE)。该方法建立了稳定、高效的血管壁CD34+干细胞分离、培养和鉴定技术，为体外深入研究VW-SCs的调控机制以及靶向药物的筛选提供了保障。

关键词：血管壁干细胞细胞分离细胞鉴定磁珠分选

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机械敏感性离子通道Piezo对干细胞增殖、迁移、分化的影响

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中国病理生理杂志 2023年第6期39卷 1095-1102页

作者：谢诚李鹏云程俊西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心四川泸州646000

在细胞外的物理刺激如声、光、温度和机械力等转化为胞内生物信号反应的过程中,例如听力、疼痛、触摸、本体感觉、血压调节等,机械敏感性离子通道都在其中发挥了关键性作用。近年来,瞬时受体电位通道家族、机械活化双孔钾通道家族、上... 详细信息

在细胞外的物理刺激如声、光、温度和机械力等转化为胞内生物信号反应的过程中,例如听力、疼痛、触摸、本体感觉、血压调节等,机械敏感性离子通道都在其中发挥了关键性作用。近年来,瞬时受体电位通道家族、机械活化双孔钾通道家族、上皮钠通道家族。

关键词： Piezo蛋白机械转导钙离子干细胞

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Synaptotagmin 1基因敲除对小鼠行为的影响

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中国应用生理学杂志 2022年第2期38卷 97-101页

作者：武南南封芮芮张宇李光曹济民殷丽天山西医科大学生理学系细胞生理学教育部重点实验室细胞生理学山西省重点实验室太原030001 西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

目的:研究Synaptotagmin 1基因敲除(Syt1^(+/-))对小鼠情绪行为的影响并初步探讨其可能机制。方法:选取8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及同窝野生型(WT)小鼠各5只,采用免疫荧光染色方法观察小鼠前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹... 详细信息

目的:研究Synaptotagmin 1基因敲除(Syt1^(+/-))对小鼠情绪行为的影响并初步探讨其可能机制。方法:选取8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及同窝野生型(WT)小鼠各5只,采用免疫荧光染色方法观察小鼠前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区等6个脑区中Syt1的表达;选用8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠9只,以及WT小鼠10只为对照,通过旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验检测比较成年Syt1^(+/-)小鼠和WT小鼠的焦虑样行为;另选用8周龄雄性Syt1^(+/-)小鼠及WT小鼠各5只,检测小鼠前额叶皮层、海马和杏仁核的谷氨酸含量。结果:与WT小鼠相比,Syt1^(+/-)小鼠在前额叶皮层、海马、杏仁核、伏隔核、纹状体和腹侧被盖区Syt1阳性细胞数目显著减少(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠在旷场中总移动距离显著减少(P<0.01),并更偏爱在外周区域活动(P<0.01),对中心区域的探索欲望显著下降(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠更偏好待在封闭安全环境中(P<0.01),开臂探索次数(P<0.05)和在其中运动的时间显著减少(P<0.01);Syt1^(+/-)小鼠在强迫游泳实验中不动时间明显增加(P<0.01);同时,Syt1^(+/-)小鼠杏仁核中谷氨酸的含量显著增加(P<0.01)。结论:Syt1基因敲除可以引起小鼠显著的焦虑样行为,推测与杏仁核中谷氨酸含量增加有关。

关键词： Synaptotagmin 1 焦虑谷氨酸小鼠

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TWIK-1通道在低血钾诱发人心肌细胞异常起搏活动中的作用及其机制

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中国病理生理杂志 2025年第5期41卷 895-901页

作者：张恒羲熊蕾巫悦吕金花左征李若兰张德绸刘平左东川西南医科大学心血管医学研究所电生理学教育部重点实验室四川泸州646000 吉林大学第一医院心内科吉林长春130021 西南医科大学中西医结合学院附属中医医院神经内科四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院心血管内科四川泸州646000

目的:探讨TWIK-1通道在低血钾诱发人心肌细胞异常起搏活动中的作用和电生理机制。方法:构建载有人TWIK-1、TWIK-1 shRNA或TWIK-1-T118i突变体基因序列的慢病毒载体。人诱导多能干细胞分化来源心肌细胞(human induced pluripotent stem c... 详细信息

目的:探讨TWIK-1通道在低血钾诱发人心肌细胞异常起搏活动中的作用和电生理机制。方法:构建载有人TWIK-1、TWIK-1 shRNA或TWIK-1-T118i突变体基因序列的慢病毒载体。人诱导多能干细胞分化来源心肌细胞(human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs)分为对照组和TWIK-1敲减组。HL-1小鼠心肌细胞分为对照组、TWIK-1通道过表达组和TWIK-1-T118i突变体通道过表达组。通过膜片钳监测细胞外低钾(1 mmol/L)对各组心肌细胞膜电位以及全细胞电流的影响。结果:电流钳结果显示,在1 mmol/L细胞外钾条件下,hiPSC-CMs以及过表达人TWIK-1通道的HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现去极化并导致异常自发起搏活动的发生,该现象可通过移除细胞外液钠离子或敲减TWIK-1基因消除;而对照HL-1小鼠心肌细胞以及过表达人TWIK-1-T118i突变体通道的HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现超极化,不伴有异常自发起搏活动的发生。电压钳结果显示,在低钾条件下,在发生异常自发起搏活动的hiPSC-CMs可记录到TWIK-1介导的钠漏电流,该电流可被TWIK-1非选择性阻断剂quinine阻断。结论:低血钾时,TWIK-1通道介导的钠漏电流导致人心肌细胞异常起搏活动的发生。

关键词： TWIK-1双孔钾通道低钾血症心肌细胞异常起搏活动

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补骨脂酚启动自噬减轻β-GP诱导的小鼠主动脉中膜钙化

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重庆医科大学学报 2023年第7期48卷 784-792页

作者：何虎强朱俊龙李勤罗泽恩代江红胥雄飞曾宏刘勇西南医科大学附属医院血管外科、西南医科大学心血管医学研究所、医学电生理学教育部重点实验室、四川心血管病防治协同创新中心泸州646000

目的:在选定的36种中药单体中筛选能够启动细胞自噬的药物;探究补骨脂酚对小鼠血管平滑肌细胞自噬的影响以及对血管平滑肌细胞钙化的影响。方法:从中草药中提取的黄酮类化合物以不同浓度处理人脑胶质瘤细胞(human glioma cells,U87)72 h... 详细信息

目的:在选定的36种中药单体中筛选能够启动细胞自噬的药物;探究补骨脂酚对小鼠血管平滑肌细胞自噬的影响以及对血管平滑肌细胞钙化的影响。方法:从中草药中提取的黄酮类化合物以不同浓度处理人脑胶质瘤细胞(human glioma cells,U87)72 h,用MTT法得到药物对U87细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50)),并以小于IC_(50)浓度的条件下以不同浓度梯度处理U87细胞,观察U87细胞GFP-LC3微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein light chain 3,LC3)的荧光信号和Western blot检测自噬指标LC3从而观察细胞自噬活动激活情况,以筛选出能够启动自噬的药物。后续选取补骨脂酚进行进一步实验,探究药物启动自噬后对血管平滑肌细胞钙化的影响。使用β-GP构建小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化模型,分为对照组(C-CTR组)和钙化组(C-CAL组),并通过Western blot检测Runx2、BMP2及LC3的表达。使用补骨脂酚干预后,分为对照组(C-CTR组)、钙化组(C-CAL组)、钙化+补骨脂酚组(C-CAL+Administration组)、对照+补骨脂酚组(C-CTR+Administration组)4组,分别用Western blot检测LC3、Runx2和BMP2,用茜素红染色观察细胞钙化结节的形成。在动物实验中使用高脂饮食同时在腹腔注射维生素D的方式构建小鼠主动脉钙化模型,使用腹腔注射补骨脂酚的方式对小鼠进行干预,分为对照组(CTR组)、钙化组(CAL组)、钙化+补骨脂酚组(CAL+Administration组)、对照+补骨脂酚组(CTR+Administration组)4组。通过冯库萨染色观察主动脉中膜钙沉积情况,使用HE染色法观察小鼠主动脉中膜的厚度。结果:观察LC3的荧光强度和Western blot提示:细辛脂素(Asarinim)、补骨脂甲素(Bavachin)、灯心草酚(Juncusol)、桑黄酮(Mullberrin)、地榆皂苷2(Ziyuglycoside 2)、补骨脂酚(Bakuchiol)、补骨乙素(Corylifolinin)、五味子甲素(Schisandrin A)、五味子乙素(Schisandrin B)可以显著增加自噬小体的表达(P<0.05)。Western blot结果提示,在钙化的血管平滑肌细胞中,BMP2、Runx2以及LC3的表达显著增加(P<0.05)。使用补骨脂酚干预后Western blot结果提示BMP2和Runx2表达降低(P<0.05),LC3-Ⅱ表达显增加(P<0.05)。茜素红结果显示钙结节沉积也显著降低(P<0.05)。动物实验中,补骨脂酚干预后HE结果显示中膜厚度较钙化组显著增厚,冯库萨染色结果提示补骨脂酚可以显著减轻钙沉积。结论:补骨脂酚可以激活VSMCs的自噬,并减缓小鼠主动脉钙化的进程。

关键词：补骨脂酚自噬血管平滑肌细胞动脉中膜钙化

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通过足细胞Cdc50a基因敲除构建一种全新的肾小球硬化症小鼠模型

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四川动物 2022年第5期41卷 509-516页

作者：赵月张倩李静怡陈桂兰曾博西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

细胞膜内外层磷脂分布的不对称性是由磷脂翻转酶维持的,当磷脂翻转酶功能缺失时,细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸会暴露至细胞表面,引发细胞凋亡。CDC50A是磷脂翻转酶的重要组成亚基。本研究敲除小鼠足细胞Cdc50a基因后,发现足细胞变形受损,... 详细信息

细胞膜内外层磷脂分布的不对称性是由磷脂翻转酶维持的,当磷脂翻转酶功能缺失时,细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸会暴露至细胞表面,引发细胞凋亡。CDC50A是磷脂翻转酶的重要组成亚基。本研究敲除小鼠足细胞Cdc50a基因后,发现足细胞变形受损,产生慢性肾病的早期症状,即产生蛋白尿;随着月龄的增加,基因敲除鼠足细胞损伤及丢失加剧、肾小球的滤过屏障功能严重受损,出现肾小球滤过率降低、肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质堆积、局灶性节段性肾小球硬化等一系列病理表型改变。结果证实了细胞膜磷脂分布的不对称性对足细胞的存活和肾小球滤过屏障的完整性至关重要,并由此构建了一种全新的自发性肾小球硬化症小鼠模型。

关键词： Cdc50a基因足细胞蛋白尿肾小球硬化

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儿茶酚胺检测技术的研究进展

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中国现代应用药学 2022年第2期39卷 253-260页

作者：叶珂君周小琳欧贤红医学电生理学教育部重点实验室医学电生理四川省重点实验室四川省心血管疾病防治协同创新中心西南医科大学心血管医学研究所四川泸州646000

儿茶酚胺(catecholamines,CAs)是一类生物源性化合物,它们作为神经递质和激素在人和动物体内发挥着重要的生理作用。它们是诊断疾病和功能障碍的重要标志物,也是拟交感神经药物制剂的成分。因此生物样品、活细胞中CAs的测定方法,以及它... 详细信息

儿茶酚胺(catecholamines,CAs)是一类生物源性化合物,它们作为神经递质和激素在人和动物体内发挥着重要的生理作用。它们是诊断疾病和功能障碍的重要标志物,也是拟交感神经药物制剂的成分。因此生物样品、活细胞中CAs的测定方法,以及它们的精确度、灵敏度、选择性及实时性,对疾病的诊断及病理生理机制的研究具有重要意义。本文从临床生物样品、活体细胞、活体等不同层次综述近5年来CAs的检测方法,描述包括荧光成像法、电化学法、质谱法、光度分析法、非损伤成像技术等检测方法的性能特征及应用。

关键词：儿茶酚胺荧光成像法质谱法电化学法非损伤成像技术

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低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠心肌细胞膜电位的影响及其机制研究

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中国病理生理杂志 2021年第11期37卷 1980-1985页

作者：李东梅杨雅雯党喜同左东川西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川泸州646000

目的:探讨在细胞外低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠HL-1心肌细胞膜电位的影响及其分子机制。方法:构建载有人TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体基因序列的慢病毒载体。通过病毒转染的方法使中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)或HL-1小鼠心肌细胞表达... 详细信息

目的:探讨在细胞外低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠HL-1心肌细胞膜电位的影响及其分子机制。方法:构建载有人TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体基因序列的慢病毒载体。通过病毒转染的方法使中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)或HL-1小鼠心肌细胞表达TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体。通过膜片钳记录在细胞外正常钾(5.4 mmol/L)及低钾(2.7 mmol/L)条件下的膜电位及全细胞电流。结果:电流钳结果显示,在2.7 mmol/L钾条件下,表达人TWIK-1通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现去极化,当细胞外液的钠离子被替换为N-甲基-D-葡萄糖胺(NMDG)时,膜电位去极化现象消失;而表达人TWIK-1-T118i突变体通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现超极化。电压钳结果显示,在2.7 mmol/L钾条件下,在表达人TWIK-1通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞可记录到内向阳离子电流,当细胞外液的钠离子替换为NMDG时,该内向阳离子电流消失。结论:在细胞外低钾条件下,TWIK-1通道介导的内向钠离子电流能够引起HL-1小鼠心肌细胞膜电位发生去极化。

关键词：低钾血症心肌细胞膜电位去极化 TWIK-1双孔钾通道

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内向整流钾2.1通道蛋白对人牙囊细胞成骨分化的影响及其机制研究

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华西口腔医学杂志 2022年第2期40卷 139-147页

作者：张鹏左东川牟思宇钟宇彤袁小平曾锦西南医科大学附属口腔医院正畸科泸州646000 西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室泸州646000 西南医科大学电生理学教育部重点实验室心血管医学研究所泸州646000

目的探讨内向整流钾(Kir)2.1通道蛋白对人牙囊细胞(hDFC)成骨分化的影响及其机制。方法组织块结合酶消化法分离、培养hDFC,流式细胞术鉴定细胞来源,成骨诱导鉴定hDFC成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kir2.1编码基因KCNJ2在h... 详细信息

目的探讨内向整流钾(Kir)2.1通道蛋白对人牙囊细胞(hDFC)成骨分化的影响及其机制。方法组织块结合酶消化法分离、培养hDFC,流式细胞术鉴定细胞来源,成骨诱导鉴定hDFC成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kir2.1编码基因KCNJ2在hDFC中的表达,定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Kir2.1在hDFC成骨诱导前和诱导后KCNJ2基因表达量的变化;膜片钳技术检测hDFC在成骨诱导前和诱导后的细胞膜电位变化;提高细胞外钾离子的浓度(50 mmol·L^(-1))观察膜电位去极化对hDFC成骨分化能力的影响,应用Kir2.1钾通道阻断剂氯化铯(CsCl)和4-甲氧基苄基-1-萘基甲基-胺盐(ML133)观察阻断Kir2.1通道对hDFC成骨分化能力的影响,同时行RT-qPCR检测观察2种干预措施前后成骨分化相关基因[RUNX相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)]的表达变化情况。降低细胞外钾离子的浓度(2 mmol·L^(-1)),钙离子成像检测膜电位超极化对细胞内钙离子浓度的变化。结果RT-PCR结果显示,hDFC表达Kir2.1通道基因KCNJ2;RT-qPCR结果显示,成骨诱导7 d后,KCNJ2在hDFC中的表达量上调;膜片钳结果显示,成骨诱导7 d后,hDFC膜电位由(-12±3.2)mV超极化为(-47±5.2)mV;茜素红和碱性磷酸酶染色结果显示,提高细胞外钾离子的浓度或阻断Kir2.1通道蛋白的功能,能够明显抑制hDFC的成骨矿化能力;钙离子成像结果显示,膜电位超极化能够引起细胞内钙离子浓度的增高。结论Kir2.1通道蛋白介导的膜电位超极化在hDFC成骨分化的过程中起重要的作用。

关键词：人牙囊细胞内向整流钾2.1通道蛋白成骨分化膜电位超极化

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针刺原位开窗胸主动脉腔内修复术治疗主动脉夹层累及主动脉弓

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中国介入影像与治疗学 2024年第9期21卷 517-521页

作者：朱俊龙徐通洁李朋代江红陈豪窦涠刘勇何虎强西南医科大学附属医院血管外科四川泸州646000 西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室四川心血管病防治协同创新中心四川泸州646000 隆昌市人民医院外七科四川内江642150 重庆市第九人民院胃肠血管外科重庆400799

目的观察针刺原位开窗胸主动脉腔内修复术(TEVAR)治疗主动脉夹层(AD)累及主动脉弓的效果。方法回顾性分析16例接受针刺原位开窗TEVAR重建主动脉弓分支的AD累及主动脉弓患者,记录开窗数目、技术成功率及治疗相关并发症;通过随访评估夹层... 详细信息

目的观察针刺原位开窗胸主动脉腔内修复术(TEVAR)治疗主动脉夹层(AD)累及主动脉弓的效果。方法回顾性分析16例接受针刺原位开窗TEVAR重建主动脉弓分支的AD累及主动脉弓患者,记录开窗数目、技术成功率及治疗相关并发症;通过随访评估夹层修复、开窗分支血管通畅性及有无内漏等,记录患者生存情况。结果对16例均成功植入主动脉主体支架;对其中4例植入Z0、Z1及Z2区三开窗支架,6例植入Z1及Z2区双开窗支架,2例植入Z0及Z1区双开窗支架,4例植入Z2区单开窗支架。头臂干(BCT)开窗成功率83.33%(5/6),对1例未成功开通者行左颈总动脉(LCCA)-右颈总动脉搭桥术;LCCA开窗成功率100%(12/12);左锁骨下动脉(LSA)开窗成功率87.50%(14/16),对2例未顺利开窗者改行腋-腋动脉人工血管旁路转流术。治疗技术成功率100%(16/16)。TEVAR中1例发生Ⅰa型内漏,以弹簧圈栓塞后好转;1例TEVAR结束后出现心包压塞而死亡。15例接受随访,中位随访时间20个月,期间出现短暂性脑缺血发作及主体支架近端起始处局部小夹层各1例,均未经特殊处理而改善;1例出现Ⅰ型、2例出现Ⅲ型内漏,予近端开窗覆膜支架植入或以弹簧圈栓塞后好转;1例因冠心病死亡。结论针刺原位开窗TEVAR治疗AD累及主动脉弓有效且安全。

关键词：主动脉夹层胸主动脉腔内修复术原位开窗治疗效果

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