检索结果-内蒙古大学图书馆

共表达HIV-1中国流行株gp120与IL-18重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性观察

生物工程学报 2004年第3期20卷 337-341页

作者：江文正金宁一李子健张立树韩文瑜解放军军需大学全军基因工程重点实验室长春130062

为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示... 详细信息

为筛选我国的HIV_1疫苗候选株 ,以鸡痘病毒 2 82E4中国疫苗株为载体 ,构建了共表达中国流行株HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18的重组鸡痘病毒 ,并将该重组鸡痘病毒免疫BALB c小鼠 ,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平。结果显示 ,HIV_1外膜蛋白gp12 0和IL_18不但可在重组鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞中表达 ,而且可在重组鸡痘病毒感染的哺乳动物细胞中表达。重组病毒具有良好的免疫原性 ,可诱导小鼠产生特异性抗体和脾特异性CTL反应 ,且IL_18发挥了免疫佐剂的作用。本研究结果为制备安全、有效的HIV_1基因工程活载体疫苗奠定了基础。

关键词： HIV-1 gp120 白细胞介素18 鸡痘病毒抗体细胞毒T淋巴细胞

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Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 341-342,345页

作者：江文正金宁一韩文瑜解放军军需大学全军基因工程重点实验室吉林长春130062

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染... 详细信息

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV

关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒 gag-gp120 嵌合基因核酸疫苗

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pVVP3和pVHN核酸疫苗的构建、表达及对肿瘤细胞的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第6期19卷 704-708页

作者：米志强金宁一龚伟薛立娟连海解丽华李萍解放军军需大学解放军基因工程重点实验室长春130062

用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性... 详细信息

用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性 .RT PCR、DNALadder、TUNNEL染色检测VP3基因的表达及表达产物诱导OS732细胞凋亡作用 .酶切鉴定证实成功地构建了两个核酸疫苗 ,并能在真核细胞内表达 .含HN的核酸疫苗pVHN表达后具有血凝活性并致肿瘤细胞表面唾液酸含量降低 (P <0 0 5 ) .pVVP3的转染能导致OS732细胞凋亡 ,凋亡率可达87% .试验结果表明。

关键词：鸡新城疫病毒 HN基因鸡贫血病病毒VP3基因抗肿瘤

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共表达HIV-1 gag-gp120与白细胞介素6重组鸡痘病毒的筛选

引用

中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 267-270页

作者：江文正金宁一李子健张立树邹啸环王铁东解放军军需大学全军基因工程重点实验室长春130062 吉林大学第一医院解放军军需大学中心实验室

目的构建共表达中国株HIV1gaggp120与白细胞介素6(IL6)的重组鸡痘病毒(FPV)。方法分别将HIV1gaggp120基因和IL6基因插入到FPV表达质粒pUTAL复合启动子和单一启动子下游,构建重组FPV表达质粒pUTAGEIL6。利用脂质体法将重组质粒和FPV282E... 详细信息

目的构建共表达中国株HIV1gaggp120与白细胞介素6(IL6)的重组鸡痘病毒(FPV)。方法分别将HIV1gaggp120基因和IL6基因插入到FPV表达质粒pUTAL复合启动子和单一启动子下游,构建重组FPV表达质粒pUTAGEIL6。利用脂质体法将重组质粒和FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞,经BUdR加压筛选,重组病毒分别用SDSPAGE和WesternBolt进行鉴定,观察病毒样粒子的形成和重组病毒在哺乳动物细胞中的表达,并分析其免疫原性。结果阳性重组病毒基因组点膜处有显色斑点,WesternBolt结果显示重组病毒表达了gaggp120嵌合蛋白和IL6,在病毒感染细胞中有反转录病毒样粒子形成,且重组病毒可在哺乳动物细胞中表达目的蛋白。小鼠免疫指标检测表明该重组病毒具有很好的免疫原性。结论成功构建了共表达中国株HIV1gaggp120与IL6的重组FPV,为HIV-1基因工程活载体疫苗和巨分子颗粒化疫苗的制备奠定了基础。

关键词： HIV-1 HIV包膜蛋白质gp120 自细胞介素6 鸡痘病毒 gp120基因重组鸡痘病毒白细胞介素6 gag 共表达筛选

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HIV-2外膜蛋白在甲醇型酵母Pichia pastoris中的表达与鉴定

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生物化学与生物物理学报 2001年第4期33卷 405-408页

作者：张应玖金宁一王宏伟金洪涛沈家骢吉林大学生命科学学院!长春130023 解放军军需大学基因工程重点实验室!长春130062

为建立用甲醇型酵母Pichiapastoris表达HIV 2 Rod gp10 5的新途径 ,用PCR方法获得HIV 2 Rodgp10 5基因 ,并将其克隆到P .Pastoris分泌型表达载体pHILS1中 ,测序正确后将重组质粒 pHILS1 gp10 5电转化GS115。用PCR法筛选阳性P .Pastoris... 详细信息

为建立用甲醇型酵母Pichiapastoris表达HIV 2 Rod gp10 5的新途径 ,用PCR方法获得HIV 2 Rodgp10 5基因 ,并将其克隆到P .Pastoris分泌型表达载体pHILS1中 ,测序正确后将重组质粒 pHILS1 gp10 5电转化GS115。用PCR法筛选阳性P .Pastoris重组子 ,并用甲醇诱导表达 ,SDS PAGE和Western印迹结果表明 ,与HIV 1不同 ,HIV 2的外膜蛋白 gp10 5能在甲醇型酵母PichiaPastori中诱导表达 ,产物为一 90kD的糖蛋白 ,具有良好的抗原特异性

关键词： HIV-2Rod gp105 Pichia pastoris 表达

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共表达中国株HIV-1gp120与hIL-6的重组鸡痘病毒研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第6期23卷 414-417页

作者：江文正金宁一李子健张立树王宏金洪涛解放军军需大学全军基因工程重点实验室长春130062 吉林大学第一医院

目的　构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利... 详细信息

目的　构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利用脂质体法将重组质粒和鸡痘病毒2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞。经BUdR加压筛选 3次后 ,重组病毒分别用PCR、间接免疫荧光试验和Westernblot进行鉴定 ,并进行小鼠免疫研究。结果　重组病毒基因组中可扩增出 1.4kb大小片段 ,重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质 ,表达产物的Westernblot分析表明重组病毒可表达gp12 0和hIL 6蛋白。重组病毒可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答。结论　成功构建了共表达中国株HIV 1gp12 0与hIL 6的重组鸡痘病毒 ,为研制HIV 1基因工程活载体疫苗提供有益的资料。

关键词：重组鸡痘病毒 Ⅰ型人免疫缺陷病毒表面糖蛋白gp120 白细胞介素-6 艾滋病

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HIV-1中国流行株gag与hIL-2在重组痘苗病毒中的共表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

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中国免疫学杂志 2002年第5期18卷 297-300页

作者：王莉馨金宁一王宏伟秦云龙罗坤葛涛江文正金洪涛解放军军需大学研究所解放军基因工程重点实验室长春130062

目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行... 详细信息

目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行株 gag基因、gag和hIL-2基因片段插入到 pJ38载体启动子下游，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒，SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫Balb/c小鼠，进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4+、CD8+ T细胞数目以及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果：获得了重组痘苗病毒 vJ38gag和 vJ38gag-IL-2。与 vJ38-gag相比，vJ38gag-IL-2，具有更好的免疫原性，重组痘苗病毒免疫3次的效果好于重组病毒免疫2次，以2rVV-DNA混合免疫效果最好。结论：重组痘苗病毒vJ38gag和vJ38gag-IL-2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。细胞因子IL-2发挥了免疫佐剂的作用。

关键词： HIV-1 中国流行株gag基因 hIL-2 痘苗病毒表达 DNA疫苗

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口蹄疫病毒二价DNA疫苗的构建及实验免疫研究

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高技术通讯 2004年第5期14卷 19-22页

作者：尹革芬金宁一张洪勇郑敏李昌葛淑敏秦晓冰解放军军需大学解放军基因工程重点实验室，长春130062

通过PCR方法从本室已构建的克隆载体pGEMT-P1-2A获得O型口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1基因，以基因突变获得A型VP1基因。将这两种血清型的VP1基因串联后连接到真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游，构建成口蹄疫二价核酸疫苗pVAX1-OA。经We... 详细信息

通过PCR方法从本室已构建的克隆载体pGEMT-P1-2A获得O型口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1基因，以基因突变获得A型VP1基因。将这两种血清型的VP1基因串联后连接到真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游，构建成口蹄疫二价核酸疫苗pVAX1-OA。经Western blot和IFA检测，目的蛋白在HeLa细胞中获得正确表达。动物实验表明，免疫小鼠T淋巴细胞明显增殖，特异性CTL杀伤活性较对照组显著提高；血清抗体能分别与O型和A型抗原反应，抗体效价均高于空白对照组，但较灭活苗低。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因核酸疫苗 CTL活性抗体效价免疫指标检测

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共表达VP3与hIL-18基因真核重组质粒的构建及对人结肠癌细胞的影响

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高技术通讯 2003年第9期13卷 43-46页

作者：金宁一连海米志强李肖徐敬龙金洪涛解丽华李萍解放军军需大学解放军基因工程重点实验室长春130062

先将鸡贫血病毒VP3基因插入真核表达载体pVAX1的多克隆位点,再将pIRES1载体上的IRES启动子及新霉素基因一同切下插入pVAX1的VP3基因下游,然后切下新霉素基因,将hIL-18基因插入其中,构建成pVVP3IL-18,将pVVP3IL-18转染Hela细胞。间接免... 详细信息

先将鸡贫血病毒VP3基因插入真核表达载体pVAX1的多克隆位点,再将pIRES1载体上的IRES启动子及新霉素基因一同切下插入pVAX1的VP3基因下游,然后切下新霉素基因,将hIL-18基因插入其中,构建成pVVP3IL-18,将pVVP3IL-18转染Hela细胞。间接免疫荧光表明,在细胞膜和细胞浆观察到了特异的黄绿色荧光,证明表达了hIL-18。pVVP3IL-18转染人结肠癌细胞HCT-116后,经AO/EB染色及电镜观察,可见大量细胞凋亡。说明真核重组质粒pVVP3IL-18可在HeLa细胞中表达,并可在体外诱导人结肠癌细胞HCT-116凋亡。

关键词：鸡贫血病毒真核表达载体 VP3 hIL-18 IRES启动子 HeLa细胞结肠癌细胞凋亡素真核重组质粒

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H_5N_1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析

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中国预防兽医学报 2004年第6期26卷 436-438页

作者：王振国金宁一马鸣潇金扩世张洪勇尹革芬葛淑敏解放军军需大学研究所解放军基因工程重点实验室吉林长春130062

用RT＿PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA。将cDNA克隆于pMD18＿T载体,并对其进行测序。测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸。将其... 详细信息

用RT＿PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA。将cDNA克隆于pMD18＿T载体,并对其进行测序。测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸。将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92 5%～95 9%,编码的氨基酸同源性为97 0%～98 4%。本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系。

关键词： RT-PCR 禽流感病毒 NP基因分子进化分析

来源：评论

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