检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2008年第3期25卷 391-393页

作者：英兰孙晓艳付小兵崔明玉刘文忠伊海英高瑗解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 内蒙古医学院组织胚胎学教研室内蒙古医学院人体解剖学教研室总后勤部管理保障局北京郑常庄干休所

目的探讨表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法人表皮角质形成细胞（HEK）体外培养至24代，细胞体积膨大，形态发生明显改变。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导48h后，观察细胞贴壁培养4、12、24、48、72h时的生长及集落形成情况... 详细信息

目的探讨表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法人表皮角质形成细胞（HEK）体外培养至24代，细胞体积膨大，形态发生明显改变。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导48h后，观察细胞贴壁培养4、12、24、48、72h时的生长及集落形成情况。以同期培养的表皮细胞作为阴性对照，采用免疫组织化学的方法检测实验组及对照组，B1整合素、CK19、CK14、CK10在表皮细胞中的表达差异；流式细胞仪测定细胞周期的改变。结果bFGF诱导培养48h后老化的表皮细胞周围分散出现幼稚型细胞，这些细胞体积小，形态均一，折光性强，核浆比大，并呈克隆样生长。免疫组织化学染色结果显示，bFGF诱导培养后，表皮细胞中CK19、CK14表达增强，而CK10表达减弱。流式结果显示：bFGF诱导培养后，细胞周期中G0／G1的细胞为53．08％，S期细胞为32．71％，G2期细胞为14．21％，而对照组中处于G0／G1、S期及G2期的细胞分别为63．9％、18．98％及17．12％。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型克隆形成细胞，具体机制需要进一步深入研究。

关键词：表皮细胞分化干细胞免疫组织化学

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糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中皮肤神经末梢再生的研究

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中华老年多器官疾病杂志 2008年第5期7卷 404-407,421页

作者：程飚刘宏伟陈葵李勤孙同柱付小兵盛志勇解放军广州军区总医院整形外科广州市510010 暨南大学第一附属医院整形外科广州市510630 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京市100037 解放军总医院基础医学所北京市100853

目的观察糖尿病大鼠与正常大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中神经末梢的再支配情况与创面愈合的关系。方法非糖尿病大鼠(n=12)与糖尿病大鼠(n=12)制成相同的全层皮肤缺损创面愈合模型。于伤后3d、7d和14d采取创面皮肤标本,用组织病理HE和S... 详细信息

目的观察糖尿病大鼠与正常大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中神经末梢的再支配情况与创面愈合的关系。方法非糖尿病大鼠(n=12)与糖尿病大鼠(n=12)制成相同的全层皮肤缺损创面愈合模型。于伤后3d、7d和14d采取创面皮肤标本,用组织病理HE和SP抗体免疫组织化学染色技术检测创面肉芽再生与再上皮化情况,并对肉芽创面内周围神经末梢再生情况进行观察。结果糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面愈合的时间延长,其周围神经末梢的数量较正常组明显减少,再生速度缓慢,肉芽组织中微血管和胶原形成的能力明显降低。结论糖尿病大鼠创面的愈合障碍与神经组织再生延迟相关。

关键词：伤口愈合糖尿病神经末梢再生

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人表皮干细胞分离培养和纯化鉴定的进展

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感染．炎症．修复 2008年第4期9卷 240-242页

作者：李富付小兵刘文忠内蒙古医学院基础医学院解削学教研室内蒙古呼和浩特010059 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

皮肤体现出很强的再生能力,是由于表皮基底层中的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)终身不断自我更新、持续分化以取代终末分化细胞,从而在维持组织结构的更新、细胞内环境的稳定及在创伤后创面修复过程中起至关重要的作用。随着... 详细信息

皮肤体现出很强的再生能力,是由于表皮基底层中的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)终身不断自我更新、持续分化以取代终末分化细胞,从而在维持组织结构的更新、细胞内环境的稳定及在创伤后创面修复过程中起至关重要的作用。随着分子生物学、细胞生物学。

关键词：人表皮干细胞分离培养终末分化标记滞留细胞细胞分化纯化鉴定

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碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体的构建

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感染．炎症．修复 2008年第3期9卷 174-176页

作者：伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田高瑗内蒙古医学院内蒙古呼和浩特010059 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 总后勤部管理保障局北京郑常庄干休所北京100039

目的:构建碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因真核表达载体pEGFP-C3-bFGF,为基因水平研究bFGF在表皮细胞去分化过程中的调控机制提供实验参考。方法:参考分子克隆技术,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从PBR322-bFGF质粒中扩增bFGF,同时在其... 详细信息

目的:构建碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因真核表达载体pEGFP-C3-bFGF,为基因水平研究bFGF在表皮细胞去分化过程中的调控机制提供实验参考。方法:参考分子克隆技术,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从PBR322-bFGF质粒中扩增bFGF,同时在其两端引入HindⅢ和EcoRⅠ限制性内切酶酶切位点,将bF-GFcDNA定向插入pEGFP-C3的多克隆位点中,构建真核表达质粒pEGFP-C3-bFGF,并对重组子进行DNA序列测定。结果:电泳初步鉴定获得的连接产物为重组质粒pEGFP-C3-bFGF;对重组子中含有bFGF基因的一段进行测序,测序结果经Vector NTI软件分析,证实获得bFGF基因。结论:将bFGF插入pEGFP-C3的C末端,可以提高bFGF在真核细胞中的表达,而且不影响其目的蛋白的结构和功能,对研究bFGF调控表皮细胞去分化的分子机制具有重要的意义。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因表达载体构建聚合酶链反应

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糖尿病皮肤溃疡PDGF及其受体基因表达和蛋白含量的变化

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内蒙古医学杂志 2008年第6期40卷 643-646页

作者：武香秀刘志跃付小兵陈伟中国人民解放军第291医院内科内蒙古包头014040 内蒙古医学院病理生理教研室内蒙古呼和浩特010059 中国人民解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:观察血小板源性生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)两亚基(A,B)和两种受体(α和β)在正常皮肤和溃疡组织中基因表达和蛋白含量的规律及其与糖尿病溃疡形成的关系。方法:用病理学技术检测溃疡组织和正常皮肤的结构特征... 详细信息

目的:观察血小板源性生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)两亚基(A,B)和两种受体(α和β)在正常皮肤和溃疡组织中基因表达和蛋白含量的规律及其与糖尿病溃疡形成的关系。方法:用病理学技术检测溃疡组织和正常皮肤的结构特征后,提取8例糖尿病溃疡组织和8例正常皮肤的总RNA后,分离mRNA,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测这4种基因在不同组织中的表达变化,用west-ern blot方法检测这4种蛋白含量的变化规律。结果:在正常皮肤组织内,PDGFR-α和PDGFR-β的基因表达较强,蛋白含量较高;而在溃疡组织中这两种受体的基因表达水平显著降低(P<0.05),蛋白含量分别是正常皮肤的47.3%和35.2%,含量显著减少(P<0.05);而PDGF-A和PDGF-B基因表达水平和蛋白含量在正常皮肤和溃疡组织内差异不显著(P>0.05)。结论:糖尿病溃疡创面难愈性修复可能与PDGFR-α和PDGFR-β基因和蛋白表达水平下降,引起PDGF与受体结合发生障碍相关。

关键词：血小板源性生长因子受体溃疡皮肤糖尿病

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大鼠小面积全层皮肤缺损创面模型的制备

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感染．炎症．修复 2008年第1期9卷 64-64页

作者：赵京禹付小兵雷永红韩冰孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

大鼠小面积全层皮肤缺损创面是研究创伤愈合过程和一些药物对创伤愈合影响常用的动物模型。模型中创面大小、形状和深度的一致性是保证实验结果准确的前提条件。我们参考文献报道的几种致伤创面的方法,制备了大鼠全层皮肤缺损创面,创面... 详细信息

大鼠小面积全层皮肤缺损创面是研究创伤愈合过程和一些药物对创伤愈合影响常用的动物模型。模型中创面大小、形状和深度的一致性是保证实验结果准确的前提条件。我们参考文献报道的几种致伤创面的方法,制备了大鼠全层皮肤缺损创面,创面之间具有较好的均一性。现将制备方法介绍如下。

关键词：全层皮肤缺损制备方法面模型小面积大鼠创伤愈合动物模型愈合过程

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体外诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

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解放军医学杂志 2007年第10期32卷 1023-1027页

作者：蔡飒付小兵孙同柱王君韩冰韩兵盛志勇解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路。方法分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Weste... 详细信息

目的建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路。方法分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Western blot法检测双氧水处理后ERK信号通路相关蛋白的表达情况。结果双氧水处理后,表皮细胞干细胞标志物(CK19、β1整合素、Oct4和p63)表达增加,分化细胞标记物(CK10)表达减少,ERK信号通路中相关的磷酸化蛋白表达增强。以PD98059阻断ERK通路的活化后,双氧水诱导的表皮细胞表型逆转受到了抑制。结论ERK通路参与了双氧水诱导的表皮细胞去分化过程。

关键词：去分化表皮细胞有丝分裂素激活蛋白激酶类

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去分化:一种新的干细胞来源

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中华医学杂志 2007年第8期87卷 573-575页

作者：蔡飒付小兵盛志勇解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

修复与再生是生物界中普遍存在的现象。当生物体某一组织或器官发生损伤或丢失时，机体在一定条件下能够形成一个新的组织或器官，二者在结构和功能上几乎完全一样，这个过程称为再生。在不同的生物种群中，再生的潜能和机制存在很大差... 详细信息

修复与再生是生物界中普遍存在的现象。当生物体某一组织或器官发生损伤或丢失时，机体在一定条件下能够形成一个新的组织或器官，二者在结构和功能上几乎完全一样，这个过程称为再生。在不同的生物种群中，再生的潜能和机制存在很大差异。对于一些低等的无脊椎动物，如蚯蚓，当身体被切成两截之后，它们能轻而易举再生出两个新的，遗传性完全相同的个体。两栖动物，如蝾螈，也具有强大的再生能力，它们能通过去分化过程产生完整的四肢，脊柱，尾巴，视网膜，晶状体以及上下颌等。哺乳动物的再生能力则非常有限，由于发育过程中，细胞发生不可逆的定向分化，他们只能依靠体内为数不多的干细胞储备来对受损的组织进行修复。目前，研究者正探索从三个途径提高哺乳动物的再生能力：（1）将干细胞、祖细胞或分化细胞直接移植于受损组织；（2）将细胞种子支架植入受损组织；（3）通过激活体内现存的干细胞或促进损伤组织周围分化细胞发生去分化以获得多分化潜能细胞来诱导机体自身的再生能力。其中，通过外部干预提高自身再生能力具有更重要的应用价值。因此，本文将集中阐述这方面的工作和已取得的进展。

关键词：干细胞来源去分化再生能力受损组织哺乳动物细胞发生分化潜能损伤组织

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人成纤维细胞生长因子7的基因克隆和蛋白鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第14期11卷 2629-2632页

作者：韩兵陈伟付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京市100037

目的:构建人成纤维细胞生长因子7的重组原核表达质粒pGEX-4T-3-FGF7,并诱导其基因在大肠杆菌DH5α中大量表达,纯化蛋白并检验生物学活性。方法:实验于2006-12在本实验室完成。采用逆转录-聚合酶链反应技术,从人皮肤成纤维细胞内扩增编... 详细信息

目的:构建人成纤维细胞生长因子7的重组原核表达质粒pGEX-4T-3-FGF7,并诱导其基因在大肠杆菌DH5α中大量表达,纯化蛋白并检验生物学活性。方法:实验于2006-12在本实验室完成。采用逆转录-聚合酶链反应技术,从人皮肤成纤维细胞内扩增编码人成纤维细胞生长因子7的cDNA序列,以DNA重组技术将获得的目的基因片段连接至原核表达载体pGEX-4T-3上,经抗生素筛选挑取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序。同时应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定。超滤纯化蛋白后以四甲基偶氮唑盐法测定其在不同浓度作用下对人表皮角化细胞系生长的影响。结果:克隆出的成纤维细胞生长因子7基因的cDNA包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分,含有成纤维细胞生长因子7基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3-hFGF7在DH5α细菌体内能够表达,并且随着诱导时间的延长,成纤维细胞生长因子7基因的表达量增加,重组人成纤维细胞生长因子7蛋白主要存在于包涵体中。在所测浓度范围内该蛋白可以剂量依赖模式促进人表皮角化细胞系细胞在体外分裂增殖。结论:人成纤维细胞生长因子7基因可以在原核细胞中获得表达并具有促角质细胞增殖的生物活性,为深入研究该蛋白在皮肤创伤愈合中的具体作用奠定了基础。

关键词： FGF7基因原核表达载体融合克隆纯化组织构建

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进一步重视创面处理中的几个重要环节

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中华烧伤杂志 2007年第1期23卷 13-15页

作者：付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室、解放军总医院基础医学研究所北京100037

创面处理贯穿于整个创（烧）伤治疗的始终，是该领域最重要、最基本的问题之一。20余年来，由于干细胞、组织工程和基因工程等高新生物技术的发展及其在创（烧）伤救治中的应用，使得创面处理的基础理论研究不断深入，临床治疗也有突破... 详细信息

创面处理贯穿于整个创（烧）伤治疗的始终，是该领域最重要、最基本的问题之一。20余年来，由于干细胞、组织工程和基因工程等高新生物技术的发展及其在创（烧）伤救治中的应用，使得创面处理的基础理论研究不断深入，临床治疗也有突破性进展，较大程度上推动了该学科领域的进步。当然，也应看到由于创面的复杂性，该领域仍有许多没解决的问题制约着临床治疗的进展，成为今后一段时间创面处理中不可忽视的重要环节。

关键词：烧伤创伤和损伤修复外科手术干细胞伤口愈合

来源：评论

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