目的分析阿帕替尼联合紫杉醇对A-549肺癌小鼠移植瘤生长及生物钟基因表达的影响。方法无特定病原体(SPF)级BALB/c裸鼠40只,雌雄各半,6~8周龄,体重18~20 g。于裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL A-549肿瘤细胞悬液建立裸鼠肺癌移植瘤模型。将...
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目的分析阿帕替尼联合紫杉醇对A-549肺癌小鼠移植瘤生长及生物钟基因表达的影响。方法无特定病原体(SPF)级BALB/c裸鼠40只,雌雄各半,6~8周龄,体重18~20 g。于裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL A-549肿瘤细胞悬液建立裸鼠肺癌移植瘤模型。将建模成功的40只裸鼠按随机数字表法分为模型组、阿帕替尼组、紫杉醇组和联合给药组,每组各10只。模型组每日给予0.2 mL 0.9%氯化钠溶液灌胃,并经静脉注射0.2 mL 0.9%氯化钠溶液;阿帕替尼组每日给予0.2 mL 50 mg/kg阿帕替尼灌胃;紫杉醇组每日经静脉注射0.2 mL 20 mg/kg紫杉醇;联合给药组每日给予0.2 mL 50 mg/kg阿帕替尼灌胃,并经静脉注射0.2 mL 20 mg/kg紫杉醇。各组大鼠均连续给药21 d。给药期间,于规定时间对裸鼠的一般情况、肿瘤体积、肿瘤重量、肿瘤抑制率、肿瘤细胞凋亡率、移植瘤组中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Ki-67的表达水平以及移植瘤组织中生物钟基因,如周期基因(Per)家族、时钟基因(CLOCK)、隐花色素基因(Cry)家族、脑和肌肉ARNT样蛋白1(BMAL1)、酪蛋白激酶1ε(CKIε)mRNA表达水平进行检测。结果给药后21 d,与模型组相比,阿帕替尼组、紫杉醇组和联合给药组小鼠精神状态、毛发、活动、进食状态均有所改善;小鼠体重、肿瘤抑制率、肿瘤细胞凋亡率、肿瘤组织中Per2、Per3、Cry1、Cry2、CKIεmRNA表达水平以及Caspase-3、Ki-67蛋白表达水平均显著升高,裸鼠移植瘤体积、肿瘤重量均显著减小,CLOCK的mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且联合给药组较阿帕替尼组、紫杉醇组变化更显著。结论阿帕替尼与紫杉醇联合治疗对A-549肺癌移植瘤生长有较好的抑制作用,其机制可能与上调肿瘤细胞生物钟基因Per2、Per3、Cry1、Cry2和CKIεmRNA表达,下调基因CLOCK的mRNA表达及肿瘤细胞凋亡有关。
目的 研究PPAR-γ、PDGF-βR及FAK在肺动脉平滑肌细胞迁移中的分子调控机制。方法 分离大鼠肺动脉平滑肌细胞,培养至3-7代细胞用于实验。分为4组,CON组:常规培养细胞;PDGF-BB组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml),刺激1 h后裂解细胞;Y15组:细胞同步化后加入PDGF-BB(20 ng/ml)预刺激1 h,再加入FAK抑制剂Y15(10 μmol/L)刺激2 h后裂解细胞;ROSI组:细胞同步化后加入罗格列酮(10 μmol/L)刺激1 h,再加入PDGF-BB刺激1 h后裂解细胞。裂解各组处理细胞,Western blot检测各组p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平;划痕实验及Transwell方法比较细胞迁移能力。结果 PDGF-BB组细胞迁移能力较CON组明显增强(77.3%± 4.2% vs 61.3%± 3.5%, P <0.05),p-PDGF-βR、p-FAK(Tyr397)水平提高(2.2 ± 0.12 vs 0.93 ± 0.11;1.07 ± 0.08 vs 0.39 ± 0.02, P <0.05)。Y15组细胞迁移能力较PDGF-BB组明显降低(72.7%± 4.7% vs 77.3%± 4.2%, P <0.05),p-PDGF-βR无明显变化(2.0 ± 0.10 vs 2.2 ± 0.12, P >0.05),p-FAK(Tyr397)水平降低(0.48 ± 0.09 vs 1.07 ± 0.08, P <0.05)。ROSI组细胞迁移能力较Y15组差异无统计学意义(75.3%± 4.04% vs 72.7%± 4.70%, P >0.05),p-PDGF-βR水平降低(1.25 ± 0.10 vs 2.0 ± 0.10, P <0.05);p-FAK(Tyr397)水平提高(0.52 ± 0.07 vs 0.48 ± 0.09, P <0.05);而与PDGF-BB组比较,ROSI组细胞迁移能力(77.3%± 4.2% vs 75.3%± 4.04%)及p-PDGF-βR(2.2 ± 0.12 vs 1.25 ± 0.10)、p-FAK(Tyr397)水平(1.07 ± 0.08 vs 0.52 ± 0.07)均显著降低( P <0.05)。Transwell迁移小室实验结果同划痕实验结果。结论 PPAR-γ/PDGF-βR/FAK(Tyr397)通路,可能是抑制肺动脉平滑肌细胞迁移机制之一。
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