检索结果-内蒙古大学图书馆

寄生虫与医学昆虫学报 2016年第3期23卷 143-147页

作者：朱长强吴婷艾乐乐杨露吕恒李春晓谭伟龙赵彤言南京军区疾病预防控制中心南京210002 中国人民解放军第八一医院南京210002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

应用PCR技术检测江苏徐州地区三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus蚊胃血来源，研究其吸血习性。根据三带喙库蚊可能吸血对象（猪、人、牛、羊、鼠、鸡）的线粒体DNA细胞色素b序列的差异，设计种特异引物，建立聚合酶链反应（PCR）体系... 详细信息

应用PCR技术检测江苏徐州地区三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus蚊胃血来源，研究其吸血习性。根据三带喙库蚊可能吸血对象（猪、人、牛、羊、鼠、鸡）的线粒体DNA细胞色素b序列的差异，设计种特异引物，建立聚合酶链反应（PCR）体系鉴定三带喙库蚊胃血来源。同时，用该方法检测猪血、人血、牛血、羊血、鼠血、鸡血中提取的DNA，验证其特异性；对吸饲人血后不同时间（1、12、24、36、48、60h）的中华按蚊进行检测，测试该方法的敏感性。该方法可从已知动物血样提取的DNA中分别扩增得到689（人）、561（牛）、453（猪）、225（羊）、485（鼠）、266bp（鸡）大小的特异性条带；吸人血36h内的中华按蚊均能扩增出特异性条带，在吸人血后48、60h的中华按蚊中，均未扩出特异性条带。共检测24只现场三带喙库蚊，血源来自猪、人、鸡、牛、鼠、羊分别为7、6、3，2、2、1只，其中5只蚊虫兼吸吸血。建立的PCR检测方法可鉴定三带喙库蚊蚊胃血来源，结果稳定可靠；徐州地区三带喙库蚊不仅嗜吸猪血和人血，也可兼吸其他动物血。

关键词：三带喙库蚊蚊胃血 PCR 吸血习性

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鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码包涵体膜蛋白

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生物技术通讯 2016年第1期27卷 17-20页

作者：李鹏何君朱虹李岩伟于永慧端青宋立华病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 解放军第264医院山西太原030001

目的:鹦鹉热衣原体的B598_0590基因与沙眼衣原体的毒力基因CT135同源,本研究旨在分析该基因的表达和定位。方法:生物信息学方法分析B598_0590基因的进化地位,比较B598_0590蛋白和沙眼衣原体毒力蛋白CT135的氨基酸疏水特征;重组表达、纯... 详细信息

目的:鹦鹉热衣原体的B598_0590基因与沙眼衣原体的毒力基因CT135同源,本研究旨在分析该基因的表达和定位。方法:生物信息学方法分析B598_0590基因的进化地位,比较B598_0590蛋白和沙眼衣原体毒力蛋白CT135的氨基酸疏水特征;重组表达、纯化鹦鹉热衣原体的B598_0590蛋白,免疫小鼠制备抗血清;共聚焦免疫荧光观察鹦鹉衣原体在正常培养条件和使用Lpx C抑制剂时B598_0590基因的表达和定位。结果:衣原体属内12个种的基因组均含有CT135同源基因,它们编码的蛋白质有相似的疏水特征;B598_0590与CT135的氨基酸同源性为21%;B598_0590的免疫荧光染色特征与包涵体膜蛋白Inc A相似,浓染包涵体膜;Lpx C抑制剂可抑制网状体的分裂、包涵体的生长及网状体向原体转化,包涵体膜蛋白的染色呈现典型的空泡结构。结论:Lpx C抑制剂可用于鉴定未知的鹦鹉热衣原体包涵体膜蛋白;鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码此前尚未鉴定的包涵体膜蛋白。

关键词：鹦鹉热衣原体包涵体膜蛋白蛋白定位 CT135 B598_0590

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四例咽拭子检测阳性发热伴血小板减少综合征重症患者的临床特征分析？

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第1期23卷 21-27页

作者：胡建功彭伟孙毅崔宁郭辰涛卢庆彬杨振东王黎源张小爱刘玮军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第一五四医院河南信阳464000 北京大学公共卫生学院北京100191 安徽医科大学合肥230032 商城人民医院河南商城465350

通过疑似发热伴血小板减少综合征（ Severe fever with thrombocytopenia syndrome， SFTS）病例咽拭子的新型布尼亚病毒（SFTSV）检出情况，探讨SFTSV通过呼吸道传播的可能性。按照国家卫生部颁发的《发热伴血小板减少综合征防治指南（... 详细信息

通过疑似发热伴血小板减少综合征（ Severe fever with thrombocytopenia syndrome， SFTS）病例咽拭子的新型布尼亚病毒（SFTSV）检出情况，探讨SFTSV通过呼吸道传播的可能性。按照国家卫生部颁发的《发热伴血小板减少综合征防治指南（2010版）》中疑似病例的纳入标准，于2013年5～9月在SFTS高发区河南信阳的监测哨点医院收集72例疑似 SFTS 病例的血清和咽拭子标本，采用实时 RT-PCR 方法和ELISA方法检测SFTSV。结果显示，在72例疑似SFTS病例中，52（72.2％）例检测是SFTSV阳性，其中46例核酸RT-PCR检测阳性，6例血清ELISA检测阳性。在52例SFTSV阳性病例中，4（7.7％）例咽拭子核酸检测SFTSV阳性；在20例SFTSV阴性病例中，咽拭子核酸均未检测到SFTSV。4例咽拭子SFTSV阳性病例均为重症，同时都伴有咳嗽症状，其病毒载量最高可达108 copies／mL。 SFTSV在患者的咽拭子中可以检测到，咽拭子核酸检测SFTSV阳性检出率远低于血清标本，其作为检测SFTSV的可行性值得商榷。咽拭子检测SFTSV阳性患者体内病毒载量高且伴有咳嗽症状，加大了SFTSV通过呼吸道传播的风险。

关键词：发热伴血小板减少综合征 RT-PCR 传播途径咽拭子

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贝氏柯克斯体穿梭载体构建及转化方法建立

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生物技术通讯 2016年第5期27卷 625-628页

作者：罗声栋卢姗姗胡燕王涛于永慧冯乐孙志会宋立华病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 解放军第302医院临床研究管理中心北京100039

目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan^R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P... 详细信息

目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan^R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-Kan^R串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果:构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论:建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。

关键词：贝氏柯克斯体 Q热穿梭载体转化 RSF1010质粒

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鹦鹉热衣原体致病机制研究进展

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国际检验医学杂志 2016年第6期37卷 780-782页

作者：李鹏宋立华苗晋华中国人民解放军264医院检验科山西太原030001 病原微生物生物安全国家重点实验室/军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

鹦鹉热衣原体（Cps）是一种专性真核细胞内寄生,有独特的二相型发育周期,可形成具有感染能力的原体（EB）和具有繁殖能力的网状体（RB）,革兰染色阴性的细菌。Cps归类于衣原体科中的衣原体属,早期Everett等将其归类为嗜衣原体属,国内虽... 详细信息

鹦鹉热衣原体（Cps）是一种专性真核细胞内寄生,有独特的二相型发育周期,可形成具有感染能力的原体（EB）和具有繁殖能力的网状体（RB）,革兰染色阴性的细菌。Cps归类于衣原体科中的衣原体属,早期Everett等将其归类为嗜衣原体属,国内虽一直沿用这样的分类体系,但国际衣原体委员会已明确Cps属于衣原体属,同时取消嗜衣原体属分类。

关键词：衣原体致病机制质粒三型分泌系统 CT135基因

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嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70的表达、纯化及抗原性研究

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军事医学 2015年第3期39卷 229-231页

作者：许广杨尚学义汤雪萍钱垚姜永强李艳安徽医科大学解放军307医院临床学院合肥230032 解放军307医院重症医学科北京100071 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的验证嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70(Dna K)的抗原性。方法以嗜麦芽窄食单胞菌K279a为模板,PCR扩增Dna K基因的全序列,将该序列连接到p ET-30a载体,转入大肠杆菌BL-21中,经1 mmol/L的IPTG 37℃诱导表达,目的蛋白纯化后进行Wester... 详细信息

目的验证嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70(Dna K)的抗原性。方法以嗜麦芽窄食单胞菌K279a为模板,PCR扩增Dna K基因的全序列,将该序列连接到p ET-30a载体,转入大肠杆菌BL-21中,经1 mmol/L的IPTG 37℃诱导表达,目的蛋白纯化后进行Western印迹。结果与结论 Western印迹证实表达的重组蛋白能与鼠抗人HSP70单抗特异性结合,且与该菌的全菌免疫后血清有反应,而与免疫前血清无反应。嗜麦芽窄食单胞菌HSP70具有抗原性,可作为保护性抗原候选分子。

关键词：嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70 重组蛋白抗原性

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恙虫病东方体三种膜蛋白抗原包被酶联免疫吸附试验的特异性和敏感性分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2015年第3期22卷 141-146页

作者：汪鹏程熊小路焦俊龚文平杨晓梅温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军第105医院检验科合肥230031

用恙虫病东方体的r47、 r56、 r58 kDa重组膜蛋白抗原包被建立酶联免疫吸附试验（ ELISA ），对恙虫病东方体实验感染小鼠血清和临床患者血清做IgG抗体检测。8份恙虫病感染小鼠血清中除1份血清与r58 kDa蛋白的反应阴性外其他反应均为阳... 详细信息

用恙虫病东方体的r47、 r56、 r58 kDa重组膜蛋白抗原包被建立酶联免疫吸附试验（ ELISA ），对恙虫病东方体实验感染小鼠血清和临床患者血清做IgG抗体检测。8份恙虫病感染小鼠血清中除1份血清与r58 kDa蛋白的反应阴性外其他反应均为阳性；而这3个重组蛋白与贝氏柯克斯体（ Q热病原体）、莫氏立克次体（地方性斑疹伤寒病原体）、黑龙江立克次体（远东斑点热病原体）感染小鼠血清反应均为阴性。另外，12份恙虫病患者血清对这3个蛋白的反应均有11份（92％）为阳性。另外， r47 kDa抗原对11份Q热患者血清、11份斑疹伤寒患者血清、13份斑点热患者血清的反应阳性率分别有27％、18％、23％，对r56 kDa抗原分别为27％、0％、8％，对r58 kDa抗原分别为18％、18％、23％。这些结果显示这3个重组蛋白抗原均有识别恙虫病东方体感染血清的良好特异性和敏感性，用这3种重组蛋白抗原建立的ELISA将为我国恙虫病血清学诊断提供新的实用方法。

关键词：恙虫病东方体恙虫病外膜蛋白酶联免疫吸附试验

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基于上转发光免疫层析技术的鼠疫耶尔森菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌快速检测方法研究与对比评价

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中华预防医学杂志 2015年第1期49卷 3-8页

作者：李春凤张平平王晓英刘晓赵勇孙崇云王成彬杨瑞馥周蕾解放军总医院临床检验科北京100853 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室海军总医院内分泌科重庆医科大学公共卫生与管理学院

目的研制基于上转发光免疫层析技术（UPT-LF）检测鼠疫耶尔森菌（简称鼠疫菌）、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的试纸，与BioThreatAlert免疫层析（BTA）试纸的检测和操作性能进行对比。方法以上转发光纳米颗粒作为生物示踪物，采用双抗体夹心... 详细信息

目的研制基于上转发光免疫层析技术（UPT-LF）检测鼠疫耶尔森菌（简称鼠疫菌）、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的试纸，与BioThreatAlert免疫层析（BTA）试纸的检测和操作性能进行对比。方法以上转发光纳米颗粒作为生物示踪物，采用双抗体夹心模式分别研制检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的***试纸。分别配制10^10、10^9、10^8、10^7、10^6、10^5、0CFU／ml系列浓度的鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌标准品以及10^9CFU／ml系列浓度的27种特异性评价菌株菌液，采用UPT-LF试纸对其进行检测，对3种UPT-LF试纸的敏感性、精密性、线性和特异性进行分析评价。配制模拟阳性样品，分别采用uPT-LF和BTA试纸对10^7、10^6、10^5、0CFU／ml系列浓度的标准品以及模拟阳性样品进行检测，比较UPT-LF和BTA试纸的检测时间、敏感性以及鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的检出率。结果鼠疫菌UPT—LF、炭疽杆菌芽孢uPrr—LF、布鲁菌UPT-LF试纸的敏感性均达到10^5CFU／ml，各系列浓度检测带信号／质控带信号（T／C）值的变异系数均≤15％，lg[T／C值-临界值（cut—off值）]与lg（标准品浓度）的相关系数分别为0．996、0．998、0．999（F=1647．57、743．51、1822．17，P值均〈0．001）。鼠疫菌UPT-LF和布鲁菌UPT-LF试纸检测特异性评价菌株时，均无非特异性交叉反应，炭疽杆菌芽孢UPT—LF试纸检测枯草芽孢杆菌分离株2#芽孢、蜡样芽孢杆菌分离株1#芽孢存在非特异交叉反应，检测其他特异性评价菌株均无非特异性交叉反应。UPT-LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌样品的时间分别为33、36、37min，BTA为115、115、111min；UPT-LF和BTA试纸检测0CFU／ml标准品的阴性率均为5／5；UPT-LF试纸检测炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的敏感性均达到10^5CFU／ml，BTA试纸分别为10^6、10^6、10^5CFU／ml；模拟样品检测中，UPT-LF试纸炭疽杆菌芽孢、鼠疫菌、布鲁菌的检出率均为16／16，BTA试纸分别为7／16、16／16、16／16。结论UPT—LF试纸检测鼠疫菌、炭疽杆菌芽孢、布鲁菌的敏感性较高，特异性、线性和精密性较佳，检测和操作性能较BTA试纸更为优良。

关键词：耶尔森菌鼠疫芽孢杆菌炭疽布鲁杆菌属上转发光技术免疫层析

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基于上转发光免疫层析技术快速定量检测类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立

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中华预防医学杂志 2015年第2期49卷 166-171页

作者：华菲张平平王晓英周蕾赵勇刘晓李春凤杨瑞馥于爱莲泰山医学院病原生物学部泰安271000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室海军总医院内分泌科重庆医科大学公共卫生与管理学院解放军总医院临检科

目的建立能够对类鼻疽伯克霍尔德菌（类鼻疽菌）进行现场快速定量检测的上转发光免疫层析（Bps—UPT-LF）方法。方法以上转发光材料（UCP）作为标记物，采用双抗体夹心法制备用于类鼻疽菌检测的Bps—UPT—LF试纸。采用分别由类鼻疽菌及... 详细信息

目的建立能够对类鼻疽伯克霍尔德菌（类鼻疽菌）进行现场快速定量检测的上转发光免疫层析（Bps—UPT-LF）方法。方法以上转发光材料（UCP）作为标记物，采用双抗体夹心法制备用于类鼻疽菌检测的Bps—UPT—LF试纸。采用分别由类鼻疽菌及与其近缘或传播途径类似的菌株配制的系列浓度标准菌悬液，评价Bps—UPT—LF试纸条的敏感度、准确度、精密度及特异度等检测性能后，采用纯生物化学试剂和模拟样本分别对其进行单因素干扰因子和实际样品的耐受性评价，通过调整该方法的液体量取体积评价其对操作误差的耐受性。结果整个检测流程20min内可完成，Bps-UPT—LF试纸的敏感度达10^4CFU／ml，定量范围为10^4～10^7CFU／ml，跨越了4个数量级。浓度为10^7和10^8CFU／ml高浓度的类鼻疽菌近缘或传播途径近似菌株对检测特异度均无影响。Bps—UPT—LF试纸除能在高浓度的酸碱物质（pH 1～12）、盐（≤2mol／L的NaCl和KCl的混合物）、黏性物质（≤50g／L的聚乙二醇20000、≤20％的甘油）、生物基质（≥400g／L的牛血清白蛋白、≥80g/L的干酪素）等单因素样本的干扰下保证检测特异度及敏感度外，还能对浓度≥400g／L的奶粉、面粉、果珍、新鲜和腐败脏器以及浓度≤200g／L的腻子粉、蔗糖、味精和土壤等各种动物、环境、粉末之类的实际样本进行直接检测。-50％～200％的样品体积偏差、-22％-44％样品处理液体积偏差、-30％～30％的上样混合物体积偏差等操作误差对检测特异度和敏感度无影响。结论本研究建立的基于Bps—UPT—LF技术检测类鼻疽菌的方法从检测性能、耐受性等方面均可满足自然疫源地监测和生物反恐对类鼻疽菌进行现场快速定量检测的需求。

关键词：免疫测定伯霍尔德杆菌类鼻疽敏感性与特异性样本耐受性操作耐受性上转发光技术

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贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白抗原包被酶联免疫吸附试验的特异性和敏感性分析

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中国人兽共患病学报 2015年第12期31卷 1111-1115,1119页

作者：汪鹏程熊小路焦俊龚文平杨小梅温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军第105医院检验科合肥230031

目的使用贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白作为包被抗原的酶联免疫吸附试验用于血清学检测的特异性和敏感性分析。方法本研究建立由贝氏柯克斯体的Com1、GroEL、Mip、OmpH、RplL重组表面蛋白抗原分别包被的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,然... 详细信息

目的使用贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白作为包被抗原的酶联免疫吸附试验用于血清学检测的特异性和敏感性分析。方法本研究建立由贝氏柯克斯体的Com1、GroEL、Mip、OmpH、RplL重组表面蛋白抗原分别包被的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,然后分别检测贝氏柯克斯体实验感染小鼠血清和Q热患者血清中IgG特异性抗体。结果 8份贝氏柯克斯体感染小鼠血清中除1份血清与RplL反应为阴性外其它均为阳性;11份Q热患者血清中除1份血清与RplL、1份血清与OmpH反应为阴性外,其它血清反应均为阳性。将这5种重组蛋白分别与莫氏立克次体、黑龙江立克次体、恙虫病东方体实验感染小鼠血清反应,除1份黑龙江立克次体感染小鼠血清与GroEL反应为阳性外,其它血清反应均为阴性。另外,Com1对斑疹伤寒、斑点热、恙虫病患者血清的阳性反应率平均为22.2%,GroEL为25.0%,Mip为25.0%,OmpH为25.0%,RplL为13.9%。结论这些结果证明这5种重组蛋白抗原均可被贝氏柯克斯体感染血清所识别。所建立的ELISA方法具有良好特异性和敏感性,可用作Q热血清学诊断。

关键词：贝氏柯克斯体 Q热表面蛋白酶联免疫吸附试验

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