检索结果-内蒙古大学图书馆

空军军医大学学报 2025年

作者：李幸魏振龙杨世超宋慕格马智慧高玉海王永刚陈克明兰州理工大学生命科学与工程学院解放军联勤保障部队第九四〇医院基础医学实验室甘肃省干细胞与基因药物重点实验室

目的探讨局部使用松酯醇二葡萄糖苷（PDG）纤维蛋白复合物加速骨缺损修复机制。方法将45只SPF级的Wistar大鼠，随机分为三组，空白组（空载，n=15）；对照组（纤维蛋白原凝血酶复合物，n=15）；实验组（PDG纤维蛋白原复合物，n=15）... 详细信息

目的探讨局部使用松酯醇二葡萄糖苷（PDG）纤维蛋白复合物加速骨缺损修复机制。方法将45只SPF级的Wistar大鼠，随机分为三组，空白组（空载，n=15）；对照组（纤维蛋白原凝血酶复合物，n=15）；实验组（PDG纤维蛋白原复合物，n=15）。所有大鼠进行股骨中段半缺损实验模型，造模过程中分别在骨缺损区域植入相应复合物，术后不再进行给药干预。术后每2周行X射线摄片，观察不同时间段各组骨缺损修复情况。术后第2、4、8周对术侧骨组织进行HE染色，观察不同组之间骨缺损修复情况。术后第2周，通过免疫荧光染色观察各组骨缺损区BMP2在骨生长前期的表达情况。术后第4周，免疫组织化学染色观察各组H型血管的生长情况。术后第8周，通过Micro-CT检测结果观察缺损区域新生骨体积分数和皮质骨厚度；三点弯曲实验观察三点弯曲强度和抗弯强度。结果影像学结果和HE染色结果表明，实验组骨缺损修复速度明显优于空白组和对照组。BMP2免疫荧光结果表明，实验组BMP2表达高于其他两组。免疫组化结果表明实验组的的H型血管表达量高于其他两组。生物力学结果表明，实验组的三点弯曲强度（P<0.05）和抗弯强度（P<0.01）优于其他两组。Micro-CT结果表明实验组的骨皮质厚度（P<0.05）和骨体积分数（P<0.01）均优于其他两组。结论 PDG纤维蛋白复合物通过上调BMP2蛋白表达，促进H型血管生成，从而加速骨缺损的修复。

关键词：松酯醇二葡萄糖苷局部用药骨缺损加速修复 BMP2

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共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察

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生物工程学报 2004年第3期20卷 337-341页

作者：江文正金宁一李子健张立树韩文瑜解放军军需大学全军基因工程重点实验室长春130062

为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示... 详细信息

为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示 ,HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达 ,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性 ,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应 ,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV_1基因工程活载体疫苗奠定了基础。

关键词： HIV-1 gp120 白细胞介素18 鸡痘病毒抗体细胞毒T淋巴细胞

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pVVP3和pVHN核酸疫苗的构建、表达及对肿瘤细胞的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第6期19卷 704-708页

作者：米志强金宁一龚伟薛立娟连海解丽华李萍解放军军需大学解放军基因工程重点实验室长春130062

用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性... 详细信息

用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性 .RT PCR、DNALadder、TUNNEL染色检测VP3基因的表达及表达产物诱导OS732细胞凋亡作用 .酶切鉴定证实成功地构建了两个核酸疫苗 ,并能在真核细胞内表达 .含HN的核酸疫苗pVHN表达后具有血凝活性并致肿瘤细胞表面唾液酸含量降低 (P <0 0 5 ) .pVVP3的转染能导致OS732细胞凋亡 ,凋亡率可达87% .试验结果表明。

关键词：鸡新城疫病毒 HN基因鸡贫血病病毒VP3基因抗肿瘤

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表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因酵母工程菌的构建及表达条件的优化

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第5期22卷 482-484页

作者：江文正金宁一李子健韩文瑜解放军军需大学基因工程重点实验室吉林大学第一医院

目的　构建表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的酵母工程菌 ,并优化表达条件。方法　将gag gp12 0嵌合基因插入到酵母表达载体pHILS1中 ,构建了表达质粒pHILGP。线性化质粒电转化毕赤酵母菌GS115后进行整合 ,通过PCR及表达产物的SDS PAGE和EL... 详细信息

目的　构建表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的酵母工程菌 ,并优化表达条件。方法　将gag gp12 0嵌合基因插入到酵母表达载体pHILS1中 ,构建了表达质粒pHILGP。线性化质粒电转化毕赤酵母菌GS115后进行整合 ,通过PCR及表达产物的SDS PAGE和ELISA等方法筛选阳性酵母工程菌 ,并优化表达条件。结果　成功构建表达融合蛋白的酵母工程菌 ,表达量为 13%左右。表达蛋白能与HIV 1阳性血清发生反应 ,但其相对分子质量 (Mr)比预计计算的值要小。最佳表达条件为 :BMMY培养基 ,85 %溶解氧 ,培养时间 3d ,1%甲醇诱导浓度。结论　表达的融合蛋白具有很好的抗原特异性 ,存在于上清中 ,这有利于目的蛋白的分离纯化。

关键词： gag-gp120嵌合基因 HIV-1 毕赤酵母基因表达核心蛋白gag HIV-1疫苗酵母工程菌

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Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 341-342,345页

作者：江文正金宁一韩文瑜解放军军需大学全军基因工程重点实验室吉林长春130062

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染... 详细信息

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV

关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒 gag-gp120 嵌合基因核酸疫苗

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共表达HIV-1 gag-gp120与白细胞介素6重组鸡痘病毒的筛选

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 267-270页

作者：江文正金宁一李子健张立树邹啸环王铁东解放军军需大学全军基因工程重点实验室长春130062 吉林大学第一医院解放军军需大学中心实验室

目的构建共表达中国株HIV1gaggp120与白细胞介素6(IL6)的重组鸡痘病毒(FPV)。方法分别将HIV1gaggp120基因和IL6基因插入到FPV表达质粒pUTAL复合启动子和单一启动子下游,构建重组FPV表达质粒pUTAGEIL6。利用脂质体法将重组质粒和FPV282E... 详细信息

目的构建共表达中国株HIV1gaggp120与白细胞介素6(IL6)的重组鸡痘病毒(FPV)。方法分别将HIV1gaggp120基因和IL6基因插入到FPV表达质粒pUTAL复合启动子和单一启动子下游,构建重组FPV表达质粒pUTAGEIL6。利用脂质体法将重组质粒和FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞,经BUdR加压筛选,重组病毒分别用SDSPAGE和WesternBolt进行鉴定,观察病毒样粒子的形成和重组病毒在哺乳动物细胞中的表达,并分析其免疫原性。结果阳性重组病毒基因组点膜处有显色斑点,WesternBolt结果显示重组病毒表达了gaggp120嵌合蛋白和IL6,在病毒感染细胞中有反转录病毒样粒子形成,且重组病毒可在哺乳动物细胞中表达目的蛋白。小鼠免疫指标检测表明该重组病毒具有很好的免疫原性。结论成功构建了共表达中国株HIV1gaggp120与IL6的重组FPV,为HIV-1基因工程活载体疫苗和巨分子颗粒化疫苗的制备奠定了基础。

关键词： HIV-1 HIV包膜蛋白质gp120 自细胞介素6 鸡痘病毒 gp120基因重组鸡痘病毒白细胞介素6 gag 共表达筛选

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共表达HIV-1 gag-gp120与IL-6重组鸡痘病毒和核酸疫苗的联合免疫研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第3期24卷 206-208页

作者：江文正金宁一李子健张立树张洪勇解放军军需大学全军基因工程重点实验室吉林大学第一医院

目的　探讨共表达HIV 1gag gp12 0与IL 6重组鸡痘病毒和核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法　以重组鸡痘病毒首免 ,以表达相同抗原的核酸疫苗质粒追加免疫 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果　联合免疫组脾特异... 详细信息

目的　探讨共表达HIV 1gag gp12 0与IL 6重组鸡痘病毒和核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答。方法　以重组鸡痘病毒首免 ,以表达相同抗原的核酸疫苗质粒追加免疫 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果　联合免疫组脾特异性CTL杀伤活性比重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组、鸡痘病毒疫苗株对照组和空白质粒对照组高 ,血清抗体水平显著高于空白质粒对照组和鸡痘病毒疫苗株对照组 ,但与重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组之间差异无显著性。

关键词： HIV-1 白细胞介素-6 重组鸡痘病毒核酸疫苗免疫应答

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共表达中国株HIV-1gp120与hIL-6的重组鸡痘病毒研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第6期23卷 414-417页

作者：江文正金宁一李子健张立树王宏金洪涛解放军军需大学全军基因工程重点实验室长春130062 吉林大学第一医院

目的　构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利... 详细信息

目的　构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利用脂质体法将重组质粒和鸡痘病毒2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞。经BUdR加压筛选 3次后 ,重组病毒分别用PCR、间接免疫荧光试验和Westernblot进行鉴定 ,并进行小鼠免疫研究。结果　重组病毒基因组中可扩增出 1.4kb大小片段 ,重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质 ,表达产物的Westernblot分析表明重组病毒可表达gp12 0和hIL 6蛋白。重组病毒可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答。结论　成功构建了共表达中国株HIV 1gp12 0与hIL 6的重组鸡痘病毒 ,为研制HIV 1基因工程活载体疫苗提供有益的资料。

关键词：重组鸡痘病毒 Ⅰ型人免疫缺陷病毒表面糖蛋白gp120 白细胞介素-6 艾滋病

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HIV-1中国流行株gag与hIL-2在重组痘苗病毒中的共表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

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中国免疫学杂志 2002年第5期18卷 297-300页

作者：王莉馨金宁一王宏伟秦云龙罗坤葛涛江文正金洪涛解放军军需大学研究所解放军基因工程重点实验室长春130062

目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行... 详细信息

目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行株 gag基因、gag和hIL-2基因片段插入到 pJ38载体启动子下游，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒，SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫Balb/c小鼠，进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4+、CD8+ T细胞数目以及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果：获得了重组痘苗病毒 vJ38gag和 vJ38gag-IL-2。与 vJ38-gag相比，vJ38gag-IL-2，具有更好的免疫原性，重组痘苗病毒免疫3次的效果好于重组病毒免疫2次，以2rVV-DNA混合免疫效果最好。结论：重组痘苗病毒vJ38gag和vJ38gag-IL-2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。细胞因子IL-2发挥了免疫佐剂的作用。

关键词： HIV-1 中国流行株gag基因 hIL-2 痘苗病毒表达 DNA疫苗

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HIV-2外膜蛋白在甲醇型酵母Pichia pastoris中的表达与鉴定

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生物化学与生物物理学报 2001年第4期33卷 405-408页

作者：张应玖金宁一王宏伟金洪涛沈家骢吉林大学生命科学学院!长春130023 解放军军需大学基因工程重点实验室!长春130062

为建立用甲醇型酵母Pichiapastoris表达HIV 2 Rod gp10 5的新途径 ,用PCR方法获得HIV 2 Rodgp10 5基因 ,并将其克隆到P .Pastoris分泌型表达载体pHILS1中 ,测序正确后将重组质粒 pHILS1 gp10 5电转化GS115。用PCR法筛选阳性P .Pastoris... 详细信息

为建立用甲醇型酵母Pichiapastoris表达HIV 2 Rod gp10 5的新途径 ,用PCR方法获得HIV 2 Rodgp10 5基因 ,并将其克隆到P .Pastoris分泌型表达载体pHILS1中 ,测序正确后将重组质粒 pHILS1 gp10 5电转化GS115。用PCR法筛选阳性P .Pastoris重组子 ,并用甲醇诱导表达 ,SDS PAGE和Western印迹结果表明 ,与HIV 1不同 ,HIV 2的外膜蛋白 gp10 5能在甲醇型酵母PichiaPastori中诱导表达 ,产物为一 90kD的糖蛋白 ,具有良好的抗原特异性

关键词： HIV-2Rod gp105 Pichia pastoris 表达

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