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西安交通大学学报（医学版） 2016年第6期37卷 795-798,809页

作者：郝秀静阳辉王娟李敏李学强西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏银川750021 宁夏大学宁夏银川750021

目的研究18β-甘草次酸哌嗪衍生物D34、D35对SMMC-7721细胞增殖的的抑制作用及对凋亡的影响。方法用18β-甘草次酸哌嗪衍生物D34、D35以不同浓度、不同时间段处理SMMC-7721细胞,显微镜下观察其对肝癌SMMC-7721细胞形态结构的影响;MTT法... 详细信息

目的研究18β-甘草次酸哌嗪衍生物D34、D35对SMMC-7721细胞增殖的的抑制作用及对凋亡的影响。方法用18β-甘草次酸哌嗪衍生物D34、D35以不同浓度、不同时间段处理SMMC-7721细胞,显微镜下观察其对肝癌SMMC-7721细胞形态结构的影响;MTT法检测18β-甘草次酸哌嗪衍生物D34、D35对SMMC-7721细胞的增殖抑制率;Hoechst-33258细胞凋亡染色试剂盒检测细胞凋亡情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果MTT检测结果表明,18β-甘草次酸哌嗪衍生物D34、D35能够抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,且呈浓度依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测细胞凋亡率,D35为26.71%、D34为36.95%。结论 18β-甘草次酸哌嗪衍生物D34、D35对SMMC-7721细胞有增殖抑制作用和促凋亡作用,且优于18β-甘草次酸(GA)。

关键词： 18β-甘草次酸哌嗪衍生物 SMMC-7721 细胞凋亡

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TMV病毒载体表达重组rPA致受体本氏烟叶片坏死的初步分析

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基因组学与应用生物学 2020年第8期39卷 3584-3592页

作者：徐丽吴乐乐丁向真李志英王盛宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021 宁夏大学宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室银川750021

重组rPA是临床上治疗血栓性疾病的主要溶栓药物。利用烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)表达载体在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中表达重组rPA会致使接种叶片严重坏死,受体细胞坏死会影响重组产物的积累、定量和下游纯化,剖析... 详细信息

重组rPA是临床上治疗血栓性疾病的主要溶栓药物。利用烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)表达载体在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中表达重组rPA会致使接种叶片严重坏死,受体细胞坏死会影响重组产物的积累、定量和下游纯化,剖析坏死症状产生原因可为提高外源基因在植物中表达提供指导。分别从替换TMV病毒载体携带的外源基因和更换TMV病毒表达载体两个方面入手,通过比较叶片接种部位的表型变化和重组产物在叶片中的积累情况,初步解析致接种叶片坏死的主要因素。结果表明,农杆菌菌株和RNA沉默抑制子与本氏烟叶片坏死症状的产生无关联;TMV病毒载体自身不是坏死症状产生的直接原因;外源重组rPA对受体本氏烟细胞无细胞毒性。推测TMV病毒载体与重组rPA相互作用是引起本氏烟接种叶片细胞坏死的主要原因。

关键词：重组rPA 烟草花叶病毒豇豆花叶病毒病毒表达载体本氏烟叶片坏死

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18β-甘草次酸通过Wnt/β-catenin信号通路对U937细胞凋亡的调控机制研究

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中国药学杂志 2014年第19期49卷 1710-1715页

作者：吴晓玲庄佩佩郝嘉楠邓光存宁夏大学生命科学学院宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021

目的探讨18β-甘草次酸(GA)通过Wnt/β-catenin信号对人类白血病细胞株U937细胞凋亡的调控机制。方法用双荧光素酶报告基因检测Wnt经典信号通路信号,用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,Annex in V/PI双标法检测凋亡率及坏死率,Western-blo... 详细信息

目的探讨18β-甘草次酸(GA)通过Wnt/β-catenin信号对人类白血病细胞株U937细胞凋亡的调控机制。方法用双荧光素酶报告基因检测Wnt经典信号通路信号,用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,Annex in V/PI双标法检测凋亡率及坏死率,Western-blot检测凋亡及坏死相关蛋白水平。结果 18β-甘草次酸能增强Wnt/β-catenin信号通路的β-catenin/TCF活性,从而上调该信号通路靶蛋白CyclinD1的表达;并通过上调促凋亡蛋白BAX的表达,下调抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2和坏死蛋白RIP3的蛋白表达水平,同时增强caspase3活性,从而诱导细胞凋亡,且在一定范围内呈剂量依赖性。结论 18β-甘草次酸通过激活Wnt/β-catenin信号通路来抑制U937细胞增殖和诱导其凋亡,并且对细胞的坏死没有促进作用。

关键词： U937细胞 18β-甘草次酸凋亡 Wnt经典信号通路

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抑制AX-3表达改变本氏烟氧化和光合磷酸化ATP积累

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基因组学与应用生物学 2020年第5期39卷 2197-2206页

作者：撒世娟拓宁伍涵宇王佩云殷倩姚新灵宁夏大学宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室银川750021 宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021

基因组注释预测了AX-3普遍存在于不同植物种类,但其功能鲜有报道。本研究通过StAX-3基因反义cDNA在本氏烟(Nicotiana benthamiana)体内表达,实现了其AX-3基因表达下调;蛋白质组表达谱测定分析显示,伴随AX-3积累减少,168个DAPs(表达倍绝... 详细信息

基因组注释预测了AX-3普遍存在于不同植物种类,但其功能鲜有报道。本研究通过StAX-3基因反义cDNA在本氏烟(Nicotiana benthamiana)体内表达,实现了其AX-3基因表达下调;蛋白质组表达谱测定分析显示,伴随AX-3积累减少,168个DAPs(表达倍绝对值大于1.5)的积累随之改变;其中15个密切关联DAPs网络分析显示,AX-3下调表达,主要降低了9种线粒体内代谢酶类的积累,包括氧化磷酸化ATP合成酶和TCA循环核心脱氢酶,同时,增加了光合作用代谢酶类合成,包括光合磷酸化ATP合成酶和叶绿素合成底物萜类酶等。叶绿素和ATP含量等表型测定结果,证实了萜类底物和叶绿素合成积累增加,促进光合磷酸化ATP合成积累。结果表明,StAX-3调控氧化和光合磷酸化ATP合成积累模式。该结果不仅明确了St AX-3具有调控线粒体和叶绿体能量代谢的功能,而且为进一步研究植物ataxin-3功能提供理论指导。

关键词： ataxin-3 ATP 氧化磷酸化光合磷酸化

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钙结合蛋白S100A4对BCG感染THP-1细胞自噬的调控作用

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 311-322页

作者：刘悦阳李梦媛聂雪伊马亚博侯雨欣马伯利杨易徐金瑞宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021 宁夏医科大学回医药现代化教育部重点实验室银川750010

本研究旨在探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核巨噬细胞THP-1后,钙结合蛋白S100A4对细胞自噬的调控作用。以感染复数为10∶1的BCG感染THP-1细胞不同时间,用Western blot检测S100A4和LC3Ⅱ的... 详细信息

本研究旨在探究牛结核分枝杆菌减毒株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染人单核巨噬细胞THP-1后,钙结合蛋白S100A4对细胞自噬的调控作用。以感染复数为10∶1的BCG感染THP-1细胞不同时间,用Western blot检测S100A4和LC3Ⅱ的表达,以确定最佳感染时间,并采用透射电镜观察自噬体数量变化。在BCG单独感染或与S100A4小干扰RNA共处理THP-1细胞12 h后,采用qRT-PCR检测S100A4及自噬相关因子--微管相关蛋白轻链3II (microtubule-associated protein light chain 3Ⅱ, LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白7(autophagy-related gene 7, Atg7)、Beclin-1在mRNA水平上的表达,采用Western blot检测S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1在蛋白水平的表达。利用mRFP-GFP-LC3检测自噬流,激光共聚焦显微镜观察细胞中mRFP-LC3和mRFP-GFP-LC3点状聚集。结果显示:在BCG感染THP-1细胞不同时间后,S100A4和LC3Ⅱ在蛋白表达水平随感染时间的延长先上升后下降,在12 h时表达最高(P<0.001),且自噬体数量明显增多。在mRNA水平上,与siNC组相比,siNC+BCG感染组S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的mRNA表达水平显著上调(P<0.05),当BCG和siS100A4共处理后,S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1在mRNA水平的表达显著(P<0.05)或极显著(P<0.01,P<0.001)下调;在蛋白水平上,与未感染组相比,S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的蛋白表达量显著增多(P<0.05),BCG和siS100A4共处理后,S100A4、LC3Ⅱ、Atg7、Beclin-1的蛋白表达量均极显著减少(P<0.001);与未感染组相比,BCG组自噬体的数量极显著增多(P<0.01),siS100A4+BCG组与siNC+BCG组相比,自噬体的数量显著减少(P<0.05)。S100A4对BCG感染巨噬细胞诱导的自噬具有调控作用,S100A4能够促进BCG诱导的THP-1细胞自噬。

关键词：结核分枝杆菌细胞自噬 S100A4 THP-1细胞

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绵羊肺炎支原体hlyA基因的表达及活性初步鉴定

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农业生物技术学报 2016年第3期24卷 435-442页

作者：孙远航李敏王晶罗海霞何玉龙郝秀静王玉炯宁夏大学生命科学学院/西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可引起绵羊(Ovis aries)及山羊(Capra hircus)的支原体性肺炎,分布广泛,危害严重。本实验在课题组前期完成MO Y98株基因组测序的基础上,通过基因注释、PCR等获得了该菌株可能的溶血素(hemol... 详细信息

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可引起绵羊(Ovis aries)及山羊(Capra hircus)的支原体性肺炎,分布广泛,危害严重。本实验在课题组前期完成MO Y98株基因组测序的基础上,通过基因注释、PCR等获得了该菌株可能的溶血素(hemolysin,hly A)基因;依据大肠杆菌(Escherichia coli)优势密码子对hly A基因进行优化,构建优化后hly A原核表达质粒p ET32a-hly A;将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S中,获得了相应的重组菌株,并对重组菌株进行诱导表达;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定,并经Ni2+金属螯合柱纯化。克隆了MO hly A基因序列(Gen Bank登录号:KT598390),片段大小为375 bp,编码125个氨基酸。优化后密码子适应指数为0.91,目的基因适于在大肠杆菌中表达。重组融合蛋白多以包涵体的形式存在,其相对分子质量约为31.6 k D,与预期大小一致。Western blot结果显示,上清中纯化出的目的蛋白能与一抗发生反应,重组蛋白特异性较好。溶血实验表明,当纯化后蛋白浓度稀释到0.125μg/m L时,溶解红细胞的能力已经下降。该研究结果为后续绵羊肺炎支原体致病性研究提供了基础资料。

关键词：绵羊肺炎支原体(MO) 溶血素(hlyA) 密码子优化溶血活性

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过量表达马铃薯ataxin-3可增加泛素积累并反向调控本氏烟生长

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基因组学与应用生物学 2018年第10期37卷 4493-4500页

作者：殷倩乔丽媛王佩云伍涵宇拓宁姚新灵宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室

动物细胞中ataxin-3与泛素特异结合,通过去泛素化阻止蛋白质水解;基因组注释预测ataxin-3同源物存在于植物中,但到目前为止尚未见植物ataxin-3基因功能的研究报道;本研究克隆了马铃薯（Solanum tuberosum） ataxin-3编码基因StAX c DNA... 详细信息

动物细胞中ataxin-3与泛素特异结合,通过去泛素化阻止蛋白质水解;基因组注释预测ataxin-3同源物存在于植物中,但到目前为止尚未见植物ataxin-3基因功能的研究报道;本研究克隆了马铃薯（Solanum tuberosum） ataxin-3编码基因StAX c DNA,转化StAX于本氏烟（Nicotiana benthamiana）基因组,筛选获得StAX过量表达株系stax-9;测定结果显示,stax-9叶片ataxin-3、UBI 3和CDC48 mRNA积累显著增加,stax-9叶片ataxin-3、寡聚泛素和总蛋白积累分别比WT株系增加了138%、81%和38%,而赤霉素含量仅是WT的1/6;研究结果表明,ataxin-3本氏烟体内过量表达,显著增强了泛素转录和翻译,增加了总蛋白积累,减少了赤霉素积累,导致半矮化表型;结论认为植物ataxin-3通过正向调控泛素和蛋白积累,反向调控生长;本研究为植物ataxin-3功能的进一步理解提供依据。

关键词：桑花叶萎缩类病毒锤头型核酶发夹型核酶聚类分析

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Necrostatin-1对BCG感染后小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的调控

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农业生物技术学报 2016年第10期24卷 1552-1559页

作者：张嘉美马臣杰赵宁吴晓玲邓光存西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏大学生命科学学院

5-(1H-吲哚-3-基甲基)-3-甲基-2-硫酮-4-咪唑烷酮(Necrostatin-1,Nec-1)是一种能够特异的、有效抑制细胞程序性凋亡的小分子物质。为了探讨Nec-1对卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)诱导的小鼠(Mus musculus)巨噬细胞RAW264.7凋亡的调控作用,本研究采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT)比色法检测细胞存活率,Annexin V和碘化丙啶(propidine iodide,PI)双染法检测细胞凋亡率,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位水平,采用分光光度法检测细胞内Caspase-3的酶活性,q RT-PCR和Western blot法检测凋亡相关基因的m RNA和蛋白表达水平。结果表明,Nec-1可提高被BCG感染巨噬细胞的存活率,降低其凋亡率,通过降低线粒体膜电位水平、上调抑凋亡基因Bcl-2的表达同时下调RIP1、RIP3和BAX基因的表达水平,从而有效降低了Caspase-3的蛋白表达量及酶活性。本研究表明Nec-1可通过提高线粒体膜电位水平、并下调促凋亡蛋白的表达量,从而抑制被BCG感染后巨噬细胞的凋亡,这将有助于进一步研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)与巨噬细胞间的相互作用,对于揭示结核病的致病机理具有重要意义。

关键词： Necrostatin-1 RAW264.7细胞 BCG 细胞凋亡

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过表达SOX2对BCG诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞中TLR4/TBK-1/IRF3信号炎性反应的影响

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免疫学杂志 2019年第7期35卷 581-586页

作者：袁超刘蕾牛小芸黑志平周彦兵刘晓明徐金瑞杨易宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室

目的探讨SOX2对肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性反应的调控作用。方法利用过表达SOX2慢病毒感染肺泡上皮A549细胞系,嘌呤霉素筛选建立稳定过表达SOX2的A549细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测过表达SOX2细胞系的功能,Wester... 详细信息

目的探讨SOX2对肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性反应的调控作用。方法利用过表达SOX2慢病毒感染肺泡上皮A549细胞系,嘌呤霉素筛选建立稳定过表达SOX2的A549细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测过表达SOX2细胞系的功能,Western blot和ELISA方法检测SOX2在肺泡Ⅱ型上皮细胞感染结核分枝杆菌后炎性相关蛋白及炎性因子的表达。结果成功构建过表达SOX2稳转细胞系,细胞中SOX2基因和蛋白均高表达(P<0.01)。用Western blot检测TLR4信号通路相关蛋白表达情况,过表达SOX2组与对照组(NC)相比较,TLR4、TRAF3、TBK-1和IRF-3蛋白表达均上调且差异极显著(P<0.01)。BCG刺激下,TLR4/TBK-1/IRF3相关蛋白均高表达,过表达SOX2减弱了BCG诱导的TLR4/TBK-1/IRF3相关蛋白的高表达,炎症因子IL-6和TNF-α亦表现出相同趋势。结论过表达SOX2能够减弱BCG诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症反应。

关键词：过表达SOX2 卡介苗 TLR4/TBK-1/IRF3 炎性反应

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发状念珠藻过氧化物还原酶NfPrx基因的克隆与表达分析

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植物生理学报 2016年第8期52卷 1287-1294页

作者：岳思君周娟郑蕊范红丽苏建宇宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021

过氧化物还原酶(peroxiredoxin,Prx)属抗氧化蛋白超家族,为了探究Prx在发状念珠藻抗逆过程中所具有的生物学功能,从发状念珠藻细胞中克隆了NfPrx基因的完整开放阅读框(ORF),并对基因序列特征进行了生物信息学分析,根据氨基酸序列预测了... 详细信息

过氧化物还原酶(peroxiredoxin,Prx)属抗氧化蛋白超家族,为了探究Prx在发状念珠藻抗逆过程中所具有的生物学功能,从发状念珠藻细胞中克隆了NfPrx基因的完整开放阅读框(ORF),并对基因序列特征进行了生物信息学分析,根据氨基酸序列预测了该蛋白的三维结构,在此基础上构建了基因的融合表达载体并诱导其表达,同时探讨了PEG-6000胁迫下NfPrx的表达特性。结果表明,NfPrx包含612 bp的ORF,编码203个氨基酸,NfPrx具有PRX_Typ2cys结构域,属于硫氧还蛋白超基因家族,与点形念珠藻、丝状蓝藻7507、微毛藻7126、池生念珠藻CENA21等物种的Prx氨基酸序列一致性高达94%以上。NfPrx与点形念珠藻处在同一进化枝上,具有较近的亲缘关系。利用所构建的原核表达载体,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳,证实诱导表达的NfPrx蛋白与预期结果大小一致。qRT-PCR分析结果显示,NfPrx的表达随干旱胁迫程度的增加先增后降,PEG-6000浓度为8%时,表达量达到峰值,根据表达特性,推测过氧化物还原酶可能参与响应发状念珠藻逆境胁迫过程。

关键词：发状念珠藻过氧化物还原酶基因克隆表达分析

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