检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2019年第10期39卷 9-16页

作者：黄宇黄书婷张夕梅刘堰西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室

热休克蛋白70(HSP70)作为一种分子伴侣,在环境毒理学中受到广泛研究。前期研究表明稀有鮈鲫HSP70基因(GrHSP70)表达量与五氯酚(pentachlorophenol,PCP)处理的浓度和时间在肝脏中呈现剂量/时间-依赖效应。为探究启动子在热休克蛋白70表... 详细信息

热休克蛋白70(HSP70)作为一种分子伴侣,在环境毒理学中受到广泛研究。前期研究表明稀有鮈鲫HSP70基因(GrHSP70)表达量与五氯酚(pentachlorophenol,PCP)处理的浓度和时间在肝脏中呈现剂量/时间-依赖效应。为探究启动子在热休克蛋白70表达调控中的作用,根据已知的GrHSP70 cDNA序列,采用染色体步移技术克隆了GrHSP70的5'侧翼区的核苷酸序列。生物信息学分析从预测的转录起始位点(C)起的5'侧翼区域共1487bp,潜在的转录因子结合位点包括雌激素响应元件(ERE)、Sp1结合位点(Sp1)、糖皮质激素响应元件(GRE)、TATA结合蛋白(TBP)、CCAAT/增强子蛋白结合位点(C/EBP)、Oct-1结合位点(Oct-1)、GATA转录因子结合位点(GATA-1)等。实验构建了含有启动子缺失片段的萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)和海肾萤光素酶(renilla luciferase)报告基因表达载体,瞬时转染HeLa细胞后,利用双荧光活性检测确定获得的GrHSP70启动子具有启动活性,其核心启动位点位于转录起始点上游-1487^-1093bp。同时,用不同浓度PCP暴露成功转染了重组质粒(pGL-HSP70 promoter-Luc+)的HeLa细胞,培养24h后检测双荧光活性,与对照相比,随PCP浓度的增加,荧光活性均显著增加。说明在稀有鮈鲫肝脏中PCP会通过激活GrHSP70启动子来诱导GrHSP70表达,但PCP在稀有鮈鲫体内通过何种机制来调节HSP70的合成,仍然需要进一步研究。

关键词：稀有鮈鲫热休克蛋白70 启动子瞬时转染功能分析

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牛肾溶菌酶的分离纯化及部分酶学性质

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食品科学 2016年第5期37卷 126-131页

作者：傅婷万骥王丹唐云明西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室重庆400715

将新鲜牛肾匀浆后,经由缓冲液提取,正丁醇除脂,硫酸铵分级沉淀,CM-Sepharose阳离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析后得到电泳纯的牛肾溶菌酶。结果表明：该酶比活力为15 145.63 U/mg,回收率为29.13%,纯化倍数为231.05;分子质量约12.... 详细信息

将新鲜牛肾匀浆后,经由缓冲液提取,正丁醇除脂,硫酸铵分级沉淀,CM-Sepharose阳离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析后得到电泳纯的牛肾溶菌酶。结果表明：该酶比活力为15 145.63 U/mg,回收率为29.13%,纯化倍数为231.05;分子质量约12.66 k D,为单亚基酶。最适反应温度为65℃,在65℃以下较稳定;最适p H 9.0,p H值在3.0~9.0范围内稳定性较好;测得最适条件下牛肾溶菌酶对溶壁微球菌的Km值为0.399μg/m L;甲醇、乙醇、异丙醇和硫氰化钾（KSCN）对该酶有激活作用;十二烷基硫酸钠、Pb2＋、Ag＋对该酶有明显抑制作用。

关键词：牛肾溶菌酶分离纯化酶学性质

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韭菜β-木糖苷酶的分离纯化与部分性质研究

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食品科学 2016年第7期37卷 104-109页

作者：万骥王丹傅婷李蕊伽廖海君唐云明西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室重庆400715

新鲜韭菜经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、羧甲基离子交换层析(carboxymethyl-sephar ose,CMSepharose)再通过Su perdex-200凝胶过滤层析,从而获得电泳纯的β-木糖苷酶。该酶的比活力达到18.25 U/mg,纯化倍数为12.59,回收率为1.83%... 详细信息

新鲜韭菜经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、羧甲基离子交换层析(carboxymethyl-sephar ose,CMSepharose)再通过Su perdex-200凝胶过滤层析,从而获得电泳纯的β-木糖苷酶。该酶的比活力达到18.25 U/mg,纯化倍数为12.59,回收率为1.83%,分子质量为123.02 k D,亚基分子质量为61.51 k D。通过对β-木糖苷酶的酶学性质研究得到最适温度为65℃,最适p H值为4。该酶在25~55℃及p H 3.0~5.0的范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其米氏常数(K_m)值为0.28 mmol/L;甲醇、乙醇、异丙醇及十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)和Ag+对该酶具有抑制作用,Mn^(2+)和Co^(2+)对该酶具有一定的激活作用。

关键词：韭菜 β-木糖苷酶分离纯化酶学性质

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稀有鮈鲫HMGR基因全长克隆及雄鱼经五氯酚暴露基因表达的分析

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环境科学 2014年第8期35卷 3183-3191页

作者：邓川毛思予熊力张晓峥李伟高香刘秋萍陈韵刘堰西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室水产科学重庆市市级重点实验室重庆400715

3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)是甲羟戊酸(mevalonic acid,MVA)途径中的第一个关键限速酶.克隆稀有鮈鲫HMGR基因全长,分析该基因在不同组织及雄鱼经不同浓度五氯酚(pentachlorophenol,PCP)暴露的表达差异,探索PCP对类固醇激素前体(胆固醇)合成水平基因转录调控的内分泌干扰机制.采用同源克隆策略及cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE),从稀有鮈鲫肝脏中首次克隆得到3 101碱基(bp)的HMGR基因cDNA全长,基因命名为GrHMGR(GenBank accession No:KF885724).GrHMGR编码884个氨基酸,系统发育树分析表明,GrHMGR编码的蛋白与其他鱼类来源的HMGR氨基酸序列同源性较高.Real-time PCR分析表明GrHMGR的表达有组织特异性,在大脑,性腺和肝脏中均有表达,性腺中表达量最高.稀有鮈鲫雄鱼经不同浓度PCP暴露后,GrHMGR在大脑和性腺的表达随PCP浓度的增加显著下降,然而在肝脏组织中表达趋势有所不同.HMGR的表达下降会减少胆固醇的合成.说明PCP暴露会通过干扰稀有鮈鲫的胆固醇合成途径,进而对内分泌系统产生影响.

关键词：稀有鮈鲫基因克隆 HMGR 五氯酚表达分析

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鸭肝乳酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

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食品科学 2015年第15期36卷 151-156页

作者：方玲孙才云唐云明西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室重庆400715

新鲜鸭肝经匀浆、磷酸盐缓冲液抽提,乙醇和硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的乳酸脱氢酶。该酶经纯化后酶比活力达到668.82 U/mg,酶活回收率为25.79%,纯化倍数为185.78。该酶的全分子... 详细信息

新鲜鸭肝经匀浆、磷酸盐缓冲液抽提,乙醇和硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的乳酸脱氢酶。该酶经纯化后酶比活力达到668.82 U/mg,酶活回收率为25.79%,纯化倍数为185.78。该酶的全分子质量约为170.93 k D,亚基分子质量为44.72 k D;最适反应温度为45℃,最适pH值为7.4,在25~45℃及p H 5~10的范围内稳定性较好;在45℃、pH 7.4条件下,测得该酶对底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotid,NADH）的Km值为3.407μmol/L,对丙酮酸钠的Km值为8.431μmol/L;草酸、十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）、Cu2＋、Ag＋对该酶的抑制作用最强,Co2＋、K＋对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用,而高浓度时具有抑制酶活性的作用。

关键词：鸭肝乳酸脱氢酶分离纯化性质

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芫荽酸性磷酸酶的提取、纯化及酶学性质研究

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食品科学 2015年第21期36卷 162-167页

作者：王丹万骥傅婷唐云明西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室重庆400715

采用硫酸铵分级沉淀、CM-SepHarose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析法,从新鲜芫荽中分离纯化出电泳纯的酸性磷酸酶（acid pHospHatase,ACP）。该酶的酶活回收率为14.20%、纯化倍数为238.60、酶比活力为295.87 U/mg、亚基分子质... 详细信息

采用硫酸铵分级沉淀、CM-SepHarose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析法,从新鲜芫荽中分离纯化出电泳纯的酸性磷酸酶（acid pHospHatase,ACP）。该酶的酶活回收率为14.20%、纯化倍数为238.60、酶比活力为295.87 U/mg、亚基分子质量约为53.8 k D;芫荽ACP酶学性质研究结果表明：该酶的最适反应温度为55℃,在50℃以下时较稳定,因此该酶对温度较敏感;该酶的最适反应pH值为5.8,在pH 4.0~7.0之间较稳定,表明该酶耐受于酸性环境;芫荽ACP的对硝基苯酚磷酸二钠Km值为0.63 mmol/l,表明该酶与底物对硝基苯酚磷酸二钠具有较高的亲和力;甲醇、乙醇、异丙醇、抗坏血酸、草酸、Cu^2＋、Pb^2＋、Ag^＋对该酶具有强烈的抑制作用;Mg^2＋、Mn^2＋、Ba^2＋、K^＋对该酶具有一定的激活作用。

关键词：芫荽酸性磷酸酶分离纯化酶学性质

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城市化对河流大型底栖动物群落的影响研究进展

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生态学报 2017年第18期37卷 6275-6288页

作者：王强庞旭王志坚袁兴中张耀光淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室水产科学重庆市市级重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室西南大学生命科学学院重庆400715 重庆大学资源及环境科学学院重庆400044

城市化可以引发一系列"城市溪流综合症",对河流健康造成巨大胁迫。大型底栖动物是河流生态系统的重要组成部分,对环境因子敏感,能够较好的反映流域环境的变化。城市化后,流域人口增加,建设用地比例上升,入河污染物浓度和总量... 详细信息

城市化可以引发一系列"城市溪流综合症",对河流健康造成巨大胁迫。大型底栖动物是河流生态系统的重要组成部分,对环境因子敏感,能够较好的反映流域环境的变化。城市化后,流域人口增加,建设用地比例上升,入河污染物浓度和总量增多,底栖动物中敏感物种比例降低甚至消失,寡毛类、摇蚊等耐污物种成为优势类群;群落多样性显著降低,并且一般与城市化强度成负指数关系;底栖动物总密度普遍大幅度增加,收集者为主要摄食功能群;不透水地表面积比例的增加改变了流域自然的水文过程,群落组成的季节波动减弱,但密度的波动增大;次级生产力明显增加,食物网趋于简化。初步分析了城市化过程中水质污染、水文、生境破坏、流域土地利用等因素影响底栖动物群落的规律和机制,并且根据国内外研究现状提出了进一步研究的方向,以期为我国城市河流生态学研究、流域生态管控和河流生态系统修复提供科学依据。

关键词：城市化河流生境时空格局不透水地表土地利用大型底栖动物摄食功能群

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蕹菜叶酪氨酸酶的分离纯化与部分性质

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食品科学 2015年第15期36卷 167-172页

作者：孙才云方玲万骥傅婷王丹唐云明西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室重庆400715

蕹菜叶经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的酪氨酸酶。该酶活力达到114.53 U/mg,酶活力回收率为11.33%,纯化倍数为99.59。全酶分子质量为77.60 k D,亚基分子质量为... 详细信息

蕹菜叶经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的酪氨酸酶。该酶活力达到114.53 U/mg,酶活力回收率为11.33%,纯化倍数为99.59。全酶分子质量为77.60 k D,亚基分子质量为38.70 k D;最适温度为45℃,最适pH值为7.5,该酶在25~55℃及pH 6.0~8.0的范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其Km值为10.05 mmol/L;甲醇、乙醇、异丙醇及柠檬酸、抗坏血酸、Ca2＋和Pb2＋对该酶有抑制作用,Mn2＋、Zn2＋和Co2＋对该酶具有一定的激活作用,尿素和十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfonate,SDS）对该酶活性影响不大,Li＋、K＋对该酶活性基本没有影响。

关键词：蕹菜叶酪氨酸酶分离纯化性质

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三峡库区重要支流鱼类多样性初探

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长江流域资源与环境 2018年第12期27卷 2747-2756页

作者：解崇友牛亚兵罗德怀冯兴无蒲德永彭作刚曾波王志坚西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室水产科学重庆市重点实验室重庆400715 西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室重庆市三峡库区植物生态与资源重点实验室重庆400715 西南大学动物科技学院重庆400715

为了解三峡库区重要支流鱼类多样性情况,于2015年和2016年对三峡库区36条支流各进行了一次调查。长度小于50 km的河流设置4个调查断面,长度为50～100 km的河流设置6个调查断面、长度为100～300 km和超过1 000 km的河流均设置8个调查断... 详细信息

为了解三峡库区重要支流鱼类多样性情况,于2015年和2016年对三峡库区36条支流各进行了一次调查。长度小于50 km的河流设置4个调查断面,长度为50～100 km的河流设置6个调查断面、长度为100～300 km和超过1 000 km的河流均设置8个调查断面。共统计渔获物685. 5,测量鱼类标本35 507尾,鉴定鱼类121种,分属于9目22科78属,种类组成以鲤形目及鲤科为主,其中中国特有种68种,长江上游特有种26种,外来物种9种。小江渔获物种类、中国特有种和长江上游特有种都最多,其次为綦江。研究表明:该区域鱼类以产粘性卵和底栖为主,食性以肉食性和杂食性为主;按照河流的长度分为4组,长度超过1 000 km的河流与另外3个河流长度组的平均分类差异指数(Δ+)有显著性差异(P<0. 05),各河流长度组分类差异变异指数(Λ+)无显著性差异(P>0. 05),Δ+和Λ+与河流长度无显著性相关性(P>0. 05);库区支流主要经济鱼类是鲤(Cyprinus carpio)、鲫(Carassius auratus)和光泽拟鲿(Pseudobagrus nitidus)。建议严防引进种逃逸,加大对珍稀特有鱼类的基础生物学研究,特别是人工繁殖工作,将对支流鱼类多样性保护发挥重要作用。

关键词：长江三峡库区支流鱼类多样性资源保护外来种

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稀有鲫热激蛋白70的分子克隆及表达特征分析（英文）

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水生生物学报 2017年第1期41卷 18-25页

作者：黄书婷刘秋萍邓川和野熊力牛纯青陈韵刘堰西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室三峡库区生态环境教育部重点实验室水产科学重庆市市级重点实验室重庆400715

为研究稀有逗鲫(Gobiocypris rarus)HSP70用于淡水毒理学和风险评估方面的可行性,通过cDNA末端快速扩增的方法首次从稀有逗鲫肝脏中成功克隆出HSP70基因的cDNA全长,命名为GrHSP70。NCBI比对分析结果显示,GrHSP70核苷酸序列与其他鱼类的H... 详细信息

为研究稀有逗鲫(Gobiocypris rarus)HSP70用于淡水毒理学和风险评估方面的可行性,通过cDNA末端快速扩增的方法首次从稀有逗鲫肝脏中成功克隆出HSP70基因的cDNA全长,命名为GrHSP70。NCBI比对分析结果显示,GrHSP70核苷酸序列与其他鱼类的HSP70基因的核苷酸序列相似性极高,相应的氨基酸序列同源性也高(大于95%)。通过实时定量PCR获得未经污染物暴露的稀有逗鲫幼鱼体内13种组织中GrHSP70的分布以及PCP暴露后肝脏中该基因的表达图谱,结果表明GrHSP70在稀有逗鲫体内的表达呈现出组织依赖性,在性腺组织中的表达最高。此外,在不同时间﹑不同浓度的PCP暴露下稀有逗鲫肝脏中GrHSP70的表达模式呈现出显著的时间-剂量依赖效应。总之,GrHSP70可作为一种非常敏感的生物标志物,适用于中国淡水环境污染的毒理学研究及风险评估。

关键词：稀有逗鲫热激蛋白70 cDNA末端快速扩增五氯酚生物标志物 HSP70

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