检索结果-内蒙古大学图书馆

吉林大学学报（医学版） 2013年第4期39卷 837-840页

作者：张鹏王艳丽郭世文刘恩岐西安交通大学医学院第一附属医院神经外科陕西西安710061 西安医学院临床医学院陕西西安710021 西安交通大学医学院实验动物中心陕西西安710061

目的:克隆家兔胆固醇酯转移蛋白(CETP)基因,构建其真核表达载体,研究CETP基因的结构与功能,为进一步研究CETP在动脉粥样硬化(As)中的作用机制提供参考。方法:采用TRIzol提取家兔肝组织总RNA,采用RT-PCR方法将RNA逆转录为cDNA,以cDNA为模... 详细信息

目的:克隆家兔胆固醇酯转移蛋白(CETP)基因,构建其真核表达载体,研究CETP基因的结构与功能,为进一步研究CETP在动脉粥样硬化(As)中的作用机制提供参考。方法:采用TRIzol提取家兔肝组织总RNA,采用RT-PCR方法将RNA逆转录为cDNA,以cDNA为模板,用LA Taq酶进行PCR扩增,克隆出CETP基因,将CETP cDNA片段克隆至pMD19-T载体上,对重组的CETP-pMD19-T测序后,登录GenBank进行序列比对,利用nnPredict软件分析预测CETP的二级结构。将CETP cDNA片段克隆至pcDNA3.1真核表达载体上,对重组质粒进行PCR及酶切鉴定。结果:测序及序列比对显示与M27486基因序列98%相符;家兔CETP基因cDNA全长1 659bp,编码序列(CDs区)长1 494bp,编码498个氨基酸。CETP的二级结构以α螺旋结构为主,相对分子质量为142119.4,pI为4.91。结论:成功克隆了家兔CETP基因,并成功构建了其真核表达载体,明确了CETP的二级结构。

关键词：胆固醇酯转移蛋白克隆序列分析真核表达载体

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细胞角蛋白8真核表达载体的构建、表达及生物信息学分析

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第2期27卷 123-127页

作者：寻萌赵四海曹春霞薛欣邵明明李薇徐琨楚雍烈西安交通大学医学院免疫与病原生物学系陕西西安710061 西安交通大学医学院实验动物中心陕西西安710061 Department of Medicine University of Florida 西安医学院医学技术系陕西西安710021

目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pE... 详细信息

目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-CK8。脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、realtimePCR和Westernblot检测CK8的表达。生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等。结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达。结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础。

关键词：细胞角蛋白8 全长编码序列真核表达生物信息学分析

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人KIBRA基因真核表达载体的构建及生物信息学分析

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西安交通大学学报（医学版） 2021年第2期42卷 323-327,332页

作者：王博宋少苒田碧霞杨泽健张妙高小倩孙伟蒋依娜刘培军西安交通大学第一附属医院转化医学中心陕西西安710061 陕西省肿瘤精准医学重点实验室陕西西安710061 西安交通大学医学部陕西西安710061 西安交通大学第一附属医院病理科陕西西安710061

目的构建人的肾脏脑蛋白(human kidney and brain protein, KIBRA)编码区全长的真核表达载体,为在乳腺癌细胞水平研究KIBRA生物学功能提供模型。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录后再通过PCR扩增KIBRA(NM001161661.2)编码区全长... 详细信息

目的构建人的肾脏脑蛋白(human kidney and brain protein, KIBRA)编码区全长的真核表达载体,为在乳腺癌细胞水平研究KIBRA生物学功能提供模型。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录后再通过PCR扩增KIBRA(NM001161661.2)编码区全长,并克隆至真核表达载体pCMV-Blank上,鉴定正确后命名为pCMV-KIBRA。将其转染MCF7细胞,48 h后实时定量PCR和Western blotting检测KIBRA的表达。结合生物信息学软件分析KIBRA的一级、二级、三级结构和转录后修饰位点。结果菌液PCR、双酶切和测序结果均表明载体pCMV-KIBRA中插入的KIBRA序列正确。载体转染MCF7细胞可使KIBRA的mRNA和蛋白水平显著增高。生物信息学分析KIBRA由1 119个氨基酸组成,存在52个磷酸化位点、1个乙酰化位点和5个泛素化位点,且二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲。结论成功构建人KIBRA编码区全长的真核表达载体,并在乳腺癌细胞系MCF7中过表达,为在乳腺癌中研究KIBRA的生物学功能奠定了基础。

关键词： KIBRA 真核表达基因克隆

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大黄素和黄芪多糖对实验性肝损伤大鼠肝脏超微结构的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2009年第4期30卷 502-505页

作者：张欣党双锁程延安贾晓黎陈明霞刘恩岐西安交通大学医学院第二附属医院感染科陕西西安710004 西安交通大学医学院电子显微镜室陕西西安710061 西安交通大学医学院实验动物中心陕西西安710061

目的探讨大黄素和黄芪多糖单用及联合应用对肝损伤大鼠肝脏超微结构的影响及意义。方法采用四氯化碳(CCl4)等复合因素诱导大鼠肝损伤模型。选取清洁雄性SD大鼠90只,随机分为6组:正常对照组(10只)、模型组(20只)、大黄素组(15只)、黄芪... 详细信息

目的探讨大黄素和黄芪多糖单用及联合应用对肝损伤大鼠肝脏超微结构的影响及意义。方法采用四氯化碳(CCl4)等复合因素诱导大鼠肝损伤模型。选取清洁雄性SD大鼠90只,随机分为6组:正常对照组(10只)、模型组(20只)、大黄素组(15只)、黄芪多糖组(15只)、大黄素和黄芪多糖联合给药组(15只)、秋水仙碱组(15只)。除正常对照组和单纯造模组外其他各组同时给对应的药物干预,即大黄素40mg/(kg·d)、黄芪多糖200mg/(kg·d)、大黄素40mg/(kg·d)+黄芪多糖200mg/(kg·d)、秋水仙碱0.1mg/(kg·d),共12周。采集标本后测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,电镜观察各组大鼠肝脏的超微结构。结果大黄素、黄芪多糖单用或联合应用均可以减轻CCl4对大鼠肝脏组织的损伤程度,尤其是联合用药可以明显减少肝组织Hyp含量;保护肝脏的超微结构改变,表现为肝细胞结构接近正常,包膜规整,细胞质内见少量脂滴,线粒体嵴排列规整,内质网增生且明显扩张,肝窦隙可见呈梭形或杆状的肝星状细胞(HSC),肝窦内充斥少量纤细胶原纤维束,Kupffer细胞脂滴不多。结论大黄素和黄芪多糖对CCl4致大鼠肝脏的超微结构损伤具有一定的预防保护作用。

关键词：大黄素黄芪多糖肝损伤超微结构大鼠

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重组人细胞角蛋白9 cDNA的原核表达及纯化

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第4期38卷 502-506页

作者：王博周艳侯卫坤蔡永松张英王林玉韩燕孟列素西安交通大学第一附属医院转化医学中心西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系陕西省肿瘤精准医学重点实验室西安交通大学第一附属医院皮肤科陕西西安710061 西安交通大学医学部附属红会医院骨坏死与关节重建病区陕西西安710054 西安交通大学第一附属医院骨科西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061

目的克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his... 详细信息

目的克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达。表达的融合蛋白通过Ni 2+亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融合蛋白his-CK9可在大肠杆菌中诱导表达;纯化的融合蛋白his-CK9纯度较高;纯化的融合蛋白his-CK9可与商品化CK9抗体特异性结合。结论成功构建原核表达载体pET-28a-CK9,并成功诱导及纯化融合蛋白his-CK9。

关键词：原核表达系统细胞角蛋白9 融合蛋白细胞骨架

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肿瘤 miRNAs 调控机制的研究进展与展望

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西安交通大学学报（医学版） 2015年第4期36卷 429-434页

作者：黄辰刘利英倪磊宋土生西安交通大学医学部基础医学院细胞生物学与遗传学系陕西西安710061 西安交通大学医学部生物医学研究实验中心环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

微小RNA(micro RNAs,miRNAs)是一类不同于mRNA的非蛋白编码的小RNA,其通过结合靶mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR),抑制靶mRNA的翻译或降解靶mRNA。miRNA在肿瘤发生、生长、迁移与侵袭过程中发挥了重要作用。miRNA的... 详细信息

微小RNA(micro RNAs,miRNAs)是一类不同于mRNA的非蛋白编码的小RNA,其通过结合靶mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR),抑制靶mRNA的翻译或降解靶mRNA。miRNA在肿瘤发生、生长、迁移与侵袭过程中发挥了重要作用。miRNA的调控与其在肿瘤中的功能密切相关。竞争性内源性RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)及RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBP)参与了miRNA靶基因的表达调控,可能是miRNA在不同肿瘤组织及细胞中功能多样化与复杂化的原因之一。研究miRNA在特定细胞中网络调控机制的新技术是未来的新方向。

关键词： sncRNA miRNA 表达调控肿瘤

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阿司匹林联合中药复聪汤对老年性聋小鼠耳蜗外毛细胞存活及prestin蛋白表达的影响

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听力学及言语疾病杂志 2020年第6期28卷 656-662页

作者：武坤毅李胜利姬媛媛樊小军刘全征西安交通大学第二医院科研中心实验室西安710004 西安交通大学医学部基础医学院电镜中心山东菏泽佳康生物科技有限公司

目的探讨中西药联合应用上调耳蜗外毛细胞(outer hair cells, OHCs)prestin蛋白表达及促进耳蜗毛细胞存活的影响,为老年性聋的预防和治疗提供参考。方法选用4周龄DBA/2J小鼠120只,雌雄各半,分为六组:200 mg/kg阿司匹林加中药复聪汤治疗... 详细信息

目的探讨中西药联合应用上调耳蜗外毛细胞(outer hair cells, OHCs)prestin蛋白表达及促进耳蜗毛细胞存活的影响,为老年性聋的预防和治疗提供参考。方法选用4周龄DBA/2J小鼠120只,雌雄各半,分为六组:200 mg/kg阿司匹林加中药复聪汤治疗组、200 mg/kg阿司匹林治疗组、100 mg/kg阿司匹林加中药复聪汤治疗组、100 mg/kg阿司匹林治疗组、中药复聪汤治疗组和饮水对照组,每组20只。在试验前、治疗30、60和90天后检测各组动物ABR反应阈;在治疗90天后,处死动物,取出耳蜗,分别进行耳蜗全基底膜免疫组化prestin表达标记、硝酸银染色全耳蜗铺片毛细胞计数观察、扫描电镜观察和Western blot耳蜗蛋白印迹检测。结果实验前6组小鼠ABR反应阈(均为40~50 dB SPL)差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,疗效最好的是200 mg/kg阿司匹林加中药复聪汤治疗组(治疗后30、60、90天ABR反应阈值分别为46.38±6.66、44.44±5.33、48.91±4.12 dB SPL),其次是单独中药复聪汤治疗组(治疗后30、60、90天ABR反应阈值分别为50.02±0.00、50.88±8.28、53.13±3.28 dB SPL),这两组治疗90天后与治疗前比较ABR反应阈差异无统计学意义(P>0.05),其余各组治疗90天后ABR反应阈较治疗前明显升高(P<0.05)。prestin蛋白表达强度在200 mg/kg阿司匹林加中药复聪汤治疗组最强,200 mg/kg阿司匹林治疗组渐弱,100 mg/kg阿司匹林加中药复聪汤治疗组最弱, 100 mg/kg阿司匹林治疗组、单独中药复聪汤治疗组和饮水对照组几乎没有表达。耳蜗铺片毛细胞计数和扫描电镜观察毛细胞的病变程度显示单独中药治疗组效果最好,其次是200 mg/kg阿司匹林加中药治疗组,这与ABR反应阈值和OHCs prestin表达强度不一致。结论 200 mg/kg阿司匹林联合中药复聪汤对老年性聋小鼠耳蜗OHCs prestin蛋白表达上调明显,对听功能和毛细胞有一定的保护作用。

关键词：老年性聋毛细胞 Prestin 复聪汤

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胆固醇酯转移蛋白转基因家兔制作及生物学特性分析

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中国实验动物学报 2015年第4期23卷 331-335页

作者：高守翠成大欣赵四海陈玉龙王晓靖白亮范江霖刘恩岐西安交通大学心血管研究中心脂代谢与动脉粥样硬化研究室西安710061 西安交通大学医学院实验动物中心西安710061 山梨大学医学部分子病理学系

目的制作肝脏特异性高表达人胆固醇酯转移蛋白(CETP)转基因家兔并对其生物学特性分析进行分析。方法利用显微注射方法制作CETP转基因家兔,利用Western blot、real-time PCR和CETP活性鉴定试剂盒鉴定模型家兔中人CETP转基因的表达和活性... 详细信息

目的制作肝脏特异性高表达人胆固醇酯转移蛋白(CETP)转基因家兔并对其生物学特性分析进行分析。方法利用显微注射方法制作CETP转基因家兔,利用Western blot、real-time PCR和CETP活性鉴定试剂盒鉴定模型家兔中人CETP转基因的表达和活性。结果 PCR检验结果显示成功获得CETP转基因家兔,转基因主要在肝脏特异性表达,其血浆CETP活性相对于非转基因家兔明显升高。结论成功建立了高表达人CETP的转基因家兔,为研究CETP功能和其参与心血管疾病的机制提供了良好模型。

关键词：胆固醇酯转移蛋白转基因家兔血浆肝

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右美托咪定对离体大鼠肠系膜动脉炎性相关蛋白表达的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第5期38卷 679-683页

作者：马正敏武淑芳景桂霞王强孙宏志西安交通大学医学部环境与基因相关疾病教育部重点实验室陕西西安710061 西安交通大学第一附属医院转化医学中心陕西西安710061 西安交通大学第一附属医院麻醉手术部陕西西安710061

目的研究右美托咪定(DEX)对大鼠肠系膜动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)及凋亡相关因子Caspase-3表达旳作用。方法取SPF级SD雄性大鼠,脱臼处死后,在体视显微镜下分离取出肠系膜动脉。建立脂多糖(LPS)诱导的血管损伤实... 详细信息

目的研究右美托咪定(DEX)对大鼠肠系膜动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)及凋亡相关因子Caspase-3表达旳作用。方法取SPF级SD雄性大鼠,脱臼处死后,在体视显微镜下分离取出肠系膜动脉。建立脂多糖(LPS)诱导的血管损伤实验模型,并根据随机化原则将损伤血管分为DEX组和对照组。DEX组根据所给予DEX的浓度不同分为10^(-8)、10^(-7)、10^(-6) mol/L 3个亚组。分离提取各组动脉组织中RNA及总蛋白后,RT-PCR方法检测TNF-α、IL-1β及CaSR等因子的mRNA水平;Western blot检测TNF-α、CaSR、AMPK及Caspase-3等蛋白的表达变化。结果 10^(-8)、10^(-7)、10^(-6) mol/L DEX组中LPS诱导的血管炎性反应均明显降低,TNF-α的mRNA和蛋白表达及IL-1β的mRNA表达减弱。DEX组血管条的Caspase-3蛋白表达较LPS组显著降低。DEX对LPS诱导的血管AMPK蛋白表达和CaSR的mRNA表达没有明显作用。结论 DEX明显降低与炎症相关蛋白的表达,提示DEX有一定的抗炎症作用。

关键词：右美托咪定大鼠肠系膜动脉血管蛋白炎性反应凋亡 Caspase-3

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HIV患者合并感染基因1和4型丙型肝炎病毒治疗效果的Meta分析

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浙江大学学报（医学版） 2009年第3期38卷 315-319页

作者：赵四海刘恩岐成大欣薛欣楚雍烈西安交通大学医学院病原生物学与免疫学系陕西西安710061 西安交通大学医学院医学实验动物中心陕西西安710061 西安交通大学医学院第三附属医院新生儿科陕西西安710061

目的:探讨HIV患者共感染难治性丙型肝炎病毒(HCV,基因1型和4型)后的临床药物处理对策。方法:收集国内外2000年至今报道的干扰素或聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV/HIV共感染患者的随机临床对照试验结果,提取其中共感染基因1型或4型HC... 详细信息

目的:探讨HIV患者共感染难治性丙型肝炎病毒(HCV,基因1型和4型)后的临床药物处理对策。方法:收集国内外2000年至今报道的干扰素或聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV/HIV共感染患者的随机临床对照试验结果,提取其中共感染基因1型或4型HCV的HIV患者资料。利用Meta分析方法探讨HIV患者罹患丙型肝炎后,尤其是感染基因1型或4型HCV后的治疗方案。结果:Medline文献检索结果命中88篇文献,其中6篇符合纳入标准,共提取感染基因1型或4型HCV的HIV患者资料1 131份。数据分析结果显示,聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗基因1型或4型HCV的HIV患者所获得的持续病毒反应率是26%,高于干扰素联合利巴韦林治疗的反应率(8%)。聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗也优于聚乙二醇干扰素单独疗法(26%vs 13%)。而聚乙二醇干扰素联合利巴韦林疗法在基因2型或3型HCV感染的HIV患者可获得55%的持续病毒反应率。干扰素或聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗HCV/HIV共感染患者的副反应发生率和停药率相似。结论:聚乙二醇干扰素联合利巴韦林在治疗基因1型或4型HCV的HIV患者时优于干扰素联合利巴韦林或聚乙二醇干扰素单独疗法。

关键词：肝炎病毒基因型重叠感染/免疫学干扰素-α2a/治疗应用聚乙烯二醇类/治疗应用利巴韦林/治疗应用药物疗法,联合

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