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中国组织工程研究与临床康复 2007年第10期11卷 1801-1804,1811页

作者：康红军卢世璧张莉孙明学袁玫许文静赵斌郭全义解放军总医院骨科研究所北京市100853

目的:观察人脂肪干细胞复合脱细胞软骨基质支架在生物反应器中初步构建组织工程软骨的可行性。方法:实验于2005-04/2006-05在解放军总医院骨科研究所完成。脂肪组织和关节软骨均来自膝关节置换术中切除的组织,并经患者知情同意。关节软... 详细信息

目的:观察人脂肪干细胞复合脱细胞软骨基质支架在生物反应器中初步构建组织工程软骨的可行性。方法:实验于2005-04/2006-05在解放军总医院骨科研究所完成。脂肪组织和关节软骨均来自膝关节置换术中切除的组织,并经患者知情同意。关节软骨冻干后经粉碎机粉碎,过筛,选取25～38μm大小的软骨微粒。在样品中先加入2.5g/L胰蛋白酶,37℃消化24h,再加入1%Triton X-100震荡72h。将软骨微粒和蒸馏水按1∶3的比例混合后滴加在模板中,置入冷冻干燥机冻干后行紫外线交联。紫外线照射8h完成。最后经25kGy 60Co辐照灭菌完成支架制备。取膝关节置换术中切除的髌下脂肪垫,酶消法获得脂肪干细胞,扩增后复合于脱细胞软骨基质制成圆柱状三维支架上(细胞密度5×1010L-1),置于生物反应器中进行诱导培养,同时设静态培养组作为对照,3周后观测大体形态和组织学形态变化,同时进行组织化学(包括番红花O,阿利新蓝染色)和Ⅱ型胶原免疫组织化学分析。结果:生物反应器组诱导培养3周苏木精-伊红染色显示支架结构消失,只有中心区域残存少量支架结构;静态培养组支架结构尚存在,有少量基质分泌。番红花O染色显示生物反应器组细胞外有大量蛋白聚糖沉积,阿利新蓝染色表明有软骨特异性蛋白多糖的聚集;而静态培养组只有部分区域染色且淡于生物反应器组。Ⅰ型胶原免疫组化的结果显示,在生物反应器组细胞能够合成大量软骨细胞特异性胶原成分,而静态培养组呈弱阳性。结论:生物反应器培养明显促进了脂肪干细胞的增殖与软骨分化,是体外构建组织工程软骨的良好方法。

关键词：脂肪干细胞生物反应器支架软骨

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关节软骨细胞外基质源性软骨组织工程取向支架的制备

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第3期13卷 432-436页

作者：姚军卢世壁彭江郭全义张莉黄靖香汪暧媛许文静解放军总医院骨科研究所北京市100037

背景:仿生天然软骨细胞外基质特殊的力学、结构特性和生化成分的软骨组织工程支架具有巨大的应用潜能。目的:观察仿生天然关节软骨细胞外基质的生化和结构特性,探讨关节软骨细胞外基质材料及软骨组织工程取向支架的制备方法,并对其理化... 详细信息

背景:仿生天然软骨细胞外基质特殊的力学、结构特性和生化成分的软骨组织工程支架具有巨大的应用潜能。目的:观察仿生天然关节软骨细胞外基质的生化和结构特性,探讨关节软骨细胞外基质材料及软骨组织工程取向支架的制备方法,并对其理化性质进行检测。设计、时间及地点:组织工程材料支架制备及性能分析的体外实验,于2007-07/2008-07在解放军总医院骨科研究所完成。材料:将新鲜猪关节软骨湿法粉碎,差速离心,收集无细胞的软骨细胞外基质成分。脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶及碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺均为美国Sigma公司产品。方法:对关节软骨细胞外基质材料进行组织学和形态学检测后,用pH3.2的稀盐酸制成质量浓度为20g/L溶液,采用定向结晶及冷冻干燥技术制成关节软骨细胞外基质源性取向支架,再采用物理化学方法交联,同时制备多孔软骨细胞外基质源性非取向支架。主要观察指标:①关节软骨细胞外基质材料的生化组成和形态。②软骨细胞外基质取向支架和非取向支架的表面特征及孔道结构。③取向和非取向软骨细胞外基质支架的孔隙率、吸水膨胀率、力学特性的比较。结果:收集的关节软骨细胞外基质材料中无细胞存在,纤维为纳米尺度,甲苯胺蓝、番红花O、奥新蓝染色及Ⅱ型胶原染色阳性;制备的取向支架具有纵向排列的孔道结构,孔径100～200μm,分布均匀,非取向支架的孔呈海绵样结构;两种支架孔隙率均≥95%,吸水膨胀率均≥96%。取向支架纵向压缩模量和拉伸模量为:(2.02±0.02),(22.10±0.67)MPa,均大于非取向支架,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:天然关节软骨细胞外基质材料与天然关节软骨的生物力学特性相似,可满足软骨组织工程的需要,是一种比较理想的软骨组织工程支架。

关键词：关节软骨细胞外基质定向结晶组织工程取向支架

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人关节软骨脱细胞基质制备实验(英文)

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中国临床康复 2005年第14期9卷 242-243,i009页

作者：张建党卢世璧袁玫黄靖香赵斌孙明学崔雪梅解放军总医院骨科研究所北京市100853

背景:对天然的细胞外基质进行处理,剔除其抗原成分,保留了组织结构的完整性,这种材料具有良好的生物相容性,能为细胞创造尽可能接近体内的培养环境,因此应是组织工程中细胞培养支架的首选。目的:制备人关节软骨脱细胞基质,为进一步研究... 详细信息

背景:对天然的细胞外基质进行处理,剔除其抗原成分,保留了组织结构的完整性,这种材料具有良好的生物相容性,能为细胞创造尽可能接近体内的培养环境,因此应是组织工程中细胞培养支架的首选。目的:制备人关节软骨脱细胞基质,为进一步研究关节软骨基质作为细胞外支架材料提供方法学资料。设计:以骨组织标本为实验对象,单一样本研究。单位:解放军总医院骨科研究所。材料:实验于2004-01/05在解放军总医院骨科研究所完成。材料来自因股骨颈头下型骨折行关节置换而切除的股骨头。方法:切取人关节软骨,剪裁成3.5mm×4.5mm×2.0mm大小共10块,冻干处理12h,采取化学去污剂TritonX-100及DNA酶和RNA酶等试剂制备脱细胞的人关节软骨。用苏木精-伊红、番红O及软骨蛋白聚糖免疫组化染色等方法进行关节软骨脱细胞定性检测。主要观察指标:脱细胞关节软骨的组织学观察以及软骨蛋白聚糖免疫组织化学染色结果。结果:①苏木精-伊红染色、番红O染色均显示细胞陷窝内已无细胞结构。②软骨蛋白聚糖免疫组织化学染色阳性,提示脱细胞关节软骨基质内仍存在软骨蛋白聚糖。结论:人关节软骨冻干后,经去污剂-酶等处理方法可脱去软骨的细胞成分,成功制备人关节软骨脱细胞基质。其中保留的软骨蛋白聚糖可能仍存在原有的耐压特性。

关键词：骨脱细胞基质制备软骨蛋白聚糖股骨颈头下型骨折苏木精-伊红染色免疫组织化学染色解放军总医院关节软骨细胞外支架材料脱细胞基质骨科研究所细胞培养支架 Triton 免疫组化染色细胞外基质生物相容性骨组织标本

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藻酸钙凝胶为载体体外短期培养羊软骨细胞的生物学性状

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中国临床康复 2006年第1期10卷 61-63页

作者：郭全义卢世璧张莉袁玫眭翔许文静解放军总医院骨科研究所北京市100853

目的:观察以海藻酸钠为载体的成年羊软骨细胞移植前体外短期培养的生物学性状。方法:实验于2004-07/2005-11在解放军总医院骨科研究所完成。①取成年山羊关节软骨,酶消化法得到原代软骨细胞,体外培养扩增,选用培养的第2,3代羊关节软骨... 详细信息

目的:观察以海藻酸钠为载体的成年羊软骨细胞移植前体外短期培养的生物学性状。方法:实验于2004-07/2005-11在解放军总医院骨科研究所完成。①取成年山羊关节软骨,酶消化法得到原代软骨细胞,体外培养扩增,选用培养的第2,3代羊关节软骨细胞与12g/L海藻酸钠混合,种植密度为2×109L-1,将102mmol/L氯化钙溶液滴入软骨细胞藻酸钠悬液,形成藻酸钙软骨细胞凝胶,用软骨细胞培养液培养。②3,6,912d,分别取凝胶,测定DNA、蛋白聚糖含量,并行苏木精-伊红、藩红花O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果:①藻酸钙凝胶中细胞的光镜形态学观察:软骨细胞在藻酸钙中呈丛状或球状生长,细胞在整个培养过程维持球形状态。②复合软骨细胞的藻酸钙凝胶的组织形态学及免疫组化测定结果:木精-伊红染色可见随培养时间的延长,细胞群增多变大;藩红花O染色显示软骨细胞周围存在不断增大的橙红染区,提示软骨细胞分泌蛋白聚糖含量持续增加。Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。③软骨细胞藻酸钙凝胶培养过程中DNA及蛋白聚糖含量的测定:随时间的延长,DNA的量逐渐增加,说明藻酸钙中的软骨细胞在不断增殖。藻酸钙中软骨细胞分泌的特异性基质蛋白聚糖随时间的延长而增多,象征着软骨细胞表型的稳定。结论:成年羊软骨细胞在藻酸钙中短期培养生长增殖良好,藻酸钙能保留羊软骨细胞表型,具备植入体内的条件。

关键词：软骨细胞藻酸盐胶原蛋白聚糖类生物学性状藻酸钙凝胶

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先天性胆管囊肿癌变的诊断与治疗

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中华外科杂志 2005年第13期43卷 839-841页

作者：刘全达周宁新黄志强张文智刘贵麟王悦华解放军总医院全军肝胆外科研究所解放军总医院小儿外科

目的探讨先天性胆管囊肿癌变的诊断与治疗方法。方法回顾性分析1993年—2004年解放军总医院收治的185例先天性胆管囊肿患者的临床及病理资料。结果185例中合并癌变27例,癌变率为14.6%。先天性胆管囊肿癌变与年龄密切相关(P<0.001),... 详细信息

目的探讨先天性胆管囊肿癌变的诊断与治疗方法。方法回顾性分析1993年—2004年解放军总医院收治的185例先天性胆管囊肿患者的临床及病理资料。结果185例中合并癌变27例,癌变率为14.6%。先天性胆管囊肿癌变与年龄密切相关(P<0.001),各年龄段癌变率分别为:0～9岁为0%,10～19岁5.1%,20～29岁9.1%,30～39岁16.2%,40～49岁26.7%,50～59岁33.3%,≥60岁50%。6例有胆肠内引流手术史。临床主要表现为上腹疼痛、发热、黄疸和体重下降。诊断方法包括腹部超声、CT、MRI和经内镜逆行胰胆管造影,术前确诊20例,但早期诊断困难。获得根治性切除9例(33.3%)。结论先天性胆管囊肿是一种癌前病变,随年龄增长癌变率急剧增加。儿童期实施完全性囊肿切除是预防胆管囊肿癌变的最有效方法。胆管囊肿癌变病例预后不佳。

关键词：囊肿癌变诊断与治疗经内镜逆行胰胆管造影先天性胆管囊肿解放军总医院 2004年 1993年回顾性分析胆肠内引流根治性切除癌变率治疗方法病理资料 0~9岁各年龄段上腹疼痛主要表现体重下降腹部超声诊断方法

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肝细胞生长因子修复周围神经损伤研究

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中华创伤杂志 2008年第6期24卷 411-414页

作者：李智卢世璧孙明学彭江张莉眭翔赵斌解放军总医院全军骨科研究所北京100853

目的探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）对周围神经损伤修复的作用。方法以Wistar大鼠坐骨神经挤挫伤为动物模型，神经损伤局部肌肉注射腺病毒介导的人肝细胞生长因子（Ad-HGF），与无注射HGF组对照，通过步态分析、... 详细信息

目的探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）对周围神经损伤修复的作用。方法以Wistar大鼠坐骨神经挤挫伤为动物模型，神经损伤局部肌肉注射腺病毒介导的人肝细胞生长因子（Ad-HGF），与无注射HGF组对照，通过步态分析、肌肉湿重测定、计算机图像分析等指标评价神经损伤后再生效果。结果术后4周，在坐骨神经指数、肌肉湿重恢复、计算机图像分析等再生指标的比较中，注射HGF组明显强于对照组（P〈0．05）。结论HGF能促进大鼠坐骨神经损伤后的有髓纤维再生和功能恢复，是一种有效的治疗周围神经损伤的神经营养因子。

关键词：周围神经神经再生肝细胞生长因子挤挫伤

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化学去细胞同种异体神经的研究进展

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中华骨科杂志 2007年第8期27卷 619-621页

作者：李智卢世璧孙明学解放军总医院全军骨科研究所北京100853

周围神经缺损的修复以自体神经移植效果最佳。多年来，医学界不断寻找能替代自体神经的生物材料。Fawcett与Keynes认为理想的神经移植体应具备以下特征：（1）无免疫抗原性；（2）能较快地获得血运；（3）再生轴突能长入并通过该移植体... 详细信息

周围神经缺损的修复以自体神经移植效果最佳。多年来，医学界不断寻找能替代自体神经的生物材料。Fawcett与Keynes认为理想的神经移植体应具备以下特征：（1）无免疫抗原性；（2）能较快地获得血运；（3）再生轴突能长入并通过该移植体到达远端部位；（4）通过移植体的轴突能成熟到具有正常的直径、髓鞘化和传导动作电位；（5）移植体内再生轴突能准确到达靶器官。与其它移植材料相比，化学去细胞神经除具备上述特征外，还具有与正常神经相似的特性，显示了良好的临床应用前景。

关键词：同种异体神经化学去细胞自体神经移植神经移植体周围神经缺损临床应用前景去细胞神经生物材料

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对脊柱外科一些手术的浅见

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中国医学科学院学报 2005年第2期27卷 135-137页

作者：卢世璧中国人民解放军总医院骨科研究所

骨转移瘤是较常见的疾病,其中约5%～20%脊柱转移性瘤会侵犯脊髓而加重症状,近年来应用联合治疗措施已提高了患者生存率。手术切除脊柱肿瘤后常需必要的内固定器材重建以稳定脊柱手术,且必须在全身情况能耐受的情况下进行。脊柱融合内固... 详细信息

骨转移瘤是较常见的疾病,其中约5%～20%脊柱转移性瘤会侵犯脊髓而加重症状,近年来应用联合治疗措施已提高了患者生存率。手术切除脊柱肿瘤后常需必要的内固定器材重建以稳定脊柱手术,且必须在全身情况能耐受的情况下进行。脊柱融合内固定引起邻近节段退变的并发症逐步引起人们重视,力学检测证明,其与脊柱节段性融合后邻近节段关节活动加大有关。临床结果批判“脊柱内固定融合越坚固越好”的观点,避免脊柱固定器材的滥用。人工椎间盘的应用短期效果尚好,长期效果及长期并发症尚待观察。

关键词：脊椎转移瘤邻近节段病人工椎间盘

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胸椎椎弓根螺钉植入位置的分区及临床意义

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中华外科杂志 2005年第24期43卷 1572-1575页

作者：吴叶侯树勋吴闻文彭宝淦王华东韦兴史亚民解放军总医院三○四临床部全军骨科研究所北京100037

目的探讨术后CT扫描对胸椎椎弓根螺钉位置分区及其临床意义。方法对64例共450枚胸椎椎弓根螺钉固定患者的临床资料进行统计分析。所有患者术后均采用手术节段椎弓根CT扫描,根据椎弓根螺钉在CT片显示的位置及可能引起的危险将其分为A、B... 详细信息

目的探讨术后CT扫描对胸椎椎弓根螺钉位置分区及其临床意义。方法对64例共450枚胸椎椎弓根螺钉固定患者的临床资料进行统计分析。所有患者术后均采用手术节段椎弓根CT扫描,根据椎弓根螺钉在CT片显示的位置及可能引起的危险将其分为A、B、C三个区:A区,螺钉位置正常(椎弓根螺钉位于椎弓根中央,未穿透椎弓根和椎体,深度合适)。B区,螺钉引起椎弓根部分皮质破裂或穿透椎体前方或侧方,但没有引起严重的神经或血管损害。同时,将椎弓根螺钉偏向椎弓根外侧或上方、内侧或下方、穿透椎体前方或侧方分别划分为B1、B2、B3三个部分。C区,椎弓根螺钉位置严重偏差,直接威胁脊髓、神经根或大血管。平均随访时间25.8个月。比较胸椎不同位置使用椎弓根螺钉固定时椎弓根螺钉的准确位置及术后可能因为椎弓根螺钉位置偏差引起的并发症。结果A区共367枚(81.6%),B区78枚(17.3%),其中B1区40枚(8.8%)、B2区23枚(5.1%)、B3区15枚(3.4%),C区5枚(1.1%)。从结果看T36节段最容易发生椎弓根螺钉的位置错误。结论根据CT扫描影像结果对椎弓根螺钉位置进行分区,有助于准确判断椎弓根螺钉的位置,预防并发症的发生。

关键词：胸椎体层摄影术 X线计算机椎弓根螺钉

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肿瘤疫苗与白介素-12联合免疫治疗小鼠肉瘤的研究

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中华肿瘤防治杂志 2007年第6期14卷 415-417页

作者：崔雪梅袁玫宋舸睢翔赵斌卢世璧解放军总医院骨科研究所北京100853

目的:探讨混合热休克蛋白(HSP)/肽与白介素-12(IL-12)和环磷酰胺(CTX)联合治疗小鼠肉瘤的作用及机制。方法:以S-180肉瘤为模型,将瘤组织剪碎,裂解,离心,取上清经Sephacryl S-200层析,截取相对分子质量(50～200)×103段,经SDS-PAGE... 详细信息

目的:探讨混合热休克蛋白(HSP)/肽与白介素-12(IL-12)和环磷酰胺(CTX)联合治疗小鼠肉瘤的作用及机制。方法:以S-180肉瘤为模型,将瘤组织剪碎,裂解,离心,取上清经Sephacryl S-200层析,截取相对分子质量(50～200)×103段,经SDS-PAGE电泳及Western-blot法鉴定。用提取的HSP/肽免疫小鼠后,再用低剂量CTX及IL-12治疗(强化疫苗),观察无瘤生存率、抑瘤生长率、抑制转移率和存活期。用流式细胞仪,ELISPOT及乳酸脱氢酶等方法检测免疫功能的变化。结果:HSP疫苗与IL-12和CTX联合治疗小鼠S-180肉瘤,80.0%肿瘤完全消退,且100.0%抑制了肺部转移,达长期生存,而对照组全部在40d内死亡。检测表明HSP/肽疫苗形成了免疫预存,从而使IL-12和CTX发挥了抗瘤作用。结论:HSP/肽与IL-12和CTX联合治疗诱发了机体细胞免疫功能,产生强大的抗瘤作用,可能具有临床应用前景。

关键词：肉瘤免疫疗法热休克蛋白类白介素-12

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