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第八届全国创伤学术会议

作者：姜玉峰谢挺李强王凌峰刘毅叶祥柏李鹰陈华德王润秀付小兵陆树良韩春茂胡大海刘宏伟程飙章宏伟冉兴无解放军306医院全军糖尿病诊治中心武汉市第三医院烧伤整形科哈尔滨医科大学第二附属医院内分泌科内蒙古包钢医院烧伤整形科兰州军区总医院烧伤整形科新疆军区总医院烧伤整形科山东济宁医学院附属医院烧伤整形科广东省人民医院烧伤整形科广西医科大学第一附属医院烧伤整形科解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室上海交通大学附属瑞金医院烧伤研究所浙江大学第二附属医院烧伤整形科第四军医大学附属西京医院烧伤整形科广州暨南大学第一附属医院烧伤整形科广州军区总医院烧伤整形科南京医科大学第一附属医院烧伤整形科四川大学附属华西医院糖尿病足诊治中心

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去分化来源表皮干细胞的分离、培养和鉴定

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中华创伤杂志 2010年第12期26卷 1132-1135页

作者：张翠萍付小兵陈鹏孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射与辐射医学研究所

目的分离培养去分化来源的表皮十细胞（dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs）,并进一步观察其表型特征.方法包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去... 详细信息

目的分离培养去分化来源的表皮十细胞（dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs）,并进一步观察其表型特征.方法包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮十细胞后,移植到BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,移植5 d后收集皮片制备单细胞悬液,流式检测CK10、CK19和β1整合素阳性细胞白分数,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内DDESCs,并采用免疫荧光法和荧光定量PCR法分别检测去分化细胞内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达.结果流式检测结果表明,皮片移植5 d后,CK10阳性细胞减少（P＜0.01）,CK19和β1整合素阳性细胞增加（P＜0.01）.Ⅳ型胶原粘贴分离DDESCs,结果表明,移植皮片组在10 min内约有4.56%的贴壁细胞出现.细胞的表型分析结果表明,DDESCs内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达量类似于原始表皮干细胞（P＞0.05）,但明显高于成熟表皮细胞（P＜0.01）.结论 DDESCs的表型特征与原始表皮干细胞相类似,提示去分化细胞有可能代替原始表皮干细胞应用于创伤部位的修复和再生.

关键词：表皮干细胞去分化细胞分离表型

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不同剂量rhGM-CSF凝胶促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的实验研究

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感染．炎症．修复 2010年第2期11卷 71-75,F0002页

作者：刘波杨永华吴志谷赵立欣黎君友孙同柱付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

目的:观察不同剂量重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)凝胶(商品名为金扶宁)对SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的促进作用并筛选最佳剂量。方法:42只SD大鼠,雌雄各半,随机分为7组:模型组,凝胶基质对照组,金扶宁100、250、500、750和... 详细信息

目的:观察不同剂量重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)凝胶(商品名为金扶宁)对SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的促进作用并筛选最佳剂量。方法:42只SD大鼠,雌雄各半,随机分为7组:模型组,凝胶基质对照组,金扶宁100、250、500、750和1 000 mg/cm^2治疗组。每只大鼠背部制备两个深Ⅱ度烫伤创面,凝胶基质对照组创面于伤后1～10 d每日涂抹凝胶基质100 mg/cm^2,然后于伤后12、14、17和19 d间断创面涂抹凝胶基质100 mg/cm^2;不同剂量金扶宁治疗组创面涂沫相应剂量金扶宁,给药方法及时间同凝胶基质对照组;模型组不予处理。伤后3、7、10、14、17、21 d分别测量痂皮形成及脱落创面数,计算创面上皮化率、创面愈合率,伤后21 d行组织学检查。结果:与模型组和凝胶基质对照组相比,金扶宁各组对烫伤后7～10 d前后创面的融痂脱痂效果非常明显,以250～500 mg/cm^2治疗组疗效最佳(P<0.05)。治疗后7～10 d,金扶宁各组新生上皮较模型组和凝胶基质对照组均显著增多(P<0.05);治疗后14 d,金扶宁500 mg/cm^2治疗组上皮化率[(55.46±6.13)%]较模型组[(48.81士4.99)%]和凝胶基质对照组[(43.17±5.65)%]仍然显著增多,并优于其他剂量治疗组(P<0.05)。治疗后10～14 d,金扶宁250～500 mg/cm^2治疗组创面愈合率较模型组、凝胶基质对照组和其他剂量治疗组显著增高(P<0.05);治疗后21 d,金扶宁250～1 000 mg/cm^2治疗组毛囊再生数量较模型组[(1.531±0.374)/mm^2]和凝胶基质对照组[(1.423±0.346)/mm^2]显著增高,以500～750 mg/cm^2治疗组[分别为(7.145±1.153)/mm^2和(6.250±0.768)/mm^2]明显(P<0.05)。结论:rhGM-CSF凝胶可以促进痂皮形成和脱落、加快上皮生长、促进毛囊再生,增加烧伤创面修复速度并改善修复质量,以500 mg/cm^2剂量治疗效果最佳。

关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子创面愈合修复

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诱生型多能干细胞建系的技术要点

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感染．炎症．修复 2010年第4期11卷 251-253页

作者：刘波付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

诱生型多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPSCs）技术是近几年发展起来的人工诱导细胞去分化（celldedifferentiation）技术,可以通过转录因子诱导细胞核重编程,导致细胞去分化而形成与胚胎干细胞特性近似的多能干细胞系,在... 详细信息

诱生型多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPSCs）技术是近几年发展起来的人工诱导细胞去分化（celldedifferentiation）技术,可以通过转录因子诱导细胞核重编程,导致细胞去分化而形成与胚胎干细胞特性近似的多能干细胞系,在基础研究和临床应用上有广阔前景.目前该技术尚处于研发起步阶段,仍有许多技术缺陷未取得突破和共识,未来需在方法学上进一步研究以形成统一的规范.

关键词：多能干细胞诱生型建系 cell 人工诱导转录因子干细胞系细胞特性

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中国人群体表慢性难愈合创面病原微生物学特征分析

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感染．炎症．修复 2011年第3期12卷 134-138页

作者：姜玉峰付小兵陆树良韩春茂胡大海刘宏伟程飙章宏伟冉兴无谢挺李强王凌峰刘毅叶祥柏李鹰陈华德王润秀解放军第三○六医院全军糖尿病诊治中心北京100101 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 上海交通大学附属瑞金医院烧伤研究所上海200025 浙江大学第二附属医院烧伤整形科浙江杭州310009 第四军医大学附属西京医院烧伤整形科陕西西安710032 广州暨南大学第一附属医院烧伤整形科广东广州511632 广州军区总医院烧伤整形科广东广州510010 南京医科大学第一附属医院烧伤整形科江苏南京210029 四川大学附属华西医院糖尿病足诊治中心四川成都610041 武汉市第三医院烧伤整形科湖北武汉430060 哈尔滨医科大学第二附属医院内分泌科黑龙江哈尔滨150086 内蒙古包钢医院烧伤整形科内蒙古包头014010 兰州军区总医院烧伤整形科甘肃兰州730050 兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科新疆乌鲁木齐830000 山东济宁医学院附属医院烧伤整形科山东济宁272029 广东省人民医院烧伤整形科广东广州510080 广西医科大学第一附属医院烧伤整形科广西南宁530021

目的:研究体表慢性难愈合创面病原微生物学特征,为选择正确的创面抗感染治疗方法提供依据。方法:采用多中心横断性病例回顾调查研究的方法,对2007—2008年我国17家医院中因体表慢性难愈合创面住院治疗患者的住院病历中有关细菌病原学特... 详细信息

目的:研究体表慢性难愈合创面病原微生物学特征,为选择正确的创面抗感染治疗方法提供依据。方法:采用多中心横断性病例回顾调查研究的方法,对2007—2008年我国17家医院中因体表慢性难愈合创面住院治疗患者的住院病历中有关细菌病原学特征进行记录,分析其规律。结果:共有1 488 201个病案被纳入观察对象,从中获得符合入选标准的2 513例体表慢性难愈合创面患者作为研究对象,年龄18 d～96岁,中位年龄58岁。660个病案记录了细菌培养结果,1 853个病案无记录,144个记录显示培养结果为阴性,4个记录无法进行分类。记录革兰阴性杆菌36种,347株;革兰阳性球菌17种,265株;革兰阳性杆菌5种,7株;革兰阴性球菌1种,4株;真菌7种,42株;共计可分类阳性记录66种,665株。金黄色葡萄球菌(不含耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)是最常见致病菌,其次为铜绿假单孢菌、大肠埃希菌、凝固酶阴性葡萄球菌。革兰阳性杆菌、革兰阴性球菌少见。白色念珠菌为最常见真菌。结论:体表慢性难愈合创面感染病原微生物种类繁多、特征复杂,提示在创面病原微生物的抗感染治疗过程中应加强并重视对创面的细菌培养,这样才能给予针对性强的抗生素或其他方式治疗,从而避免抗生素的联用及滥用,降低抗生素滥用造成的耐药性,以及抗生素过度使用而导致的医药费用的额外增加。

关键词：创面难愈合慢性体表病原微生物中国

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Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响

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第三军医大学学报 2010年第16期32卷 1716-1719页

作者：张翠萍陈鹏付小兵孙同柱解放军总医院第一附属医院创伤外科全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射与辐射医学研究所电磁和激光生物学实验室北京100850

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响。方法差速贴壁法分离人成熟表皮细胞。并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组又分为氯化锂(LiCl,20mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形... 详细信息

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响。方法差速贴壁法分离人成熟表皮细胞。并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组又分为氯化锂(LiCl,20mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形态变化,并采用Westernblot检测表皮细胞内β-catenin的表达水平,免疫组织化学法检测表皮细胞表面标志性蛋白CK10、CK14、CK19和β1整合素的表达变化。结果人表皮细胞内β-catenin的表达在被LiCl(2.15±0.54)和GSK-3β(2.58±0.65)抑制子诱导后分别比对照组(0.71±0.23)增加了2倍和2.5倍(P<0.01)。而且诱导后细胞体积变小变圆,细胞核、细胞质比例变大。免疫组织化学检测结果表明,诱导前表皮细胞高表达CK10,部分细胞表达CK14,CK19和β1整合素表达阴性;诱导后已无CK10阳性细胞存在,有部分CK14阳性细胞,而且CK19和β1整合素的表达呈强阳性。结论 Wnt/β-catenin通路活化可引起人成熟表皮细胞的去分化,即Wnt/β-catenin通路可能是调控人表皮细胞去分化的关键环节。

关键词：表皮细胞 Wnt/β-catenin信号通路表型特征去分化

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慢性伤口诊疗指导建议

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中华烧伤杂志 2010年第5期26卷 390-402页

作者：韩春茂孙华凤姜丽萍涂倩董超群付小兵浙江大学医学院附属第二医院烧伤科杭州400038 温州医学院护理学院解放军总医院基础医学所第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目前由于引起慢性伤口的原因不同、对照研究难度较大、各地条件不一,其经验总结和指南也各有差异.为了规范慢性伤口诊疗,笔者在复习国内外文献和相关指南的基础上,撰写了以下慢性伤口诊疗指导建议,供大家在实践中应用并逐渐完善.

关键词：慢性伤口诊疗国内外指南

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盐酸法舒地尔对脂肪干细胞向表皮样细胞分化的影响

盐酸法舒地尔对脂肪干细胞向表皮样细胞分化的影响

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第二十次中日整形外科学术交流会暨中国康复医学会修复重建外科第十七次学术交流会暨第四届全国颅颌面整形美容外科专业组学术会议暨第一次修复重建外科学会皮瓣学组学术会议

作者：沙德潜付小兵张翠萍孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的观察Rho分子信号通路阻断剂盐酸法舒地尔(HA1077)对脂肪干细胞向表皮样细胞分化的影响。方法采用酶消化法,消化、分离人脂肪组织,获得人脂肪干细胞。流式检测第3代培养的细胞的CD44、CD34及CD49d的表达以鉴定其为hASC。用不同培养... 详细信息

目的观察Rho分子信号通路阻断剂盐酸法舒地尔(HA1077)对脂肪干细胞向表皮样细胞分化的影响。方法采用酶消化法,消化、分离人脂肪组织,获得人脂肪干细胞。流式检测第3代培养的细胞的CD44、CD34及CD49d的表达以鉴定其为hASC。用不同培养基设不同诱导组[诱导组2:培养液2(基础培养基+20umol/LHAl077)、诱导组3:培养液3(70%基础培养基+30%成纤维细胞培养基上清液+10 ng/LEGF)、诱导组4:培养液4(20μmol/LHA1077+培养液3)]与组1即对照组(基础培养基培养)作比较,诱导20d时1～4组均用流式细胞仪检测CK19,免疫组化检测CK19、CK10。结果流式细胞仪检测各实验组CK19的表达阳性率分别为(0.23±0.010)%、(0.35±0.020)%、(9.73±0.800)%、(17.65±0.998)%(n=3),20d时第2组的细胞形态仍为原来的长梭形成纤维细胞状结构,细胞紧密排列成片,与空白对照组细胞形态变化差别不大。第4组细胞形态由原来的长梭形逐渐变粗变短,其细胞形态变化较其它组出现早.对人ADSCs向表皮样细胞分化有促进趋势。免疫组化检测示第3、4组有CK19、CK10表达,第4组较第3组阳性率增高,对照组为阴性结果。结论单纯的盐酸法舒地尔不具有使人脂肪干细胞向表皮样细胞分化的能力;一定浓度的盐酸法舒地尔对人脂肪干细胞向表皮样细胞分化有促进作用。

关键词：细胞分化人脂肪干细胞盐酸法舒地尔

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重组人Oct4透膜蛋白的制备和鉴定

重组人Oct4透膜蛋白的制备和鉴定

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作者：刘波付小兵张翠萍孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的构建pET30a-TAT-Oct4重组子,表达具有细胞膜穿透能力的TAT-Oct4融合蛋白。方法人工合成编码TAT蛋白转导域的DNA片段,插入载体pET30a后再连接人Oct4基因,组成pET30a-TAT-Oct4重组表达子,转化大肠杆菌,IPTG诱导TAT-Oct4融合蛋白表达,... 详细信息

目的构建pET30a-TAT-Oct4重组子,表达具有细胞膜穿透能力的TAT-Oct4融合蛋白。方法人工合成编码TAT蛋白转导域的DNA片段,插入载体pET30a后再连接人Oct4基因,组成pET30a-TAT-Oct4重组表达子,转化大肠杆菌,IPTG诱导TAT-Oct4融合蛋白表达,经组氨酸亲和层析柱纯化,FITC标记融合蛋白,观察其透膜能力。结果成功构建了高表达pET30a-TAT-Oct4的重组子,纯化表达了TAT-Oct4融合蛋白,通过对融合蛋白的表达纯化及活性分析,证实了TAT的蛋白转导作用。结论利用生物工程技术人工合成了重组人Oct4透膜蛋白,为细胞去分化提供了新的诱导技术。

关键词：重组子 TAT

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表皮干细胞(hESCs)转分化与病理性瘢痕形成的相关性

表皮干细胞(hESCs)转分化与病理性瘢痕形成的相关性

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作者：雷永红解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的探讨转化生长因子TGF-β1诱导表皮干细胞(hESCs)转分化与病理性瘢痕形成的相关性。方法采用改良的Ⅳ型胶原选择黏附法分离、培养表皮干细胞,检测表皮干细胞表面标志物β1整合素和CK19鉴定,第三代表皮干细胞

关键词：病理性瘢痕 hESCs

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