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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：鲁会军金宁一郑敏韩松张洪勇李昌金扩世解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室解放军军需大学军事兽医研究所解放军基因工程重点实验室

合成A型口蹄疫病毒三个亚洲流行株VP1基因的五个抗原表位,并克隆到pMD18-T载体上,构建出A型VP1基因片段(VP1A)。然后,将VP1A基因分别连接到两种原核表达载体上,构建了重组质粒pETCKS-VP1A及pET28a-VP1A,转入BL21菌中进行原核表达。SDS-P... 详细信息

合成A型口蹄疫病毒三个亚洲流行株VP1基因的五个抗原表位,并克隆到pMD18-T载体上,构建出A型VP1基因片段(VP1A)。然后,将VP1A基因分别连接到两种原核表达载体上,构建了重组质粒pETCKS-VP1A及pET28a-VP1A,转入BL21菌中进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,VP1A基因在两种表达系统中均高效表达。最后,对表达的两种蛋白通过包涵体及切胶纯化的方法进行纯化,获得了高纯度的VP1A蛋白。

关键词：口蹄疫 A型 VPlA基因克隆表达

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减蛋综合征病毒(EDSV)pVⅢ蛋白基因的克隆与分析

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中国兽医学报 1997年第4期17卷 409-410页

作者：李茂祥金奇章金钢李虹曾力宇殷震侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室解放军农牧大学军事兽医研究所基因工程全军重点实验室

减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ｐＶⅢ蛋白基因的克隆与分析李茂祥＊金奇章金钢＊李虹曾力宇殷震＊侯云德（中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室，北京１０００００）减蛋综合征病毒（ｅｇｇｄｒｏｐｓｙｎｄｒｏｍ... 详细信息

减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ｐＶⅢ蛋白基因的克隆与分析李茂祥＊金奇章金钢＊李虹曾力宇殷震＊侯云德（中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室，北京１０００００）减蛋综合征病毒（ｅｇｇｄｒｏｐｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）是Ⅲ群禽腺...

关键词：减蛋综合症病毒蛋白基因克隆鸡病

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抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达

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高技术通讯 2004年第11期14卷 38-41页

作者：王宏金宁一金洪涛张立树江文正徐一鸣连海中国人民解放军军需大学军事兽医研究所全军基因工程重点实验室，长春130062

人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因，将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT，并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—S... 详细信息

人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因，将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT，并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120，经条件优化，pBV—120和pBV—SL120分别在*** BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达，表达量分别占菌体总蛋白的27．673％和32．519％。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。

关键词： gp120 原核单链抗体 HIV—1 抗HIV-1 基因 BV 密码子表达载体构建融合蛋白

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共表达HIV-1 gp120与IFN-α重组鸡痘病毒诱导特异性CTL的初步研究

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中国免疫学杂志 2005年第4期21卷 254-256页

作者：江文正金宁一李子健张立树金洪涛解放军军事医学科学院基因工程重点实验室长春130062 吉林大学第一医院长春130062

目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为... 详细信息

目的:探讨共表达HIV -1gp12 0与IFN- α重组鸡痘病毒诱导小鼠产生特异性的CTL杀伤活性。方法:将重组鸡痘病毒经肌肉注射免疫BALB c小鼠后,制备小鼠脾淋巴细胞悬液。以免疫小鼠的脾淋巴细胞为效应细胞,以表达HIV- 1结构蛋白的P815细胞为靶细胞,用乳酸脱氢酶释放法测定免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性。结果:重组病毒可有效地诱导特异性CTL的产生,且重组病毒免疫组小鼠脾特异性CTL对靶细胞的杀伤活性显著高于FPV对照组(P <0 .0 1)和PBS对照组(P <0. 0 1)。结论:共表达HIV- 1gp12 0和IFN -α的重组鸡痘病毒可激发强烈的细胞免疫,可作为我国HIV- 1疫苗候选株。

关键词： HIV-1 gp120 重组鸡痘病毒细胞毒性T淋巴细胞

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中国流行株HIV-1Gag蛋白在重组鸡痘病毒的表达及鉴定

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中国生物制品学杂志 2001年第3期14卷 132-135页

作者：罗坤金宁一郭志儒方厚华郭焱秦云龙安汝国邵一鸣殷震吉林大学生物工程研究所解放军军需大学研究所解放军基因工程实验室长春130062

目的以鸡痘病毒为载体，表达ＨＩＶ－１　Ｇａｇ蛋白，进而研制ＡＩＤＳ疫苗。方法以鸡痘病毒２８２Ｅ４株非必需区ＴＫ基因为侧翼，插入ＶＶ突变型Ｐ７．５串联启动子和牛痘病毒Ａ包涵体晚期启动子与２０个串联的突变型早期痘苗病... 详细信息

目的以鸡痘病毒为载体，表达ＨＩＶ－１　Ｇａｇ蛋白，进而研制ＡＩＤＳ疫苗。方法以鸡痘病毒２８２Ｅ４株非必需区ＴＫ基因为侧翼，插入ＶＶ突变型Ｐ７．５串联启动子和牛痘病毒Ａ包涵体晚期启动子与２０个串联的突变型早期痘苗病毒Ｐ７．５启动子组成复合启动子及ＬａｃＺ报告基因构建重组表达质粒ｐＵＴＡＬ。在ＡＴ１－Ｐ７．５复合启动子下游，插入编码中国流行株ＨＩＶ－１　Ｇａｇ基因（Ｂ亚型），构建了重组表达质粒ｐＵＴＡＬ－Ｇａｇ。重组质粒Ｇａｇ与ＦＰＶ共转染ＣＥＦ细胞，进行同源重组。通过ＢＵｄＲ加压筛选，Ｘ－ｇａｌ染色，获得重组鸡痘病毒ｖＵＴＡＬＧ，用于感染ＢＨＫ细胞并免疫小鼠。结果　经Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测，重组病毒表达了Ｇａｇ蛋白相对分子质量分别为５５０００、４８０００、２４０００和１７０００，为Ｇａｇ蛋白的Ｐ５５、Ｐ４８、Ｐ２４和Ｐ１７蛋白。重组病毒免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。结论　所重组的病毒成功地表达了目的蛋白并进行了正确加工。

关键词： HIV-1 核心蛋白Gag 重组鸡痘病毒表达鉴定

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链重叠PCR构建抗HIV免疫毒素及其表达与鉴定

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免疫学杂志 2007年第1期23卷 94-96页

作者：金洪涛金宁一李臻李昌付延军王宏吉林大学畜牧兽医学院解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室长春130062 解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室暨南大学生命科学技术学院

目的提高抗HIV免疫毒素DT-ScFv原核表达的可溶性与生物活性。方法利用链重叠PCR融合的方法,构建了免疫毒素DT-ScFv,二者之间添加了connector序列,免疫毒素基因PCR连接测序以后,将其克隆入pET28a质粒,在BL21(DE3)工程菌中诱导表达,通过... 详细信息

目的提高抗HIV免疫毒素DT-ScFv原核表达的可溶性与生物活性。方法利用链重叠PCR融合的方法,构建了免疫毒素DT-ScFv,二者之间添加了connector序列,免疫毒素基因PCR连接测序以后,将其克隆入pET28a质粒,在BL21(DE3)工程菌中诱导表达,通过免疫印迹鉴定表达的重组蛋白,并通过与表达HIV-1gp120的靶细胞的间接免疫荧光实验,验证免疫毒素的细胞识别结合能力。结果本研究成功地构建了免疫毒素DT-ScFv,经原核表达证明目的蛋白以部分可溶的形式存在于表达菌中,添加的connector序列有助于DT-ScFv在细胞中获得正确折叠,重组免疫毒素能与表达gp120的细胞发生特异性的识别结合。结论利用链重叠PCR融合的方法,添加connector序列,有助于提高免疫毒素表达的可溶性与生物活性。本研究对抗HIV免疫毒素的活性研究与应用研究具有重要的意义。

关键词：免疫毒素链重叠PCR 原核表达

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HIV-2gp105基因5′区对其在Pichia pastoris中表达的影响

HIV-2gp105基因5′区对其在Pichia pastoris中表达的影响

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：张应玖金宁一王宏伟金洪涛江文正沈家骢吉林大学生命科学学院解放军军需大学基因工程重点实验室解放军军需大学基因工程重点实验室解放军军需大学基因工程重点实验室解放军军需大学基因工程重点实验室吉林大学生命科学学院

HIV-2(人免疫缺陷病毒Ⅱ型,Human immunodeficiency virus type 2)外膜蛋白gp105是病毒的主要抗原,能诱导机体产生中和抗体和CTL反应,是研制艾滋病疫苗的主要对象.天然的gp105是一种高度糖基化的蛋白,而毕赤酵母(Pichia pastoris)表达... 详细信息

HIV-2(人免疫缺陷病毒Ⅱ型,Human immunodeficiency virus type 2)外膜蛋白gp105是病毒的主要抗原,能诱导机体产生中和抗体和CTL反应,是研制艾滋病疫苗的主要对象.天然的gp105是一种高度糖基化的蛋白,而毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统对产物的糖基化形式与gp105相同.分析发现HIV-2gp105的N-端区不存在任何功能位点,但gp105 cDNA的前28个密码子中在靠近5’端却存在二个酵母罕用密码

关键词： HIV-2gp105 Pichia pastoris 毕赤酵母

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含第1内含子的猪生长激素cDNA基因的构建

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中国兽医学报 2000年第4期20卷 347-351页

作者：仲飞刘维全孙丽翠张玉国刘朋朋齐顺章中国农业大学生物学院北京100094 解放军军需大学基因工程实验室吉林长春130062

以 PCR方法扩增了猪生长激素 ( p GH)基因的第 1内含子 ,经测序表明 ,扩增的 p GH基因第 1内含子的序列与 Vize发表的序列存在 6个碱基的差异 ,同源性达 97.5%,说明 p GH基因第 1内含子具有多态性。此外 ,还发现此内含子存在有转录因子 ... 详细信息

以 PCR方法扩增了猪生长激素 ( p GH)基因的第 1内含子 ,经测序表明 ,扩增的 p GH基因第 1内含子的序列与 Vize发表的序列存在 6个碱基的差异 ,同源性达 97.5%,说明 p GH基因第 1内含子具有多态性。此外 ,还发现此内含子存在有转录因子 ATF的结合位点。利用第 2外显子的 Hinf 位点 ,采用将 3个 DNA片段一步连接的方法 ,将扩增的第 1内含子插入到 p GHc DNA的正确位置上 ,从而构建出含第 1内含子的p GHc DNA。

关键词：猪生长激素基因 cDNA 病毒载体

来源：评论

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减蛋综合征病毒全基因组DNA文库的构建及物理图谱分析

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中国预防兽医学报 1999年第4期21卷 284-286页

作者：李茂祥金奇章金钢曾力宇李红殷震侯云德中国预防科学院病毒基因工程国家重点实验室北京100052 解放军农牧大学兽医研究所基因工程实验室长春130052

　ＥＤＳＶＡＡ２株纯化ＤＮＡ经Ｈｉｎｄ Ⅲ、ＰｓｔⅠ和Ｓｐｈ Ⅰ水解后，分别提取ＤＮＡ片段并克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ（＋）和ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）载体，构建了ＥＤＳＶ全... 详细信息

　ＥＤＳＶＡＡ２株纯化ＤＮＡ经Ｈｉｎｄ Ⅲ、ＰｓｔⅠ和Ｓｐｈ Ⅰ水解后，分别提取ＤＮＡ片段并克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ（＋）和ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）载体，构建了ＥＤＳＶ全基因文库。根据ＥＤＳＶＤＮＡ片段和基因组ＤＮＡ电泳迁移率计算，ＥＤＳＶ基因组大小为３２９ｋｂ，通过克隆片段酶谱鉴定，杂交建立了ＥＤＳＶ限制性内切酶Ｈｉｎｄ Ⅲ、Ｐｓｔ Ⅰ和Ｓｐｈ Ⅰ的物理图谱。

关键词：减蛋综合征病毒物理图谱 DNA文库基因组

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新型疫苗研究

新型疫苗研究

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第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：金宁一解放军军需大学研究所病毒室解放军基因工程重点实验室

疫苗是预防人与动物疾病尤其是传染性疾病的重要工具。迄今为止,人们几乎对所有的人与动物的传染性疾病都研制、开发、或应用了疫苗加以防制,并由病毒和细菌疫苗,发展到寄生虫疫苗、肿瘤疫苗、避孕疫苗,由预防性疫苗发展到治疗性疫苗。... 详细信息

疫苗是预防人与动物疾病尤其是传染性疾病的重要工具。迄今为止,人们几乎对所有的人与动物的传染性疾病都研制、开发、或应用了疫苗加以防制,并由病毒和细菌疫苗,发展到寄生虫疫苗、肿瘤疫苗、避孕疫苗,由预防性疫苗发展到治疗性疫苗。但仍有许多古老的(口蹄疫)、新出现的传染病(如艾滋病、埃博拉)或自然疫源性疾病由于没有十分有效的疫苗,而无法有效控制其流行。因此,应用现代生物技术研制新型疫苗、改进和提高现有疫苗的质量是当前的迫切任务。

关键词：疫苗研究基因缺失疫苗免疫保护力重组载体疫苗免疫原性核酸疫苗合成肽疫苗亚单位疫苗病原微生物火鸡疱疹病毒痘病毒基因缺失株传统疫苗免疫效果抗独特型抗体疫苗病原体

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