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第九届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议暨第二届中欧创面修复学术会议

作者：李基伟张翠萍付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

目的：检测大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stromal cells,MSC)在促进局部难愈创面方面的影响,筛选MSC分泌的关键因子,过表达生长因子,以期为难愈性创面的治疗提供一种新的思路。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞因子难愈创面

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人外分泌汗腺细胞分离方法的优化

人外分泌汗腺细胞分离方法的优化

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第九届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议暨第二届中欧创面修复学术会议

作者：赵换军张翠萍付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

目的：优化人体外外分泌汗腺细胞分离的方法,以高效地提取原代汗腺细胞.方法：新鲜的皮肤组织标本经过D-hank's液漂洗后,剪成组织微粒(大小约1mm3),A组使用胰蛋白酶-EDTA(胰蛋白酶0.25％,EDTA 0.53mM)和胶原酶Ⅱ型(2mg/ml)体积分数1... 详细信息

目的：优化人体外外分泌汗腺细胞分离的方法,以高效地提取原代汗腺细胞.方法：新鲜的皮肤组织标本经过D-hank's液漂洗后,剪成组织微粒(大小约1mm3),A组使用胰蛋白酶-EDTA(胰蛋白酶0.25％,EDTA 0.53mM)和胶原酶Ⅱ型(2mg/ml)体积分数1∶1混合的方法;B组采用传统消化方法,即胶原酶Ⅱ型(2mg/ml);C组采用胰蛋白酶-EDTA(胰蛋白酶0.25％,EDTA 0.53mM)消化的方法,三组同时置于37℃、5％CO2饱和湿度的恒温培养箱内消化,比较这三种方法处理后游离汗腺细胞团出现所需的时间.

关键词：汗腺细胞胰蛋白酶 Ⅱ型胶原酶分离培养

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脐带间充质干细胞调节炎性微环境干预急性肾损伤的效应研究

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感染．炎症．修复 2014年第2期15卷 79-83,F0002页

作者：鲁刚马奎付小兵北京军区总医院烧伤整形科北京100700 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

目的：观察移植外源性脐带间充质干细胞（UC-MSCs）对小鼠急性肾损伤（AKI）炎性微环境的影响及对肾组织的修复作用。方法：分离培养孕后期C57BL/6雌性小鼠的UC-MSCs。另取雌性C57BL/6小鼠60只,随机分为正常对照组、AKI组、AKI＋MSC移植... 详细信息

目的：观察移植外源性脐带间充质干细胞（UC-MSCs）对小鼠急性肾损伤（AKI）炎性微环境的影响及对肾组织的修复作用。方法：分离培养孕后期C57BL/6雌性小鼠的UC-MSCs。另取雌性C57BL/6小鼠60只,随机分为正常对照组、AKI组、AKI＋MSC移植组,每组20只。AKI组和AKI＋MSC组用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂45 min复制AKI模型,并于模型制备成功时腹腔内注射生理盐水0.2 ml（AKI组）或1＆#215;106 UC-MSCs（AKI＋MSC组）。于第2天和第7天每组活杀10只小鼠,取眼球血及肾组织,检测血尿素氮（BUN）及血肌酐（SCr）水平；肾组织行HE染色,观察组织病理学变化；ELISA法检测肾组织匀浆中促炎因子IL-1β、TNF-α、干扰素-1（IFN-1）及抗炎因子碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、IL-10、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）的水平。结果：2 d时AKI组小鼠肾小管上皮细胞肿胀,胞质空泡性变,BUN和Cr均显著高于正常对照组,提示造模成功后肾小管受损严重,7 d稍有减轻；AKI＋MSC移植组小鼠肾功能在2 d时较AKI组有所恢复,肾组织病理学变化明显减轻（P＜0.01）,7 d基本恢复正常。ELISA结果显示,与正常对照组比较, AKI组各时间点肾组织匀浆中促炎因子的水平均显著升高（P＜0.01或P＜0.05）,抗炎因子的水平均显著降低（P＜0.01或P＜0.05）,2 d较7 d更加明显。各时间点AKI＋MSC组抗炎因子的水平较AKI组明显升高,促炎因子的水平明显下降,但与正常对照组比较差异均有显著性（P＜0.01或P＜0.05）,7d较2 d改善更明显。结论：MSC可通过减轻AKI肾组织炎症反应,调节损伤肾脏组织微环境中的细胞因子水平发挥保护肾损害的修复作用。

关键词：肾损伤,急性脐带间充质干细胞炎性微环境细胞因子

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人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞诱导分化的研究

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感染．炎症．修复 2014年第2期15卷 76-78,F0002页

作者：陈艳赵洪良谭志军赵焕军张翠萍付小兵北京军区总医院药理科北京100700 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

目的:观察体外热休克汗腺细胞(SGCs)和人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)共培养体系中BMMSCs的形态和表型变化,为进一步表观遗传学表达谱的检测及汗腺诱导关键转录因子的研究提供实验基础。方法:体外分离、培养、扩增人BM-MSCs和SGCs,成骨和... 详细信息

目的:观察体外热休克汗腺细胞(SGCs)和人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)共培养体系中BMMSCs的形态和表型变化,为进一步表观遗传学表达谱的检测及汗腺诱导关键转录因子的研究提供实验基础。方法:体外分离、培养、扩增人BM-MSCs和SGCs,成骨和成脂诱导分化以鉴定BM—MSCs的分化功能。在Transwell间接共培养体系中,培养的BM-MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs在Transwell板中间接共培养;在Transwell+诱导因子共培养体系中,上室的BM-MSCs培养基中添加了汗腺诱导因子(无汗性外胚叶发育不良蛋白、重组人表皮生长因子和胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠)。监测共培养过程中BM-MSCs的细胞形态变化,免疫荧光法检测诱导后BM-MSCs的表型改变。结果:经与热休克SGCs共培养诱导10 d后,部分BM-MSCs有由长梭形变为扁平状多边形的趋势,且局部细胞间连接紧密成片。BM-MSCs诱导前不表达CEA和CK19;BMMSCs诱导后,Transwell间接共培养体系部分细胞CEA和CKl9表达阳性,Transwell+诱导因子共培养体系CEA和CK19阳性细胞数明显多于Transwell间接共培养体系。结论:热休克汗腺细胞与BM-MSCs在Transwell间接培养以及相关汗腺诱导因子的共培养体系下,BM-MSCs呈现向SGCs诱导分化趋势。

关键词：骨髓间充质干细胞汗腺共培养表型转化

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不同传代次数大鼠骨髓间充质干细胞移植促进糖尿病大鼠创面愈合的研究

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感染．炎症．修复 2014年第3期15卷 148-153,F0002页

作者：赵志力雷永红隋志甫石成方杨蓉娅北京军区总医院全军皮肤损伤修复研究所整形美容中心北京100700 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）在体外培养扩增过程中引起的老化对其修复糖尿病慢性创面功能的影响。方法：从大鼠股骨骨髓中分离培养BMSCs,流式细胞分析仪鉴定细胞表型,成骨、成脂诱导鉴定其分化能力。取第5、15、25、35和45代... 详细信息

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）在体外培养扩增过程中引起的老化对其修复糖尿病慢性创面功能的影响。方法：从大鼠股骨骨髓中分离培养BMSCs,流式细胞分析仪鉴定细胞表型,成骨、成脂诱导鉴定其分化能力。取第5、15、25、35和45代（P5、P15、P25、P35和P45）BMSCs,0.25%的胰酶消化后制备1×10^6/m1单细胞悬液。腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病SD大鼠模型,8周后,在SD大鼠背部左右两侧用打孔器制备直径1.2 cm的圆形创面。将70只糖尿病慢性创面模型大鼠随机分为7组,分别经尾静脉注射1 ml的P5、P15、P25、P35和P45 BMSCs单细胞悬液（1×10^6/m1）,1 ml成纤维细胞（Fb）悬液（1×10^6/m1）和1 ml生理盐水。分别于伤后3、7、14、21 d计算创面愈合率,并取创面组织制备切片,苏木精-伊红（HE）染色,光学显微镜下观察组织病理学变化及血管生成情况。结果：糖尿病SD大鼠创面较正常大鼠创面愈合延迟（P〈0.05）。伤后14 d,各BMSCs移植组与Fb组和生理盐水组比较,创面收缩与再上皮化明显,镜下可见成纤维细胞生长活跃、数量多,各BMSCs移植组间无明显差异。伤后14 d,各BMSCs移植组创面愈合率较Fb组和生理盐水组增加,以P5 BMSCs移植组变化最显著（P〈0.05）。伤后7 d,各BMSCs移植组微血管密度均显著高于Fb组和生理盐水组（P〈0.01）,以P5 BMSCs移植组效果最为显著。结论：全身注射异体BMSCs可促进糖尿病创面愈合。BMSCs在体外长期扩增传代可减少其创面修复能力,其对糖尿病创面的修复作用以P5以内干细胞较好。

关键词：骨髓间充质干细胞创面愈合慢性创面糖尿病

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伏立诺他对50% TBSA Ⅲ度烫伤大鼠脏器功能及血流量的影响

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感染．炎症．修复 2014年第4期15卷 195-198页

作者：郑金光胡森李芳菲张聪高明娟王晓娜姚龙强白晓东武警总医院北京100039 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048 襄阳士官学校门诊部湖北襄阳441118

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他(SAHA)对50%TBSAⅢ度烫伤大鼠器官功能及脏器血流量的影响。方法:雄性SD大鼠48只,体重240~260g,随机分为3组:1单烫组,于100℃水浴中背部浸泡15s、腹部浸泡8s,烫伤后,立即腹腔内注射0.25ml生理盐... 详细信息

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他(SAHA)对50%TBSAⅢ度烫伤大鼠器官功能及脏器血流量的影响。方法:雄性SD大鼠48只,体重240~260g,随机分为3组:1单烫组,于100℃水浴中背部浸泡15s、腹部浸泡8s,烫伤后,立即腹腔内注射0.25ml生理盐水;2SAHA组,烫伤后立即腹腔内注射0.25ml SAHA注射液(7.5mg/kg,溶于4ml生理盐水中);3假烫组,37℃水浴浸泡后腹腔内注射0.25ml生理盐水。于伤后3h和6h采用多普勒血流仪测定肝、肾及小肠黏膜血流量,取腹主动脉血检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)含量、肌酐(Cr)含量、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、神经特异性烯醇化酶(NSE)含量和二胺氧化酶(DAO)活性。结果:伤后3h,SAHA组肝、肾和小肠黏膜血流量显著高于单烫组(P均<0.05);SAHA组6h小肠黏膜血流量也显著高于单烫组(P<0.05)。SAHA组伤后3hCr、NSE含量和DAO活性显著低于单烫组(P均<0.05),伤后6hCK-MB、NSE含量和DAO活性均显著低于单烫组(P均<0.05)。结论:SAHA能改善50%TBSAⅢ度烫伤大鼠器官功能指标以及腹腔脏器血流量,保护重要脏器功能。

关键词：伏立诺他组蛋白去乙酰化酶抑制剂烫伤器官功能血流量

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间充质干细胞用于慢性创面治疗的作用途径及其相关机制

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感染．炎症．修复 2014年第4期15卷 248-250页

作者：谢江帆杨思明尚涛马奎姚斌黄沙付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048 天津医科大学研究生院天津300070

间充质干细胞(MSCs)是一类存在于大多数成体器官中的类成纤维细胞群，在特定条件下能够向不同的谱系细胞分化。Falanga等[1]将 MSCs 与造血细胞共同培养，发现 MSCs可以促进造血干细胞的增殖，提示 MSCs 具有分泌生物活性因子并调节其... 详细信息

间充质干细胞(MSCs)是一类存在于大多数成体器官中的类成纤维细胞群，在特定条件下能够向不同的谱系细胞分化。Falanga等[1]将 MSCs 与造血细胞共同培养，发现 MSCs可以促进造血干细胞的增殖，提示 MSCs 具有分泌生物活性因子并调节其他细胞功能的能力。MSCs 在进入创面或是其他损伤组织时会被激活，起到促进创伤愈合和改善局部缺血的作用。目前 MSCs 作用于创面的机制尚未完全清楚，但MSCs在调节免疫应答和免疫排斥反应方面的功能，以及在促进创面愈合和减少瘢痕形成等方面的重要作用均已得到证实。本文就MSCs治疗皮肤慢性难愈性创面的常用方法及其在细胞及分子水平上可能涉及的作用机制综述如下。

关键词：间充质干细胞免疫排斥反应细胞分化创伤愈合作用途径生物活性因子损伤组织成纤维细胞免疫应

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乌司他丁对致死性烫伤大鼠肺微血管通透性和肺组织含水率的影响

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感染．炎症．修复 2014年第4期15卷 209-212,216页

作者：刘锐曹卫红胡森王树明赵增凯郑金光高明娟王晓娜李宗瑜盛志勇哈尔滨市第五医院烧伤整形科黑龙江哈尔滨150040 空军总医院烧伤整形外科北京100142 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的:研究乌司他丁对50%总体表面积烫伤大鼠炎症介质、肺微血管通透性和肺组织含水率的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为烫伤组和乌司他丁组(n=20),两组均用80℃水浴造成50%总体表面积Ⅲ度烫伤。于烫伤后即刻静脉分别注射生理盐水1ml... 详细信息

目的:研究乌司他丁对50%总体表面积烫伤大鼠炎症介质、肺微血管通透性和肺组织含水率的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为烫伤组和乌司他丁组(n=20),两组均用80℃水浴造成50%总体表面积Ⅲ度烫伤。于烫伤后即刻静脉分别注射生理盐水1ml和乌司他丁40 000U/kg。分别于烫伤后6h、24h采用伊文斯蓝(EB)法测定肺微血管通透性,干/湿重法测定肺组织含水率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织TNF-α、IL-6和IL-8的活性。结果:烫伤后6h、24h乌司他丁组TNF-α、IL-6和IL-8均低于单纯烫伤组,其中烫伤后24h乌司他丁组TNF-α、IL-6和IL-8的变化差异更显著(P<0.01);与单纯烫伤组比较,乌司他丁组肺组织EB含量和含水率均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:乌司他丁能减轻致死性烫伤休克大鼠肺组织炎症水平,抑制血管内皮细胞活化和通透性增加,减少烧伤休克时血容量丢失和补液量,用于烧伤休克的早期治疗和改善存活率有潜在价值。

关键词：乌司他丁肺组织水肿血管通透性

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中国的再生医学与烧伤救治

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中华烧伤杂志 2013年第2期29卷 102-104页

作者：付小兵杨思明解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

再生医学这一名词从提出到引起广泛关注不到20年时间，是生物学和医学领域发展最为迅速且已经初见成效的领域之一。再生医学已经从单纯修复病损组织，发展到使病损组织或器官的解剖结构与功能均恢复到损伤前状态。

关键词：烧伤再生医学干细胞组织工程

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创面治疗新的认识与新技术的转化性应用

创面治疗新的认识与新技术的转化性应用

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第十届全国烧伤救治专题研讨会暨福建省第八次烧伤外科学术研讨会

作者：付小兵 100048 北京解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室

创烧伤是一种最古老的疾病形式，而创面又是贯穿于整个创烧伤治疗的始终，是创烧伤治疗的核心之一。本文重点介绍一些近年来有关创面治疗新的认识和己经应用于创面治疗多种新技术的原理、方法、治疗效果以及临床评价，包括生物治疗、物... 详细信息

创烧伤是一种最古老的疾病形式，而创面又是贯穿于整个创烧伤治疗的始终，是创烧伤治疗的核心之一。本文重点介绍一些近年来有关创面治疗新的认识和己经应用于创面治疗多种新技术的原理、方法、治疗效果以及临床评价，包括生物治疗、物理治疗、药物治疗等。同时，对近年来我国创面治疗中心建设的必要性、可行性以及部分单位建设创面治疗中心所取得的重要成果进行概述。

关键词：创烧伤创面治疗技术创新疗效评价

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