检索结果-内蒙古大学图书馆

第八届全国创伤学术会议

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院山东大学第二医院组织工程研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

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pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

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急慢性创面治疗新技术专题系列研讨会之感染创面综合治疗论坛

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院山东大学第二医院组织工程研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的构建展示pComb3-KGF活性肽,促进表皮细胞增殖。方法应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3,将4个KGF基因亚克隆至pComb3;应用噬菌体呈现技术,将插入的基因展示于噬菌体表面;抽提纯化噬菌体DNA,进行... 详细信息

目的构建展示pComb3-KGF活性肽,促进表皮细胞增殖。方法应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3,将4个KGF基因亚克隆至pComb3;应用噬菌体呈现技术,将插入的基因展示于噬菌体表面;抽提纯化噬菌体DNA,进行酶切、PCR和测序鉴定;应用MTT方法检测pComb3-KGF活性肽促进表皮细胞增殖的作用,应用免疫荧光方法检测pComb3-KGF活性肽的细胞亲和力,应用RT-PCR方法检测pComb3-KGF活性肽对KGFR、c-Fos和c-Jun的表达水平的影响。结果应用RT-PCR方法获得目的基因,并构建在噬菌粒pComb3中,目的基因成功表达于载体表面;酶切、PCR和测序结果证实目的基因已成功构建在载体中;MTT结果显示4种pComb3-KGF活性肽均能够促进表皮细胞增殖;免疫荧光检测结果证明其具有较好的细胞亲和力;RT-PCR结果显示KGF及两种pComb3-KGF活性肽能够促进KGFR的表达,4种pComb3-KGF活性肽促进c-Fos和cJun表达的作用均弱于KGF。结论成功构建展示pComb3-KGF活性肽,能够显著促进表皮细胞增殖,但促进肿瘤基因c-Fos和c-Jun的表达弱于KGF。

关键词： pComb3-KGF MTT 细胞增殖活性肽

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pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

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中华医学会烧伤外科学分会第十二届学术年会

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院北京 100144 山东大学第二医院组织工程研究所济南 250033 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京

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毛囊干细胞增殖与分化相关信号通路研究进展

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中国修复重建外科杂志 2010年第2期24卷 161-164页

作者：许永安付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 南开大学医学院

目的对毛囊干细胞增殖与分化相关信号通路的研究现状与应用前景进行综述。方法查阅近年国内外关于毛囊干细胞增殖与分化相关信号通路的研究文献,并进行回顾及综合分析。结果调节毛囊干细胞增殖与分化的多条信号通路,包括BMP/TGF-β、Wnt... 详细信息

目的对毛囊干细胞增殖与分化相关信号通路的研究现状与应用前景进行综述。方法查阅近年国内外关于毛囊干细胞增殖与分化相关信号通路的研究文献,并进行回顾及综合分析。结果调节毛囊干细胞增殖与分化的多条信号通路,包括BMP/TGF-β、Wnt、Notch、外胚层发育不全基因等,在皮肤组织的发育、更新及修复过程中发挥着重要调控作用。结论毛囊干细胞可作为皮肤创面修复的一种重要细胞学治疗方法。

关键词：毛囊干细胞信号转导细胞增殖细胞分化细胞治疗

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诱导脂肪干细胞向血管内皮细胞分化的实验研究

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中华外科杂志 2010年第14期48卷 1106-1109页

作者：雷永红付小兵盛志勇周学萍解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100448 解放军总医院第一附属医院烧伤科北京100448

目的探讨诱导脂肪干细胞（ADSCs）向血管内皮细胞（ECs）分化的可能性,为ADSCs应用于创伤修复的理论提供实验依据.方法切取大鼠脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSCs,流式细胞仪检测第3代ADSCs的CD49d和CD106的表达以鉴定ADSCs.实验组... 详细信息

目的探讨诱导脂肪干细胞（ADSCs）向血管内皮细胞（ECs）分化的可能性,为ADSCs应用于创伤修复的理论提供实验依据.方法切取大鼠脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSCs,流式细胞仪检测第3代ADSCs的CD49d和CD106的表达以鉴定ADSCs.实验组用含30%大鼠血管匀浆液的条件培养液诱导大鼠ADSCs,空白对照组用含10%胎牛血清DMEM培养液培养大鼠ADSCs,各组诱导3 d后经免疫组化和流式细胞仪检测ADSCs中CD34和血管性假血友病因子（vWF）相关抗原的表达变化.结果流式细胞仪检测ADSCs的CD49d和CD106阳性率分别为（98.32±0.37）%和（1.67±0.61）%;血管条件培养液诱导组细胞CD34和vWF阳性率分别为（77.14±0.76）%和（75.46±0.37）%,较空白对照组（1.38±0.31）%和（1.70±0.23）%均升高,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 ADSCs可以被诱导向ECs表型分化,提示ADSCs具有参与创伤后血管形成的潜能,可以应用于创伤修复的治疗.

关键词：干细胞脂肪组织内皮细胞细胞分化

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去分化来源表皮干细胞的分离、培养和鉴定

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中华创伤杂志 2010年第12期26卷 1132-1135页

作者：张翠萍付小兵陈鹏孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射与辐射医学研究所

目的分离培养去分化来源的表皮十细胞（dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs）,并进一步观察其表型特征.方法包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去... 详细信息

目的分离培养去分化来源的表皮十细胞（dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs）,并进一步观察其表型特征.方法包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮十细胞后,移植到BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,移植5 d后收集皮片制备单细胞悬液,流式检测CK10、CK19和β1整合素阳性细胞白分数,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内DDESCs,并采用免疫荧光法和荧光定量PCR法分别检测去分化细胞内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达.结果流式检测结果表明,皮片移植5 d后,CK10阳性细胞减少（P＜0.01）,CK19和β1整合素阳性细胞增加（P＜0.01）.Ⅳ型胶原粘贴分离DDESCs,结果表明,移植皮片组在10 min内约有4.56%的贴壁细胞出现.细胞的表型分析结果表明,DDESCs内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达量类似于原始表皮干细胞（P＞0.05）,但明显高于成熟表皮细胞（P＜0.01）.结论 DDESCs的表型特征与原始表皮干细胞相类似,提示去分化细胞有可能代替原始表皮干细胞应用于创伤部位的修复和再生.

关键词：表皮干细胞去分化细胞分离表型

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蜕皮甾酮在体外条件下对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

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南方医科大学学报 2010年第5期30卷 1180-1182,1184页

作者：吴昌昊吴旭付小兵周云峰张元中张子良南方医科大学南方医院胸心血管外科广东广州510515 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所创伤修复重点实验室北京100048

目的分离培养并鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC),观察不同剂量蜕皮甾酮(EDS)对hMSC增殖的影响。方法密度梯度离心法获取hMSC,检测第2代细胞CD44、CD105、CD34及CD29的表达以鉴定其为hMSC。设不同浓度EDS的细胞培养体系(10、25、50和100μg... 详细信息

目的分离培养并鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC),观察不同剂量蜕皮甾酮(EDS)对hMSC增殖的影响。方法密度梯度离心法获取hMSC,检测第2代细胞CD44、CD105、CD34及CD29的表达以鉴定其为hMSC。设不同浓度EDS的细胞培养体系(10、25、50和100μg/ml)与对照组(单纯hMSC培养基,无EDS)作对比,MTT比色法测定hMSC的增殖活力,并行流式细胞周期观察。结果 EDS各浓度组hMSC的MTT吸光度值与对照组比较均有明显差异(P<0.01);EDS浓度为25μg/ml时hMSCMTT吸光度值显著高于其余各组(P<0.01);在EDS浓度为10、50、100μg/ml时,组间吸光度值未见明显差异(P>0.05),但显著高于对照组(P<0.01)。流式细胞周期显示EDS浓度为25μg/ml时hMSC培养体中细胞S期细胞所占比例、增殖指数均明显高于对照组。结论 EDS在一定浓度范围内对体外培养条件下的hMSC具有生长促进作用,该作用在EDS浓度为25μg/ml时最为显著,但是EDS促进hMSC增殖的作用不随剂量的增加而增加。

关键词：蜕皮甾酮人骨髓间充质干细胞细胞增殖

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不同剂量rhGM-CSF凝胶促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的实验研究

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感染．炎症．修复 2010年第2期11卷 71-75,F0002页

作者：刘波杨永华吴志谷赵立欣黎君友孙同柱付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

目的:观察不同剂量重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)凝胶(商品名为金扶宁)对SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的促进作用并筛选最佳剂量。方法:42只SD大鼠,雌雄各半,随机分为7组:模型组,凝胶基质对照组,金扶宁100、250、500、750和... 详细信息

目的:观察不同剂量重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)凝胶(商品名为金扶宁)对SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的促进作用并筛选最佳剂量。方法:42只SD大鼠,雌雄各半,随机分为7组:模型组,凝胶基质对照组,金扶宁100、250、500、750和1 000 mg/cm^2治疗组。每只大鼠背部制备两个深Ⅱ度烫伤创面,凝胶基质对照组创面于伤后1～10 d每日涂抹凝胶基质100 mg/cm^2,然后于伤后12、14、17和19 d间断创面涂抹凝胶基质100 mg/cm^2;不同剂量金扶宁治疗组创面涂沫相应剂量金扶宁,给药方法及时间同凝胶基质对照组;模型组不予处理。伤后3、7、10、14、17、21 d分别测量痂皮形成及脱落创面数,计算创面上皮化率、创面愈合率,伤后21 d行组织学检查。结果:与模型组和凝胶基质对照组相比,金扶宁各组对烫伤后7～10 d前后创面的融痂脱痂效果非常明显,以250～500 mg/cm^2治疗组疗效最佳(P<0.05)。治疗后7～10 d,金扶宁各组新生上皮较模型组和凝胶基质对照组均显著增多(P<0.05);治疗后14 d,金扶宁500 mg/cm^2治疗组上皮化率[(55.46±6.13)%]较模型组[(48.81士4.99)%]和凝胶基质对照组[(43.17±5.65)%]仍然显著增多,并优于其他剂量治疗组(P<0.05)。治疗后10～14 d,金扶宁250～500 mg/cm^2治疗组创面愈合率较模型组、凝胶基质对照组和其他剂量治疗组显著增高(P<0.05);治疗后21 d,金扶宁250～1 000 mg/cm^2治疗组毛囊再生数量较模型组[(1.531±0.374)/mm^2]和凝胶基质对照组[(1.423±0.346)/mm^2]显著增高,以500～750 mg/cm^2治疗组[分别为(7.145±1.153)/mm^2和(6.250±0.768)/mm^2]明显(P<0.05)。结论:rhGM-CSF凝胶可以促进痂皮形成和脱落、加快上皮生长、促进毛囊再生,增加烧伤创面修复速度并改善修复质量,以500 mg/cm^2剂量治疗效果最佳。

关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子创面愈合修复

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慢性伤口诊疗指导建议

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中华烧伤杂志 2010年第5期26卷 390-402页

作者：韩春茂孙华凤姜丽萍涂倩董超群付小兵浙江大学医学院附属第二医院烧伤科杭州400038 温州医学院护理学院解放军总医院基础医学所第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目前由于引起慢性伤口的原因不同、对照研究难度较大、各地条件不一,其经验总结和指南也各有差异.为了规范慢性伤口诊疗,笔者在复习国内外文献和相关指南的基础上,撰写了以下慢性伤口诊疗指导建议,供大家在实践中应用并逐渐完善.

关键词：慢性伤口诊疗国内外指南

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Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响

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第三军医大学学报 2010年第16期32卷 1716-1719页

作者：张翠萍陈鹏付小兵孙同柱解放军总医院第一附属医院创伤外科全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射与辐射医学研究所电磁和激光生物学实验室北京100850

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响。方法差速贴壁法分离人成熟表皮细胞。并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组又分为氯化锂(LiCl,20mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形... 详细信息

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响。方法差速贴壁法分离人成熟表皮细胞。并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组又分为氯化锂(LiCl,20mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形态变化,并采用Westernblot检测表皮细胞内β-catenin的表达水平,免疫组织化学法检测表皮细胞表面标志性蛋白CK10、CK14、CK19和β1整合素的表达变化。结果人表皮细胞内β-catenin的表达在被LiCl(2.15±0.54)和GSK-3β(2.58±0.65)抑制子诱导后分别比对照组(0.71±0.23)增加了2倍和2.5倍(P<0.01)。而且诱导后细胞体积变小变圆,细胞核、细胞质比例变大。免疫组织化学检测结果表明,诱导前表皮细胞高表达CK10,部分细胞表达CK14,CK19和β1整合素表达阴性;诱导后已无CK10阳性细胞存在,有部分CK14阳性细胞,而且CK19和β1整合素的表达呈强阳性。结论 Wnt/β-catenin通路活化可引起人成熟表皮细胞的去分化,即Wnt/β-catenin通路可能是调控人表皮细胞去分化的关键环节。

关键词：表皮细胞 Wnt/β-catenin信号通路表型特征去分化

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