检索结果-内蒙古大学图书馆

中华创伤杂志 2008年第6期24卷 405-406页

作者：付小兵解放军总医院基础医学所、第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853

组织修复与再生实际上是一个受损组织的再发育过程，其中修复细胞的有序增殖和分化是基础，而有目的可控性的诱导细胞增殖与分化则是实现完美修复和再生的重要手段之一。近年来有关采用控制性诱导细胞分化技术实现组织和器官的修复与再... 详细信息

组织修复与再生实际上是一个受损组织的再发育过程，其中修复细胞的有序增殖和分化是基础，而有目的可控性的诱导细胞增殖与分化则是实现完美修复和再生的重要手段之一。近年来有关采用控制性诱导细胞分化技术实现组织和器官的修复与再生已有较多的报道，已经显示出它潜在的应用前景，值得人们关注和开展相关研究。

关键词：组织修复细胞分化控制性再生细胞增殖发育过程受损组织修复细胞

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干细胞与烧伤创面修复

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中华烧伤杂志 2008年第5期24卷 365-366页

作者：付小兵盛志勇解放军总医院基础医学所第一附属医院全军刨伤修复重点实验室北京100853

干细胞治疗作为生物治疗的重要方法之一，近10余年来在烧伤领域的应用已显示出诱人的前景。国内将干细胞治疗作为进一步提高烧伤创面修复质量的重要方法，已经在加快创面愈合速度和减少瘢痕发生率、促进汗腺与毛囊再生及组织工程皮肤构... 详细信息

干细胞治疗作为生物治疗的重要方法之一，近10余年来在烧伤领域的应用已显示出诱人的前景。国内将干细胞治疗作为进一步提高烧伤创面修复质量的重要方法，已经在加快创面愈合速度和减少瘢痕发生率、促进汗腺与毛囊再生及组织工程皮肤构建等领域取得了重要进展。

关键词：烧伤干细胞创面修复

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碱性成纤维细胞生长因子诱导表皮细胞去分化的初步研究

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 2003-2007页

作者：孙晓艳付小兵伊海英刘惠玲孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6... 详细信息

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6、12、24、48、72h后,MTT法检测bFGF对表皮细胞体外生长的促进作用。同时采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法检测bFGF诱导培养后,表皮细胞的表型及功能的改变。结果MTT检测结果显示浓度为100ng/ml,诱导时间为36～48h为诱导表皮细胞去分化的最佳实验条件。在bFGF的作用之下,老化的HEKa细胞周围开始出现新生的表皮干细胞样克隆。免疫细胞化学检测结果表明,实验组细胞中β1整合素、CK19、CK14的表达增强,而CK10作为终末分化细胞的标志,在bFGF诱导组中的表达明显降低。流式细胞检测分析显示bFGF作用后,实验组CK19表达阳性的细胞与对照组相比明显增多(分别为74.77%和15.74%);CK14表达阳性的细胞也由原来的67.26%增加至被检测细胞总数的87.14%。而bFGF诱导作用后,被检测细胞中表达CK10阳性的细胞数量较对照组明显下降(分别为4.56%和98.56%)。此外,RT-PCR检测结果同样再次支持了表皮细胞去分化的理论。在bFGF诱导组中,β1整合素、CK19、CK14mRNA转录水平明显上调,而CK10mRNA表达则明显下降。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型表皮前体干细胞,但其涉及具体机制需要进一步研究。

关键词：表皮细胞去分化干细胞免疫细胞化学流式细胞检测 MTT RT—PCR

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胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 883-887页

作者：孙晓艳付小兵盛志勇张翠萍孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚... 详细信息

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚胎组织匀浆液,荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液对表皮干细胞表型变化的影响。结果:原代分离培养的表皮基底层干细胞表达α6、β1整合素、K19、K14、p63、Nes-tin、PCNA为阳性,而K10不表达。激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异。此外,流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后α6+CD71-表达细胞由细胞总数的22.49%减少至10.92%,而α6+CD71+、α6-CD71+表达细胞则分别由诱导前的62.29%及0.19%增加至诱导后的68.34%及4.51%。RT-PCR结果表明胚胎组织提取液作用后,表皮干细胞中β1整合素、K19、K10表达增强,而K14表达减弱。结论:Ⅳ型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点。α6整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一。胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分化具有促进作用。胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化,甚至诱导其发生逆向分化,导致诱导后K14的总体表达水平下调。

关键词：表皮干细胞抗体单克隆胚胎组织提取液

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脂肪干细胞促进人表皮角质形成细胞创面模型愈合的研究

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中华外科杂志 2008年第20期46卷 1575-1578页

作者：袁方雷永红付小兵盛志勇蔡飒孙同柱北京大学医学部心血管研究所 100038 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养... 详细信息

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养（间接组，n=8）和单纯HEKa培养组（单纯组，n=8）。刮擦生长融合成片的HEKa细胞制备创面。培养24、48、72h后，计数迁移到创面的HEKa细胞数量并计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性以判定HEKa细胞的增殖活性。结果实验组、间接组、单纯组在伤后24h分别有（9．2±0．2）、（5．0±0．3）、（4．2±0．3）个细胞／高倍视野；48h分别有（58．5±0．4）、（26．5±0．3）、（20．7±0．5）个细胞／高倍视野；72h分别有（125．8±0．4）、（43．0±0．5）、（35．6±0．5）个细胞／高倍视野越过创缘进入创面，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。三组创面愈合率在伤后72h分别为61．0％±3．0％、35．0％±2．5％、32．0％±2．1％，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。脱氧胸腺嘧啶核苷掺入培养基法表明三组HEKa细胞的放射性强度为（1440±210）、（1050±280）、（1130±390）cpm／10^5细胞，实验组与两对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论rADSCs通过直接接触促进HEKa细胞的分裂增殖和迁移。

关键词：脂肪干细胞细胞培养创面愈合

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从去分化途径来制造干细胞:新的机遇和挑战

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感染．炎症．修复 2008年第3期9卷 131-133页

作者：付小兵解放军总医院基础医学所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853

干细胞的研究仍将是一项世界性的热门课题,一方面在于它许多深奥的基础科学问题有待深入研究,另一方面是它巨大的临床治疗性应用前景和商业价值有待进一步开发。就胚胎干细胞研究而言,目前的主要瓶颈问题概括起来主要有两方面,一是伦理... 详细信息

干细胞的研究仍将是一项世界性的热门课题,一方面在于它许多深奥的基础科学问题有待深入研究,另一方面是它巨大的临床治疗性应用前景和商业价值有待进一步开发。就胚胎干细胞研究而言,目前的主要瓶颈问题概括起来主要有两方面,一是伦理学障碍.二是技术困难.即怎么样才能方便地获取大量的胚胎干细胞用于研究。最近,有关从成体细胞通过去分化途径,即重编程过程获得“诱导性多能干细胞”(induced pluripotent stemcell,iPS)相关结果的发表,[第一段]

关键词：胚胎干细胞分化途径制造治疗性应用多能干细胞基础科学商业价值成体细胞

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表皮细胞体外去分化模型的建立

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中华实验外科杂志 2008年第3期25卷 391-393页

作者：英兰孙晓艳付小兵崔明玉刘文忠伊海英高瑗解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 内蒙古医学院组织胚胎学教研室内蒙古医学院人体解剖学教研室总后勤部管理保障局北京郑常庄干休所

目的探讨表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法人表皮角质形成细胞（HEK）体外培养至24代，细胞体积膨大，形态发生明显改变。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导48h后，观察细胞贴壁培养4、12、24、48、72h时的生长及集落形成情况... 详细信息

目的探讨表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法人表皮角质形成细胞（HEK）体外培养至24代，细胞体积膨大，形态发生明显改变。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导48h后，观察细胞贴壁培养4、12、24、48、72h时的生长及集落形成情况。以同期培养的表皮细胞作为阴性对照，采用免疫组织化学的方法检测实验组及对照组，B1整合素、CK19、CK14、CK10在表皮细胞中的表达差异；流式细胞仪测定细胞周期的改变。结果bFGF诱导培养48h后老化的表皮细胞周围分散出现幼稚型细胞，这些细胞体积小，形态均一，折光性强，核浆比大，并呈克隆样生长。免疫组织化学染色结果显示，bFGF诱导培养后，表皮细胞中CK19、CK14表达增强，而CK10表达减弱。流式结果显示：bFGF诱导培养后，细胞周期中G0／G1的细胞为53．08％，S期细胞为32．71％，G2期细胞为14．21％，而对照组中处于G0／G1、S期及G2期的细胞分别为63．9％、18．98％及17．12％。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型克隆形成细胞，具体机制需要进一步深入研究。

关键词：表皮细胞分化干细胞免疫组织化学

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糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中皮肤神经末梢再生的研究

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中华老年多器官疾病杂志 2008年第5期7卷 404-407,421页

作者：程飚刘宏伟陈葵李勤孙同柱付小兵盛志勇解放军广州军区总医院整形外科广州市510010 暨南大学第一附属医院整形外科广州市510630 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京市100037 解放军总医院基础医学所北京市100853

目的观察糖尿病大鼠与正常大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中神经末梢的再支配情况与创面愈合的关系。方法非糖尿病大鼠(n=12)与糖尿病大鼠(n=12)制成相同的全层皮肤缺损创面愈合模型。于伤后3d、7d和14d采取创面皮肤标本,用组织病理HE和S... 详细信息

目的观察糖尿病大鼠与正常大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中神经末梢的再支配情况与创面愈合的关系。方法非糖尿病大鼠(n=12)与糖尿病大鼠(n=12)制成相同的全层皮肤缺损创面愈合模型。于伤后3d、7d和14d采取创面皮肤标本,用组织病理HE和SP抗体免疫组织化学染色技术检测创面肉芽再生与再上皮化情况,并对肉芽创面内周围神经末梢再生情况进行观察。结果糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面愈合的时间延长,其周围神经末梢的数量较正常组明显减少,再生速度缓慢,肉芽组织中微血管和胶原形成的能力明显降低。结论糖尿病大鼠创面的愈合障碍与神经组织再生延迟相关。

关键词：伤口愈合糖尿病神经末梢再生

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人表皮干细胞分离培养和纯化鉴定的进展

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感染．炎症．修复 2008年第4期9卷 240-242页

作者：李富付小兵刘文忠内蒙古医学院基础医学院解削学教研室内蒙古呼和浩特010059 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

皮肤体现出很强的再生能力,是由于表皮基底层中的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)终身不断自我更新、持续分化以取代终末分化细胞,从而在维持组织结构的更新、细胞内环境的稳定及在创伤后创面修复过程中起至关重要的作用。随着... 详细信息

皮肤体现出很强的再生能力,是由于表皮基底层中的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)终身不断自我更新、持续分化以取代终末分化细胞,从而在维持组织结构的更新、细胞内环境的稳定及在创伤后创面修复过程中起至关重要的作用。随着分子生物学、细胞生物学。

关键词：人表皮干细胞分离培养终末分化标记滞留细胞细胞分化纯化鉴定

来源：评论

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碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体的构建

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感染．炎症．修复 2008年第3期9卷 174-176页

作者：伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田高瑗内蒙古医学院内蒙古呼和浩特010059 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 总后勤部管理保障局北京郑常庄干休所北京100039

目的:构建碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因真核表达载体pEGFP-C3-bFGF,为基因水平研究bFGF在表皮细胞去分化过程中的调控机制提供实验参考。方法:参考分子克隆技术,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从PBR322-bFGF质粒中扩增bFGF,同时在其... 详细信息

目的:构建碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因真核表达载体pEGFP-C3-bFGF,为基因水平研究bFGF在表皮细胞去分化过程中的调控机制提供实验参考。方法:参考分子克隆技术,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从PBR322-bFGF质粒中扩增bFGF,同时在其两端引入HindⅢ和EcoRⅠ限制性内切酶酶切位点,将bF-GFcDNA定向插入pEGFP-C3的多克隆位点中,构建真核表达质粒pEGFP-C3-bFGF,并对重组子进行DNA序列测定。结果:电泳初步鉴定获得的连接产物为重组质粒pEGFP-C3-bFGF;对重组子中含有bFGF基因的一段进行测序,测序结果经Vector NTI软件分析,证实获得bFGF基因。结论:将bFGF插入pEGFP-C3的C末端,可以提高bFGF在真核细胞中的表达,而且不影响其目的蛋白的结构和功能,对研究bFGF调控表皮细胞去分化的分子机制具有重要的意义。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因表达载体构建聚合酶链反应

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