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中国康复医学会修复重建外科专业委员会第19次学术交流会暨中国医师协会烧伤科医师分会2012年年会

作者：陈鹏张翠萍付小兵军事医学科学院放射与辐射医学研究所电磁与激光生物学实验室北京100850 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

目的:大量研究表明低强度激光(low power laser irradiation,LPLI)可显著地促进骨骼肌萎缩和创伤后的再生过程,其前提必然与LPLI激活了局部的骨骼肌组织中的干细胞——成肌细胞并调节其增殖分化能力有关,然而对于其中的具体作用机制目...

目的:大量研究表明低强度激光(low power laser irradiation,LPLI)可显著地促进骨骼肌萎缩和创伤后的再生过程,其前提必然与LPLI激活了局部的骨骼肌组织中的干细胞——成肌细胞并调节其增殖分化能力有关,然而对于其中的具体作用机制目前知之甚少.以体外培养的成肌细胞为模型,研究LPLI对成肌细胞增殖和分化的效应,以阐明LPLI促骨骼肌再生修复的细胞作用机制.

关键词：

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KGF-2治疗角膜碱烧伤的形态计量学研究

KGF-2治疗角膜碱烧伤的形态计量学研究

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第八届全国生物医学体视学学术会议、第十一届全军军事病理学学术会议、第七届全军定量病理学学术会议

作者：陈鹏张翠萍梁洁高荣莲马萍康宏向军事医学科学院放射与辐射医学研究所电磁与激光生物学研究室解放军总医院第一附属医院烧伤研究所全军创伤修复重点实验室

目的:碱烧伤是日常生活、生产和科研等领域中一种常见的眼外伤类型,在工业眼外伤中占第三位。由于碱烧伤首先损害眼表,可导致角膜上皮剥脱、角膜血管新生和角膜浑浊等并发症而严重影响视力,但目前尚无有效的治疗方法。研究表明角质细胞... 详细信息

目的:碱烧伤是日常生活、生产和科研等领域中一种常见的眼外伤类型,在工业眼外伤中占第三位。由于碱烧伤首先损害眼表,可导致角膜上皮剥脱、角膜血管新生和角膜浑浊等并发症而严重影响视力,但目前尚无有效的治疗方法。研究表明角质细胞生长因子-2(KGF-2)有很好的促进创伤愈合、减少瘢

关键词：角膜烧伤 KGF-2 治疗图像分析透光率

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pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

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2012昆山国际外科感染伤口防治研讨会

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院山东大学第二医院美容整形烧伤外科和急诊科解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的构建展示pComb3-KGF活性肽,促进表皮细胞增殖。方法应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3,将4个KGF基因亚克隆至pComb3;应用噬菌体呈现技术,将插入的基因展示于噬菌体表面;抽提纯化噬菌体DNA,进行... 详细信息

目的构建展示pComb3-KGF活性肽,促进表皮细胞增殖。方法应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3,将4个KGF基因亚克隆至pComb3;应用噬菌体呈现技术,将插入的基因展示于噬菌体表面;抽提纯化噬菌体DNA,进行酶切、PCR和测序鉴定;应用MTT方法检测pComb3-KGF活性肽促进表皮细胞增殖的作用,应用免疫荧光方法检测pComb3-KGF活性肽的细胞亲和力,应用RT-PCR方法检测pComb3-KGF活性肽对KGFR、c-Fos和c-Jun的表达水平的影响。结果应用RT-PCR方法获得目的基因,并构建在噬菌粒pComb3中,目的基因成功表达于载体表面;酶切、PCR和测序结果证实目的基因已成功构建在载体中;MTT结果显示4种pComb3-KGF活性肽均能够促进表皮细胞增殖;免疫荧光检测结果证明其具有较好的细胞亲和力;RT-PCR结果显示KGF及两种pComb3-KGF活性肽能够促进KGFR的表达,4种pComb3-KGF活性肽促进c-Fos和c-Jun表达的作用均弱于KGF。结论成功构建展示pComb3-KGF活性肽,能够显著促进表皮细胞增殖,但促进肿瘤基因c-Fos和c-Jun的表达弱于KGF。

关键词： pComb3-KGF MTT 细胞增殖活性肽

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建立一种快速分离人汗腺细胞的实验方法

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中华实验外科杂志 2011年第1期28卷 54-56页

作者：许永安黄沙付小兵张翠萍孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

目的通过与传统汗腺分离方法进行对比，建立一种新的快速分离、获取人汗腺方法。方法采用制作微粒皮（直径0．5～1．0mm^3）、提高胶原酶Ⅱ型的浓度（2．5g／L）以及改变温度条件（37．5℃）来与传统方法比较，对比两种方法获取汗腺的... 详细信息

目的通过与传统汗腺分离方法进行对比，建立一种新的快速分离、获取人汗腺方法。方法采用制作微粒皮（直径0．5～1．0mm^3）、提高胶原酶Ⅱ型的浓度（2．5g／L）以及改变温度条件（37．5℃）来与传统方法比较，对比两种方法获取汗腺的时间、细胞的形态及增殖情况。结果由此方法分离、获取汗腺细胞所需要的时间明显缩短（由12h以上缩短为3～5h），其形态及增殖特性无明显差异（P〉0．05）。结论一种更加便捷、高效的汗腺细胞分离方法的建立为汗腺的修复与再生研究提供一种快速、大量获取汗腺细胞的新策略。

关键词：汗腺细胞分离培养皮肤再生

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pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院北京100144 山东大学第二医院美容整形烧伤外科和急诊科济南250033 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京

目的：构建展示pComb3-KGF活性肤，促进表皮细胞增殖。方法：应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;应用MTT方法检测pComb3-KGF活性肤促进表皮细胞增殖的作用，应用RT-PCR方法检测pComb3-KGF活性肤对KGFR, c-Fos和c-Jun的表达水平的影响。结果... 详细信息

目的：构建展示pComb3-KGF活性肤，促进表皮细胞增殖。方法：应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;应用MTT方法检测pComb3-KGF活性肤促进表皮细胞增殖的作用，应用RT-PCR方法检测pComb3-KGF活性肤对KGFR, c-Fos和c-Jun的表达水平的影响。结果：应用RT PCR方法获得目的基因，并构建在噬菌粒pComb3中，目的基因成功表达于载体表面;RT-PCR结果显示KGF及两种pComb3-KGF活性肤能够促进KGFR的表达，4种pComb3-KGF活性肽促进c-Fos和c-Jun表达的作用均弱于KGF。结论：成功构建展示pComb3-KGF活性肤，能够显著促进表皮细胞增殖，但促进肿瘤基因c-Fos和c-Jun的表达弱于KGF。

关键词：人体组织学表皮细胞活性肽细胞增殖

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不同来源的表皮干细胞促进皮肤创面愈合的研究

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中华实验外科杂志 2011年第2期28卷 215-217,I0003页

作者：费阳张翠萍付小兵解放军总医院第一附属医院普外科北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室解放军总医院基础医学研究所北京100853

目的观察表皮干细胞（ESCs）及去分化来源的表皮干细胞（DESCs）对皮肤创面愈合的促进作用及其异同.方法由新鲜人包皮标本以贴壁法分离ESCs,随机分为3组,第1组作为原代ESCs：第2组传代培养至第6代时可见细胞成熟呈表皮细胞（ECs）形态... 详细信息

目的观察表皮干细胞（ESCs）及去分化来源的表皮干细胞（DESCs）对皮肤创面愈合的促进作用及其异同.方法由新鲜人包皮标本以贴壁法分离ESCs,随机分为3组,第1组作为原代ESCs：第2组传代培养至第6代时可见细胞成熟呈表皮细胞（ECs）形态,由原来的大克隆生长的小圆细胞形态变为较为肥大的不规则型细胞,无法形成克隆样增殖;其细胞表型也由β1整合素、CK19强阳性、CK10阴性变为β1整合素、CK19阴性,而CK10强阳性,予以100μg/L的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）培养48 h进行去分化诱导,48 h后ECs周边开始出现小圆细胞并呈克隆样生长,β1整合素、CK19、CK10等细胞表型也趋于与ESCs一致,即DESCs;第3组传代培养至第6代获得ECs.3组细胞皆以D-Hanks液重悬调其终质量浓度为2×106个/ml.将12只裸鼠每只背部左右各制备1个直径6 mm创面,共24个创面.将全部创面随机等分为4组,每组6个,分别以ESCs、DESCs、Ecs及生理盐水（NS）各0.2 ml进行创面注射.于术后0、3、7 d测量创面面积进行统计学分析,并于术后7 d行创面取材苏木素-伊红（HE）染色.结果 ESCs组与DESCs组在术后3 d时创面面积分别为（11.758±2.544）、（11.515±1.351）mm2,7 d时创面面积分别为（1.795±1.063）、（2.043±1.138）mm2,修复速度要明显快于ECs组与NS组[3 d时创面面积分别为（17.857±1.722）、（16.192±2.256）mm2,7 d时创面面积分别为（5.367±1.219）、（5.070±1.357）mm2,P＜0.01];而ESCs与DESCs组之间创面修复速度比较差异无统计学意义（P＞0.05）;ECs组与NS组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）.HE染色提示ESCs组与DESCs组的创面愈合质量优于ECs组与NS组,可见有皮肤附属腺的再生且纤维瘢痕组织较少.结论 ESCs与DESCs皆有促进创面愈合的作用,相互之间无明显差异.

关键词：表皮干细胞去分化创面愈合

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雌激素对人表皮干细胞增殖与迁移影响的体外实验

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中国修复重建外科杂志 2011年第2期25卷 134-138页

作者：陈小波程飚刘宏伟孙同柱付小兵广州军区广州总医院整形外科广州 510010 暨南大学附属第一医院整形外科解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)在体内的微环境十分复杂,雌激素可能是主要的参与者。探讨雌激素对体外培养的hESCs增殖与迁移的影响。方法取自愿捐赠的正常人包皮标本,采用密度梯度离心法分离培养hESCs,并传至第2代。流式... 详细信息

目的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)在体内的微环境十分复杂,雌激素可能是主要的参与者。探讨雌激素对体外培养的hESCs增殖与迁移的影响。方法取自愿捐赠的正常人包皮标本,采用密度梯度离心法分离培养hESCs,并传至第2代。流式细胞仪检测第2代hESCs整合素β1、细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)、CK14和CK10抗原表达以鉴定hESCs。取第2代hESCs 2×106个分别用含0.1 nmol/L雌激素的ESCs专用培养基(A组)、含10 nmol/L雌激素受体阻断剂的ESCs专用培养基(B组)以及普通ESCs专用培养基(C组)进行培养;于培养后24 h刮擦生长融合成片的hESCs,制备宽度为100μm的体外单层hESCs损伤模型。于模型制备后24、48、72 h,倒置相差显微镜下观察各组表皮创面愈合情况(即hESCs迁移情况),并计算模型制备后72 h各组创面愈合率;于模型制备后24、48、72、96、120 h,采用MTT法检测hESCs分裂增殖活性。结果原代培养的hESCs贴壁呈单层卵圆形、集落样生长。流式细胞仪检测第2代hESCs的整合素β1、CK19、CK14呈阳性标记,阳性率分别为96.63%、95.47%、94.27%;CK10呈阴性标记,阳性率为1.32%。模型制备后24、48、72 h,各组均可见hESCs迁移越过创缘,其中A组越过创缘的细胞数多于B、C组,C组多于B组;模型制备后72 h,A、B、C组创面愈合率分别为69.00%±0.05%、35.00%±0.05%、48.00%±0.06%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。模型制备后24、48、72、96和120 h,A组hESCs分裂增殖活性高于B、C组,C组高于B组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论雌激素具有促进hESCs分裂增殖和迁移的作用,并藉此可能参与皮肤诸多的生物学作用。

关键词：人表皮干细胞雌激素细胞增殖细胞迁移体外实验

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创面治疗中心建设的实践

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中华烧伤杂志 2011年第1期27卷 8-9页

作者：付小兵解放军总医院基础医学研究所第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853

创面治疗中心的建设既是顺应我国疾病谱变化的需要，也是社会发展的迫切需求。本世纪初，中华医学会创伤学分会组织修复专业委员会（组）的几位主要成员，曾讨论过在中国建立创面治疗中心的可能性，2005年提出建设规范化和具有示范意义... 详细信息

创面治疗中心的建设既是顺应我国疾病谱变化的需要，也是社会发展的迫切需求。本世纪初，中华医学会创伤学分会组织修复专业委员会（组）的几位主要成员，曾讨论过在中国建立创面治疗中心的可能性，2005年提出建设规范化和具有示范意义的创面治疗中心的设想，

关键词：伤口愈合创面治疗中心

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对组织再生和再生医学发展的再思考

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中华烧伤杂志 2011年第1期27卷 1-2页

作者：付小兵解放军总医院基础医学研究所第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853

组织再生是21世纪生命科学与医学研究的热点和难点，作为转化医学的典型案例受到高度重视。组织再生虽然具有巨大的社会需求，但是到目前为止，许多基本的科学问题和技术难题尚未完全阐明和解决。笔者就再生医学相关研究和转化问题提出... 详细信息

组织再生是21世纪生命科学与医学研究的热点和难点，作为转化医学的典型案例受到高度重视。组织再生虽然具有巨大的社会需求，但是到目前为止，许多基本的科学问题和技术难题尚未完全阐明和解决。笔者就再生医学相关研究和转化问题提出自己的认识，与大家共同探讨。

关键词：再生医学组织再生

来源：评论

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特定微环境诱导人脐带沃顿胶间充质干细胞向汗腺样细胞分化的实验研究

引用

解放军医学杂志 2011年第3期36卷 211-214页

作者：许永安黄沙付小兵马奎张翠萍解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 南开大学医学院

目的鉴定人脐带沃顿胶间充质干细胞(hUCWJ-MSCs)经汗腺诱导培养基培养后向汗腺样细胞分化的潜能。方法酶消化法分离培养人正常汗腺细胞,热休克汗腺细胞后收集培养基上清液,按10%的体积分数配制汗腺分化诱导培养基。酶消化法分离获取hUCW... 详细信息

目的鉴定人脐带沃顿胶间充质干细胞(hUCWJ-MSCs)经汗腺诱导培养基培养后向汗腺样细胞分化的潜能。方法酶消化法分离培养人正常汗腺细胞,热休克汗腺细胞后收集培养基上清液,按10%的体积分数配制汗腺分化诱导培养基。酶消化法分离获取hUCWJ-MSCs,流式细胞仪分析细胞表型特征;成骨诱导培养基和成脂诱导培养基中培养2～3周后采用碱性磷酸酶染色和油红-O染色对其分化潜能进行鉴定;在汗腺诱导培养基中培养3周,倒置显微镜观察细胞形态变化,分别收集培养1、2、3周时的细胞,采用免疫组织化学和流式细胞术检测汗腺标记物CEA、CK14、CK19的表达,RT-PCR检测汗腺发育基因(EDA)的表达。结果正常汗腺细胞呈铺路石状克隆样增生。hUCWJ-MSCs呈梭形、成纤维细胞样,流式细胞分析显示其CD44、CD105、CD34、CEA阳性率分别为97.37%9、6.26%、0.56%0、.52%;经成骨诱导培养基和成脂诱导培养基培养2～3周后,可诱导成为油红-O染色阳性的脂肪细胞和碱性磷酸酶染色阳性的骨细胞;在汗腺诱导培养基中培养3周后,细胞具有类似汗腺样结构,免疫组织化学DAB显色结果显示分化后的hUCWJ-MSCs表达汗腺细胞标记物CEA、CK14、CK19,流式细胞仪检测其阳性率分别为54.37%、60.25%、62.13%,RT-PCR结果显示其可较高水平地表达EDA基因。结论 hUCWJ-MSCs具有向汗腺样细胞分化的潜能。

关键词：汗腺脐带间质干细胞细胞分化再生医学

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