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CRISPR/Cas9技术:探索lncRNA的自身功能以及在癌症进程中的作用

中国生物化学与分子生物学报 2025年第3期41卷 364-375页

作者：李欣胡莹王玉明昆明医科大学第二附属医院检验科昆明650000

CRISPR/Cas系统的出现极大推动了基因编辑领域的进步,特别是CRISPR/Cas9系统,已成为生物医学研究的核心工具。长非编码RNA(lncRNA)在基因调控、细胞分化和多种疾病的发展过程中发挥关键作用,尤其在癌症研究中,lncRNA作为癌症生物标志物... 详细信息

CRISPR/Cas系统的出现极大推动了基因编辑领域的进步,特别是CRISPR/Cas9系统,已成为生物医学研究的核心工具。长非编码RNA(lncRNA)在基因调控、细胞分化和多种疾病的发展过程中发挥关键作用,尤其在癌症研究中,lncRNA作为癌症生物标志物和治疗靶点,具有重要的应用前景。然而,由于lncRNA普遍具有低丰度和保守性差等特点,限制了传统手段对其功能的研究。CRISPR/Cas9技术为lncRNA的研究提供了一个高效、灵活且精确的工具,显著加速了该领域的进展。本文首先回顾了CRISPR/Cas9系统的基本原理及其在基因编辑中的广泛应用,包括CRISPR敲除、敲入、干扰和激活等多种功能系统。这些技术不仅可以筛选特定生物过程中的关键lncRNA,还能够用于基因功能研究,探索其在疾病中的作用。本文重点分析了CRISPR/Cas9技术在研究lncRNA功能和调控机制,以及其在肿瘤研究中的关键应用。此外,文章还总结了通过CRISPR/Cas9进行全基因组筛选以识别功能性lncRNA的方法,并探讨了这些lncRNA在癌症细胞增殖、迁移、侵袭以及耐药性中的作用。CRISPR/Cas9敲除系统可以高效敲除lncRNA基因,揭示其在基因调控中的具体功能。同时,CRISPR激活和干扰技术为非编码基因的研究提供了新的思路,通过调控lncRNA的表达水平,进一步探索其在癌症等疾病中的临床应用。文章还探讨了CRISPR技术在未来lncRNA研究中的潜力,尤其是在解决基因组复杂性、靶向效率和脱靶效应等技术难题方面的进展。综上所述,CRISPR/Cas9技术不仅为研究lncRNA提供了强有力的工具,也为未来开发新的癌症诊断和治疗手段提供了新的思路和机会。

关键词：成簇的规则间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9) 长非编码RNA 基因调控癌症

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耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的碳青霉烯酶基因检测和临床分析

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中国微生态学杂志 2024年第9期36卷 1041-1047,1059页

作者：陆国平王兆飞刘珍夏兆新张海福唐浩沈继录安徽医科大学附属阜阳医院检验科安徽阜阳236000 安徽医科大学第一附属医院安徽省公共卫生临床中心检验科安徽医科大学第二附属医院检验科

目的了解医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的临床分布、耐药性分析、携带的碳青霉烯酶耐药基因及患者临床情况。方法收集从临床样本中分离非重复128株CRE菌株,对所有CRE菌株用VITEK2 Compact鉴定仪和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质... 详细信息

目的了解医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的临床分布、耐药性分析、携带的碳青霉烯酶耐药基因及患者临床情况。方法收集从临床样本中分离非重复128株CRE菌株,对所有CRE菌株用VITEK2 Compact鉴定仪和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪进行鉴定与复核,进行mCIM和eCIM表型试验、碳青霉烯酶免疫层析法检测酶型和PCR技术检测基因型,用WHONET 5.6软件统计分析CRE临床分布和耐药率。查阅CRE菌株来源患者病历资料。结果mCIM阳性、eCIM阴性82株,mCIM阳性、eCIM阳性22株,m CIM阴性、eCIM不解释24株。免疫层析法检测酶型与PCR检测结果为产KPC菌株82株(78.8%),NDM菌株21株(20.2%),IMP菌株1株(1.0%),未检出VIM和OXA耐药基因。肺炎克雷伯菌主要携带耐药基因KPC(92.8%),大肠埃希菌主要携带耐药基因NDM(91.7%)。主要耐药菌株为肺炎克雷伯菌(72.7%),其次为大肠埃希菌(16.4%),CRE主要分布于神经外科(27.3%),其次为ICU(23.4%),标本类型以痰液标本为主(66.4%),其次为尿液标本(16.4%);对厄他培南、亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为100.0%、83.6%和80.5%,头孢他啶/阿维巴坦的耐药率为17.2%,耐药菌株见于产NDM、IMP菌株,但对替加环素耐药率较低(2.5%)。男性70例,女性51例,年龄主要为老年患者,>60岁占53.7%;基础疾病主要见于颅脑疾病,其次为恶性肿瘤、2型糖尿病;抗菌药物使用2种或以上占88.4%;住院天数>14 d占76.9%,抗菌药物使用>14 d占70.2%,患者死亡或自动出院占39.7%。结论CRE菌株主要携带KPC耐药基因,大多分布于神经外科,肺炎克雷伯菌占比最高,以痰标本为主,CRE感染主要见于颅脑疾病,住院时间长,使用抗生素种类多的老年患者,这些结果对于临床加强耐药监测、合理选用抗生素具有重要参考价值。

关键词：耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌聚合酶链式反应基因型金属β-内酰胺酶

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外周T细胞淋巴瘤非特指型合并纯红细胞再生障碍1例报告并文献复习

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中华血液学杂志 2025年第4期46卷 359-362页

作者：张学亚郑瑜瑜范大铬钟金发吴诗馨福建医科大学附属第二医院血液科泉州福建医科大学附属第二医院检验科泉州福建医科大学附属第二医院病理科泉州

外周T细胞淋巴瘤非特指型(PTCL-NOS)合并纯红细胞再生障碍(PRCA)国内报道较少。本文报道1例PTCL-NOS患者, 以重度贫血为首发表现, 伴有多部位淋巴结肿大。实验室检查证实红细胞减少、网织红细胞比例降低、骨髓红细胞增生明显减低, 骨髓C...

外周T细胞淋巴瘤非特指型(PTCL-NOS)合并纯红细胞再生障碍(PRCA)国内报道较少。本文报道1例PTCL-NOS患者, 以重度贫血为首发表现, 伴有多部位淋巴结肿大。实验室检查证实红细胞减少、网织红细胞比例降低、骨髓红细胞增生明显减低, 骨髓CD3+CD8+ T淋巴细胞比例显著增高, 淋巴结病理及免疫组化符合PTCL-NOS, TCRβ基因重排阳性, 一线ECHOP方案化疗4个疗程后, 患者肿大淋巴结显著缩小, 全身CT评估部分缓解, 血红蛋白升至正常, 骨髓造血红系增生恢复正常, CD3+CD8+ T淋巴细胞未检出, 目前口服来那度胺维持治疗, 预后尚好。

关键词：

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金黄色葡萄球菌临床分离株的溶血表型研究

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安徽医科大学学报 2025年 1312-1319页

作者：高菊翁胜男冷贵云李昕姚杰周强唐伟安徽医科大学第二附属医院检验科

目的探讨金黄色葡萄球菌临床分离株的溶血表型。方法采用三点接种法检测105株临床样本分离金黄色葡萄球菌的溶血表型;实时荧光定量聚合酶链式反应检测4种溶血素基因(hla、hlb、hlc和hld)mRNA表达量;VITEK 2 GP639药敏卡检测常用抗生... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌临床分离株的溶血表型。方法采用三点接种法检测105株临床样本分离金黄色葡萄球菌的溶血表型;实时荧光定量聚合酶链式反应检测4种溶血素基因(hla、hlb、hlc和hld)mRNA表达量;VITEK 2 GP639药敏卡检测常用抗生素耐药性;DNA凝胶电泳法检测mecA、sea、tst和pvl基因携带率;微孔板成膜结晶紫染色法检测生物膜形成能力;CCK-8法检测巨噬细胞毒性。结果金黄色葡萄球菌临床分离株中检出7种溶血表型。不同溶血表型金黄色葡萄球菌临床分离株在溶血素基因mRNA表达量、常用抗生素耐药性、毒力基因携带率、生物膜形成能力、小鼠巨噬细胞毒性作用等方面均有差异(P <0.05)。结论金黄色葡萄球菌临床分离株的溶血表型多样,应当引起微生物检验、临床治疗和院感防控等多维度重点关注。

关键词：金黄色葡萄球菌临床分离株溶血表型溶血素耐药性毒力

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Garvicin LG6对不同溶血表型金黄色葡萄球菌的抗菌活性

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中国感染控制杂志 2025年第1期24卷 23-29页

作者：唐伟翁胜男王亚武姚杰李昕周强徐元宏安徽医科大学第一附属医院检验科安徽合肥230022 安徽医科大学第二附属医院检验科安徽合肥230601

目的探索格氏乳球菌SHAMU-LG6所分泌的细菌素(初步命名为garvicin LG6)对不同溶血表型金黄色葡萄球菌的抗菌活性。方法收集分离自2021—2023年安徽某医院临床患者的金黄色葡萄球菌,三点接种法检测金黄色葡萄球菌的溶血表型,并根据药敏... 详细信息

目的探索格氏乳球菌SHAMU-LG6所分泌的细菌素(初步命名为garvicin LG6)对不同溶血表型金黄色葡萄球菌的抗菌活性。方法收集分离自2021—2023年安徽某医院临床患者的金黄色葡萄球菌,三点接种法检测金黄色葡萄球菌的溶血表型,并根据药敏检测结果将各溶血表型金黄色葡萄球菌进一步划分为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。牛津杯法抑菌试验检测格氏乳球菌SHAMU-LG6对不同溶血表型金黄色葡萄球菌的拮抗活性。对格氏乳球菌SHAMU-LG6进行全基因组测序,使用antiSMASH 7.0和BAGEL4在线数据库,寻找garvicin LG6的生物合成基因簇。经过大孔树脂吸附、梯度乙醇洗脱、旋转蒸发干燥和旋干物复溶,牛津杯法抑菌试验检测garvicin LG6粗提物对金黄色葡萄球菌的抗菌活性。结果格氏乳球菌SHAMU-LG6能够明显拮抗不同溶血表型的MSSA和MRSA。格氏乳球菌SHAMU-LG6的染色体基因组上存在garvicin LG6生物合成基因簇。格氏乳球菌SHAMU-LG6单个菌落或6 mL发酵液所分泌的garvicin LG6抗菌活性至少相当于30μg头孢西丁药敏纸片。结论Garvicin LG6能够高效杀伤不同溶血表型MSSA和MRSA,具有开发成新型抗菌药物的潜力,临床应用前景很大。

关键词：格氏乳球菌细菌素金黄色葡萄球菌溶血表型抗菌活性

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耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌全基因组测序及黏菌素耐药分析

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中国感染控制杂志 2025年第1期24卷 37-44页

作者：储雯雯刘周李昕叶乃芳龚真曾晓娇周强安徽医科大学第二附属医院检验科安徽合肥230601

目的通过全基因组测序分析临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的分子流行病学及黏菌素耐药基因,为临床诊疗提供参考。方法收集2021—2023年安徽省某三级甲等综合医院住院患者临床标本分离的57株CRKP,对所有菌株进行药敏试验。采用全基... 详细信息

目的通过全基因组测序分析临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的分子流行病学及黏菌素耐药基因,为临床诊疗提供参考。方法收集2021—2023年安徽省某三级甲等综合医院住院患者临床标本分离的57株CRKP,对所有菌株进行药敏试验。采用全基因测序技术分析CRKP菌株多位点序列分型、荚膜血清型、耐药基因和毒力基因,并对所有菌株序列进行单核苷酸多态性分析,采用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增与黏菌素耐药相关基因。结果57株CRKP对除替加环素外的14种抗菌药物均为耐药。测序结果显示,93.0%(53/57)的CRKP携带bla KPC-2,ST11型CRKP菌株检出率最高(51/57,89.5%)。单核苷酸多态性聚类分析表明,57株CRKP分为11个克隆群,其中有4个克隆群均为ST11-KL64型CRKP。40株(70.2%)CRKP携带多种毒力基因。5株黏菌素耐药CRKP,其耐药机制是在mgr B基因70位点处插入一个ISKpn26元件。结论CRKP菌株以产KPC-2 ST11-KL64型为主要流行型,在重症监护病房有播散性流行。ISKpn26元件插入引起mgr B基因突变与该地区CRKP黏菌素耐药有关。

关键词：耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌全基因组测序单核苷酸多态性分析黏菌素耐药 ISKpn26

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去甲泽拉木醛通过抑制AKT/CREB信号通路抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 280-288页

作者：韩齐齐叶梦然金齐力蚌埠医科大学检验医学院安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学第二附属医院检验科安徽蚌埠233080

目的探讨去甲泽拉木醛抑制非小细胞肺癌细胞A549和H1299增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡的作用机制。方法镜下初步观察不同浓度的去甲泽拉木醛(0、1、3、10、30μmol/L)对A549和H1299细胞形态及细胞数量的影响。通过克隆形成、CCK-8、... 详细信息

目的探讨去甲泽拉木醛抑制非小细胞肺癌细胞A549和H1299增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡的作用机制。方法镜下初步观察不同浓度的去甲泽拉木醛(0、1、3、10、30μmol/L)对A549和H1299细胞形态及细胞数量的影响。通过克隆形成、CCK-8、细胞划痕、Transwell和流式细胞实验检测去甲泽拉木醛对A549和H1299细胞增殖、细胞活力、细胞迁移和侵袭、细胞凋亡的影响以及SC79处理后对细胞凋亡的影响。通过Western blotting检测不同浓度的去甲泽拉木醛对A549和H1299细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase 3表达和AKT/CREB磷酸化水平变化的影响,SC79处理后对凋亡蛋白表达的影响。结果镜下观察药物作用后,细胞形态由饱满变为细长,细胞间隙增宽。CCK-8实验和克隆形成实验结果显示去甲泽拉木醛能抑制A549和H1299细胞活力并且抑制细胞的增殖(P<0.05)。流式细胞术结果表明,去甲泽拉木醛诱导A549和H1299细胞的凋亡,而SC79处理后逆转了促凋亡作用(P<0.05)。划痕和Transwell实验结果说明,去甲泽拉木醛抑制了A549和H1299细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。Western blotting实验结果表明,去甲泽拉木醛处理后A549和H299细胞中Bax、clevaed-caspase3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下调,而SC79的使用逆转了凋亡蛋白的表达趋势,E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vimentin表达下调,AKT/CREB磷酸化水平也被显著抑制(P<0.05)。结论去甲泽拉木醛能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其机制可能与其抑制AKT/CREB信号通路有关。

关键词：非小细胞肺癌去甲泽拉木醛 AKT CREB

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靶向B7-H3抑制人脐静脉血管内皮细胞生长、迁移和血管形成

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中国药理学通报 2024年第7期40卷 1311-1316页

作者：刘宇王南楠牛可凌惠娟朱亚玉胡伟陈礼文安徽医科大学第二附属医院检验科安徽合肥230601 安徽医科大学第二附属医院临床药物实验中心安徽合肥230601 安徽医科大学第二附属医院输血科安徽合肥230601

目的探讨靶向抑制协同信号分子B7-H3对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)生长、迁移及血管生成能力影响。方法使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲减HUVECs B7-H3分子,采用CCK-8实验检测24 h、48 h和72 h细胞增殖;采用Transwell实验检测24 h细胞迁移;三维细胞培养观察细胞血管生成。结果与空序列转染的阴性对照(siRNA-Control)组比较,siRNA-720、siRNA-1707和siRNA-16903条备选siRNA对B7-H3表达的抑制效果不同,siRNA-1690抑制率明显高于siRNA-720和siRNA-1707,因此,选择使用siRNA-1690序列进行后续实验。CCK-8细胞活力实验结果显示,敲减B7-H3后24 h、48 h和72 h HUVECs增殖能力分别下降24%、22%(P>0.05,与24 h比较)和15%(P<0.05,与48 h比较);Transwell迁移实验表明,与siRNA-Control组对比,敲减B7-H3的HUVECs 24 h迁移能力明显减低(P<0.01);三维细胞培养结果表明,采用si-B7-H3敲减B7-H3基因后,HUVECs血管生成能力明显下降(P<0.01)。结论靶向B7-H3抑制HUVECs生长、迁移及血管生成。

关键词：协同信号分子血管生成靶向药物小干扰RNA 人脐静脉血管内皮细胞细胞迁移

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巨噬细胞在原发性胆汁性胆管炎发生发展中的作用

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临床肝胆病杂志 2024年第9期40卷 1924-1928页

作者：邓宗柒邰文琳昆明医科大学第二附属医院检验科昆明650101

原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种持续的炎症性自身免疫性肝病,以肝内小胆管炎症损伤和胆汁淤积为主要特征。目前,PBC的确切发病机制尚不清楚,但一致认为PBC是多种因素协同作用的结果。而在与PBC相关的免疫和炎症级联反应中,巨噬细胞作为... 详细信息

原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种持续的炎症性自身免疫性肝病,以肝内小胆管炎症损伤和胆汁淤积为主要特征。目前,PBC的确切发病机制尚不清楚,但一致认为PBC是多种因素协同作用的结果。而在与PBC相关的免疫和炎症级联反应中,巨噬细胞作为必不可少的免疫细胞出现,积极参与对胆管上皮细胞的损伤。本文介绍了巨噬细胞在PBC中的来源定位及异质性变化,综述了巨噬细胞在PBC发病机制中的潜在作用。

关键词：原发性胆汁性胆管炎单核细胞巨噬细胞病理过程

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绿原酸抗菌作用及机制的研究进展

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中国抗生素杂志 2024年第2期49卷 141-150页

作者：李阳昱李庆蓉陈孝红薛丽和平安吕梅杨旭昆明医科大学第二附属医院检验科昆明650032

绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径合成的一种苯丙素类物质,自然存在于多种中药材和食物中,杜仲、金银花和咖啡等植物中含量较高,具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗癌和免疫调节等多种药理活性。近年来,绿原酸作为研究活性物质的焦... 详细信息

绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径合成的一种苯丙素类物质,自然存在于多种中药材和食物中,杜仲、金银花和咖啡等植物中含量较高,具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗癌和免疫调节等多种药理活性。近年来,绿原酸作为研究活性物质的焦点之一,因其抗菌谱广,对多种细菌和真菌均有较好的抗菌活性,故绿原酸对临床菌株的抗菌作用逐渐被重视和研究。本文综述了近年来国内外关于绿原酸对多种致病菌的抗菌作用及机制的研究进展,旨在为绿原酸抗菌作用的深入研究提供参考,为临床抗感染治疗和控制带来新思路,有助于绿原酸在医药领域的开发。

关键词：绿原酸活性多酚抗菌作用临床耐药菌机制

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