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华南农业大学学报 2025年第1期46卷 89-96页

作者：黄成玉陈健鑫郑星月吴峰婧琳马焕成伍建榕西南林业大学生物多样性保护学院/云南省高校森林灾害预警控制重点实验室云南昆明650224 西南林业大学林学院/国家林业和草原局西南地区生物多样性保育重点实验室云南昆明650224

【目的】明确引起云南玉龙县地锦叶斑病的病原种类,并建立快速检测方法。【方法】采用组织分离法分离病原菌,并依据科赫氏法则确定地锦叶斑病病原,通过形态学特征及多基因联合构建系统发育树,明确病原菌的分类地位;以病原菌的Alt a1基... 详细信息

【目的】明确引起云南玉龙县地锦叶斑病的病原种类,并建立快速检测方法。【方法】采用组织分离法分离病原菌,并依据科赫氏法则确定地锦叶斑病病原,通过形态学特征及多基因联合构建系统发育树,明确病原菌的分类地位;以病原菌的Alt a1基因序列为靶标设计特异性引物建立环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。【结果】地锦叶斑病病原菌鉴定为链格孢菌Alternaria alternata。建立的LAMP反应体系可特异有效地检测出地锦叶斑病菌,该体系最佳反应温度为65℃、最佳反应时间为50 min、最低检测灵敏度为1 pg/μL。使用该体系对人工接种病原菌不同时间的地锦叶片进行链格孢LAMP检测,检出时间为接种12 h及以上。【结论】本研究可为地锦叶斑病的早期检测和科学防控提供理论依据。

关键词：地锦叶斑病链格孢菌病原鉴定 LAMP体系

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云南大理栽培春兰中ORSV和CymMV的分子检测及序列分析

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园艺学报 2022年第3期49卷 655-662页

作者：陈健鑫魏玉倩唐婕竺永金马焕成伍建榕西南林业大学生物多样性保护学院云南省高校森林灾害预警控制重点实验室昆明650224 西南林业大学林学院西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室昆明650224

2018—2019年,在云南大理部分地区开展了春兰(Cymbidium goeringii)病毒病害的调查和典型植株收集,通过逆转录—聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测春兰中的病毒。70株春兰中均检测到齿兰环... 详细信息

2018—2019年,在云南大理部分地区开展了春兰(Cymbidium goeringii)病毒病害的调查和典型植株收集,通过逆转录—聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测春兰中的病毒。70株春兰中均检测到齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV),未检出建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,Cym MV),说明该地区潜在的病毒病害主要为ORSV。基于外壳蛋白(CoatProtein)的系统发育树分析表明,所有ORSV分离物位于一个分支。ORSV外壳蛋白属于烟草花叶病毒外壳蛋白家族,理论等电点为5.01,属于亲水性稳定蛋白质。本研究证实了ORSV已经开始感染大理地区栽培的春兰,建议尽快开展兰花病毒病的早期诊断、药剂筛选及防治工作。

关键词：春兰建兰花叶病毒齿兰环斑病毒分子检测外壳蛋白基因生物信息

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尖孢镰刀菌对秀丽隐杆线虫生物学特性及表达转录组的影响

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华南农业大学学报 2024年第3期45卷 381-389页

作者：易杏盈肖月张东华刘丽闫晓慧伍建榕西南林业大学生物多样性保护学院/云南省高校森林灾害预警控制重点实验室云南昆明650224 西南林业大学林学院/西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室云南昆明650224

【目的】探讨尖孢镰刀菌Fusarium oxvsporum对秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans生物学特征的影响,明确线虫响应尖孢镰刀菌侵染的关键通路。【方法】将尖孢镰刀菌活性孢子和灭活孢子分别与秀丽隐杆线虫共培养,测定***寿命、体长、运... 详细信息

【目的】探讨尖孢镰刀菌Fusarium oxvsporum对秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans生物学特征的影响,明确线虫响应尖孢镰刀菌侵染的关键通路。【方法】将尖孢镰刀菌活性孢子和灭活孢子分别与秀丽隐杆线虫共培养,测定***寿命、体长、运动能力、繁殖力以及咽泵运动速率等基本生物学特征;进行全基因组测序,通过GO和KEGG分析明确线虫响应尖孢镰刀菌侵染的关键通路和生物学功能。【结果】尖孢镰刀菌活性分生孢子与线虫共培养可导致线虫寿命下降,虫体显著缩短,线虫繁殖力显著降低;但共培养并未对线虫的咽泵运动速率及运动能力产生明显影响。GO分析发现,差异表达基因富集在先天免疫反应和氧化还原酶活性等生物学功能方面;KEGG分析发现,差异表达基因富集在药物代谢−细胞色素P450、代谢外源性物质的细胞色素P450和脂肪酸代谢等通路。【结论】尖孢镰刀菌对秀丽隐杆线虫的基本生命活动有不利影响,这为深入探讨线虫响应尖孢镰刀菌的天然免疫机制及与植物免疫的相似性,从而寻找植物相关抗病基因奠定了基础。

关键词：尖孢镰刀菌秀丽隐杆线虫生物学特征天然免疫转录组致病机制

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云南野生春兰根系内生微生物多样性的分析

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微生物学报 2023年第1期63卷 156-169页

作者：陈健鑫唐婕魏玉倩马焕成伍建榕西南林业大学生物多样性保护学院、云南省高校森林灾害预警控制重点实验室云南昆明650224 西南林业大学林学院、西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室云南昆明650224

春兰(Cymbidium goeringii)是一种具有较高经济和观赏价值的地生兰。由于栖息地的严重破坏,大多数地生兰处于濒危状态,根系与微生物的共生关系伴随着兰科植物从种子萌发到开花结果,因此根系内生微生物在地生兰生活史中具有重要作用。【... 详细信息

春兰(Cymbidium goeringii)是一种具有较高经济和观赏价值的地生兰。由于栖息地的严重破坏,大多数地生兰处于濒危状态,根系与微生物的共生关系伴随着兰科植物从种子萌发到开花结果,因此根系内生微生物在地生兰生活史中具有重要作用。【目的】分析野生春兰根系内生菌群落组成与潜在功能,为春兰的人工保育提供理论依据。【方法】采集云南省昆明市、保山市和大理州的野生春兰的根系,利用宏基因组测序,并进行物种注释及功能注释。【结果】保山的春兰根内微生物丰度及多样性大于大理及昆明的春兰样品,春兰根系内生真菌的优势门为担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)和球囊霉门(Glomeromycota),优势科为球囊霉科(Glomeraceae)、多孔菌科(Polyporaceae)和角担菌科(Ceratobasidiaceae),其中角担菌科是春兰主要的兰科菌根真菌(orchid mycorrhizal fungi,OMF);内生细菌的优势门为厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes),优势科为韦荣球菌科(Erysipelotrichaceae)、Cyclobacteriaceae和醋酸杆菌科(Acetobacteraceae);内生古菌的优势门为广古菌门(Euryarchaeota)和奇古菌门(Thaumarchaeota),优势科为钠白菌科(Natrialbaceae);病毒以花椰菜花叶病毒科(Caulimoviridae)为主。春兰根系内生菌的功能在KEGG数据库主要被注释到新陈代谢(metabolism)和遗传信息加工(genetic information processing)两大通路,PHI数据库注释提示,镰孢属(Fusarium/Gibberella)、巨座壳属(Magnaporthe)和曲霉属(Aspergillus)可能成为野生春兰潜在病原菌。【结论】本研究明确了云南省三地区野生春兰根系内生菌的主要类群,首次发现了春兰根系中有球囊霉科真菌定殖,并对内生菌群进行功能注释分析,为野生春兰保育、人工幼苗菌根化及病害防治提供理论依据。

关键词：春兰根系内生微生物宏基因组 KEGG数据库 PHI数据库

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云南油茶炭疽病菌的鉴定及生防菌筛选

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华南农业大学学报 2022年第5期43卷 43-53页

作者：陈健鑫魏玉倩刘丽张东华马焕成伍建榕云南省高校森林灾害预警控制重点实验室/西南林业大学生物多样性保护学院云南昆明650224 西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室/西南林业大学林学院云南昆明650224

【目的】明确云南省德宏州、文山州和保山市油茶炭疽病菌的种类,筛选具有良好拮抗效果的生防菌。【方法】本研究于2019和2020年7—9月进行了病害调查,收集病叶标本,采用组织分离法分离病原菌,通过柯赫氏法则验证其致病性,联合形态学与... 详细信息

【目的】明确云南省德宏州、文山州和保山市油茶炭疽病菌的种类,筛选具有良好拮抗效果的生防菌。【方法】本研究于2019和2020年7—9月进行了病害调查,收集病叶标本,采用组织分离法分离病原菌,通过柯赫氏法则验证其致病性,联合形态学与多位点序列分析鉴定病原菌种类。同时从健康油茶叶片内分离筛选内生拮抗菌,并通过平板对峙法验证抑菌作用。【结果】云南省德宏州地区油茶炭疽病发生较严重,平均发病率为56.18%,病情指数为53.11,云南省油茶炭疽病菌种类主要有5种,分别是胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides、卡哈瓦炭疽菌***、喀斯特炭疽菌***、松针刺盘孢***和暹罗刺盘孢***。其中,胶孢炭疽菌是优势病原菌,菌株CA17(暹罗刺盘孢)在活体油茶叶片上的致病性最强。平板对峙培养结果表明,采自德宏州健康油茶叶片的内生菌Streptomyces fulvissimus和Bacillus mojavensis对菌株CA17具有较好的拮抗作用,抑菌率分别达到37%和42%。【结论】本研究可为油茶炭疽病的诊断与绿色防控提供理论依据。

关键词：油茶炭疽病内生拮抗菌多位点序列分析生物防治

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不同种苏铁珊瑚状根内生微生物多样性及适应性研究

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微生物学报 2022年第7期62卷 2835-2849页

作者：魏玉倩陈健鑫郑艳玲竺永金周嫒婷马焕成伍建榕西南林业大学林学院西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室云南昆明650224 西南林业大学生物多样性保护学院云南省高校森林灾害预警控制重点实验室云南昆明650224

【目的】苏铁(Cycassp.)是珍稀濒危树种,能在干热河谷中长期稳定生存的原因可能与珊瑚状根内生微生物有密切关系。不同种苏铁在同一生境下其珊瑚状根内生微生物种类和群落组成存在怎样的差异性是本研究的科学问题。【方法】采用宏基因... 详细信息

【目的】苏铁(Cycassp.)是珍稀濒危树种,能在干热河谷中长期稳定生存的原因可能与珊瑚状根内生微生物有密切关系。不同种苏铁在同一生境下其珊瑚状根内生微生物种类和群落组成存在怎样的差异性是本研究的科学问题。【方法】采用宏基因测序技术对四川省攀枝花公园内5种同属不同种苏铁珊瑚状根进行了分子鉴定,分析了苏铁间微生物类型、功能基因和代谢通路过程的差异性。【结果】公园内不同苏铁的珊瑚状根内生微生物的优势类群在门水平上基本相同,但相对丰度有差异性。在真菌界水平上的优势类群为担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)、球囊菌门(Glomeromycota)和隐真菌门(Cryptomycota),在细菌界水平上的优势类群为蓝细菌门(Cyanobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、螺旋体门(Spirochaetes)和放线菌门(Actinobacteria)。不同种的苏铁在真菌界和细菌界的微生物群落相对丰度存在一定差异。蓝细菌门在篦齿苏铁、攀枝花苏铁、华南苏铁和贵州苏铁中的相对丰度远高于宽叶苏铁,而放线菌门和球囊菌门在宽叶苏铁的相对丰度远高于篦齿苏铁、攀枝花苏铁、华南苏铁和贵州苏铁。通过KEGG数据库比对分析发现不同种苏铁间微生物的差异表达基因功能主要与环境适应和能量代谢通路相关。结果表明碳水化合物代谢(carbohydrate metabolism)、氨基酸代谢(aminoacid metabolism)、基因结构的折叠、排列和降解(folding、sorting、degradation)及信号转导(signal transduction)的功能基因较为丰富。【结论】种植于同一地点的不同苏铁的珊瑚状根内生微生物的优势类群在门水平上基本相同,但相对丰度有差异性。珊瑚状根内的蓝细菌和放线菌参与的氮素和碳水化合物合成和代谢过程可能是苏铁适应干热河谷贫瘠环境的重要因素之一。

关键词：苏铁珊瑚状根内微生物宏基因组群落多样性聚类分析

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植物提取物对油茶炭疽菌的抑菌活性筛选

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中国生物防治学报 2022年第4期38卷 852-859页

作者：罗建梅张兴怡伍建榕刘丽洪英娣张东华闫晓慧云南省高校森林灾害预警控制重点实验室/西南林业大学生物多样性保护学院昆明650224 西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室/西南林业大学林学院昆明650224

为开发新型植物源农药,探究油茶炭疽病的生物防治方法,以油茶炭疽病菌(Colletotrichum fructicola)为供试病原菌,采用生长速率法测定了49种植物的70种提取物对油茶炭疽病菌的抑制作用,筛选出活性较好的提取物,并通过浓度梯度试验测定其... 详细信息

为开发新型植物源农药,探究油茶炭疽病的生物防治方法,以油茶炭疽病菌(Colletotrichum fructicola)为供试病原菌,采用生长速率法测定了49种植物的70种提取物对油茶炭疽病菌的抑制作用,筛选出活性较好的提取物,并通过浓度梯度试验测定其抑菌毒力。结果表明,在提取物浓度为1 mg/mL时,臭灵丹石油醚萃取物和益母草乙酸乙酯萃取物对油茶炭疽菌抑菌效果最好,抑制率分别为54.48%和50.75%,经毒力测定其有效中浓度(EC)分别为0.7013和0.6246 mg/mL。本研究为进一步利用臭灵丹、益母草开发植物源抑菌剂提供了一定的理论依据。

关键词：植物提取物生长速率法毒力油茶炭疽菌抑菌活性

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油茶炭疽菌侵染对油茶叶片内生细菌群落结构的影响

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中国生物防治学报 2022年第4期38卷 911-919页

作者：崔明秦张东华闫晓慧洪英娣马焕成伍建榕刘丽云南省高校森林灾害预警控制重点实验室/西南林业大学生物多样性保护学院昆明650224 西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室/西南林业大学林学院昆明650224

植物内生菌与植物长期共存,二者协同进化,互惠互利。在胁迫因素的影响下,内生菌群落组成会发生相应的变化并对植物起到重要的保护作用。然而,关于病原菌胁迫对油茶树叶片内生细菌群落结构的影响尚缺乏系统的研究。为了解云南油茶受炭疽... 详细信息

植物内生菌与植物长期共存,二者协同进化,互惠互利。在胁迫因素的影响下,内生菌群落组成会发生相应的变化并对植物起到重要的保护作用。然而,关于病原菌胁迫对油茶树叶片内生细菌群落结构的影响尚缺乏系统的研究。为了解云南油茶受炭疽病菌侵染后,叶片内生微生物群落如何参与植物防御,本文基于高通量测序技术,对炭疽菌生物胁迫下云南油茶病、健叶片内生菌群的群落组成和多样性进行分析;基于Bugbase软件对菌群的表型进行预测。结果表明,炭疽菌侵染后显著提高了Chao1、ACE丰富度指数,而多样性指数Simpson、Shannon则无显著变化。门水平上,病、健叶片上相对丰度大于1%的种类相同,但所有门的丰度都表现为病叶高于健叶。属水平上,病叶片中Methylobacterium(1.91%)属相对丰度最高,健康叶片中Pontibacter(1.41%)相对丰度最高。感病叶片中有5个特有属,健康叶片中有3个特有属。Bugbase菌群功能预测表明,云南油茶感病叶片内生菌菌群生物膜形成能力和氧化胁迫耐受增强;革兰氏阳性菌的相对丰度增加,革兰氏阴性菌相对丰度降低。可见,油茶炭疽病的发生改变了油茶树叶片内生细菌的群落结构,使少数抗病相关物种优势生长。研究结果为油茶炭疽病的生物防治提供了信息。

关键词：炭疽病菌高通量测序内生细菌群落结构云南油茶叶片

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滇朴丛芽病植原体的分子鉴定

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植物保护 2021年第2期47卷 70-77页

作者：陈健鑫张宏雁魏玉倩洪英娣马焕成伍建榕云南省高校森林灾害预警控制重点实验室西南林业大学生物多样性保护学院昆明650224 西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室西南林业大学林学院昆明650224

滇朴Celtis kunmingensis Cheng et Hong是云南的乡土树种,适宜全国大部分地区种植,极具观赏价值,是近年来最热门的绿化首选树种―绿化行道树,云南部分地区滇朴近年常表现丛芽的症状。本研究采用形态学与分子生物学结合的方法,对染病的... 详细信息

滇朴Celtis kunmingensis Cheng et Hong是云南的乡土树种,适宜全国大部分地区种植,极具观赏价值,是近年来最热门的绿化首选树种―绿化行道树,云南部分地区滇朴近年常表现丛芽的症状。本研究采用形态学与分子生物学结合的方法,对染病的幼嫩枝条进行扫描电镜(SEM)观察;利用16S rDNA植原体通用引物P1/P7和R16F2/R16R2进行常规PCR和巢式PCR,分别获得1.8 kb和1.2 kb的特异性基因片段,将该特异性片段与其他已知分类地位的植原体16S rDNA片段进行同源性比对分析,同时利用邻接法(NJ)构建系统发育树。结果表明在染病的滇朴韧皮部组织中可见植原体存在,滇朴丛芽病植原体与芝麻叶状植原体同源性高达99.40%,通过系统发育树可进一步推测滇朴丛芽病植原体是属于16SrⅠ-B亚组成员,本研究结果为该病害的诊断与防治提供了理论依据。

关键词：滇朴丛芽病植原体扫描电镜(SEM) PCR 系统发育树

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4种地生兰菌根的显微结构研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2014年第10期42卷 133-140页

作者：高瑾王芳伍建榕西南林业大学林学院云南省高校森林灾害预警控制重点实验室云南昆明650224 国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室云南昆明650224

【目的】研究春兰(Cymbidium goeringii)、墨兰(***)和兜兰属(Paphiopedilum)的杏黄兜兰(***)、飘带兜兰(***)4种地生兰菌根的显微结构,了解菌根真菌与地生兰生长之间的关系,为地生兰的多样性保护提供参考。【方法】利用光学显微镜及石... 详细信息

【目的】研究春兰(Cymbidium goeringii)、墨兰(***)和兜兰属(Paphiopedilum)的杏黄兜兰(***)、飘带兜兰(***)4种地生兰菌根的显微结构,了解菌根真菌与地生兰生长之间的关系,为地生兰的多样性保护提供参考。【方法】利用光学显微镜及石蜡连续切片的方法,用分离自野生地生兰的菌根真菌菌株CLB113和CLB111,接种4种地生兰种子萌发无菌组培苗,使地生兰形成菌根,观察菌根的结构、菌丝侵入途径及菌丝结在皮层中的消长状况,并与野生状态下地生兰的菌根进行比较,从形态学角度分析菌根真菌与地生兰的共生关系。【结果】菌根从外到内分为根被、皮层和髓3部分,其中菌根真菌通过根被进入皮层,并在皮层组织中形成分布不匀、形状大小不一、较深颜色的菌丝结,并在不同时期有着不同的形态学变化。地生兰根部有3种不同形态的菌丝,分别为丝状菌丝、菌丝结和菌丝结残片。菌丝结被消解吸收之后,周围的菌丝会继续形成新的菌丝结。伴随新菌丝的生长和侵入,菌根真菌可不断地为地生兰提供营养物质,促进其快速生长发育。【结论】与非菌根相比,地生兰菌根的基本结构没有明显变化,但菌根中有入侵的菌根真菌,皮层组织中有菌丝结存在。

关键词：地生兰菌根显微结构菌丝结

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