检索结果-内蒙古大学图书馆

创伤外科杂志 2007年第4期9卷 293-295页

作者：付小兵解放军总医院基础医学研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

在现代社会中,各种损伤,包括创伤、战伤以及烧伤等创面的处理十分重要。根据相关经验,一些新的或过去已经建立的治疗技术和方法,如负压引流技术、新型敷料和基因工程生长因子的应用等可能在创面修复中起重要作用。本文强调这些技术的重... 详细信息

在现代社会中,各种损伤,包括创伤、战伤以及烧伤等创面的处理十分重要。根据相关经验,一些新的或过去已经建立的治疗技术和方法,如负压引流技术、新型敷料和基因工程生长因子的应用等可能在创面修复中起重要作用。本文强调这些技术的重要性并概略介绍它们在战(创、烧)伤创面修复领域中的应用。

关键词：创伤修复火器伤烧伤

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人表皮角质细胞系培养过程中细胞生物学行为和表型的变化

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感染．炎症．修复 2007年第4期8卷 199-201,F0003页

作者：蔡飒孙同柱付小兵解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所创伤与修复重点实验室北京100037

目的:获得较高比例的已分化表皮细胞,为表皮细胞去分化研究奠定基础。方法:采用常规表皮细胞培养方法对人表皮角质细胞系(HEK)进行培养和传代。每一代细胞均通过免疫细胞化学染色和Western blot方法进行表皮干细胞和表皮细胞相应标志物... 详细信息

目的:获得较高比例的已分化表皮细胞,为表皮细胞去分化研究奠定基础。方法:采用常规表皮细胞培养方法对人表皮角质细胞系(HEK)进行培养和传代。每一代细胞均通过免疫细胞化学染色和Western blot方法进行表皮干细胞和表皮细胞相应标志物的检测,包括β1整合素、角蛋白19(K19)、角蛋白10(K10)等指标。结果:第1代HEK呈克隆样生长,表皮干细胞标志物β1整合素、K19均有高表达,而K10的表达为阴性。经过数次传代,细胞克隆形成数目减少,细胞逐渐呈分散分布,K10的表达逐渐增高,而β1整合素、K19的表达呈下降趋势,比例减少。细胞培养至第5～6代时,为其生长的一个转折点,即此时细胞增殖能力开始明显降低,但形态良好,K10表达阳性细胞比例明显增高,而β1整合素、K19表达阳性细胞比例迅速降低。细胞培养至10～11代时,为其生长的第二个转折点,此时细胞几乎丧失增殖能力,数量显著减少,体积变大,核浆比明显减小,完全见不到β1整合素、K19表达阳性细胞,K10染色均为阳性。结论:可以选取适当代数的HEK用于去分化研究,为增加HEK的新用途提供了实验基础。

关键词：人表皮角质细胞系细胞培养表皮干细胞已分化表皮细胞去分化

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雌激素-β受体在大鼠全层皮肤缺损愈合过程中的表达特征及作用的研究

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西北国防医学杂志 2007年第1期28卷 19-22页

作者：程飚刘宏伟付小兵陈葵孙同柱广州军区广州总医院整形外科广东广州510010 暨南大学华侨医院整形外科解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的:探讨雌激素受体在大鼠全层皮肤缺损创面愈合中的表达情况及相关的分子机制。方法:Wistar雄性大鼠30只,在背部制成全层全损皮肤创伤愈合模型,分别于伤后1、3、5、7、15和21 d取材。常规组织学观察和免疫荧光染色,观察皮肤愈合过程... 详细信息

目的:探讨雌激素受体在大鼠全层皮肤缺损创面愈合中的表达情况及相关的分子机制。方法:Wistar雄性大鼠30只,在背部制成全层全损皮肤创伤愈合模型,分别于伤后1、3、5、7、15和21 d取材。常规组织学观察和免疫荧光染色,观察皮肤愈合过程与雌激素受体和原癌基因c-fos的表达变化规律。结果:损伤早期(1-3 d)ER-β和c-fos的表达逐渐增强,5 d时,ER-β和c-fos阳性表达进一步增加,但主要集中在真皮层,表皮层的表达较少。伤后7 d,在创缘部分角质形成细胞开始表达ER-β和c-fos。15 d后,ER-β和c-fos的表达仍维持在较高水平,创缘区域的表达尤其明显。伤后21 d,两者的表达有所减弱,但在愈合部位的表皮层角质形成细胞和真皮层血管内皮细胞仍有较强的表达。结论:雌激素受体系统参与全层皮肤缺损的愈合过程,影响组织的肉芽组织形成,再上皮化以及愈合后的塑性,可能与原癌基因c-fos蛋白的表达有关。

关键词：创伤雌激素受体皮肤全层缺损愈合原癌基因

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钙浓度变化对体外培养人表皮角质细胞增殖的影响

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感染．炎症．修复 2007年第4期8卷 205-208页

作者：李淑云张翠萍付小兵新燕解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 内蒙古医学院内蒙古呼和浩特010059

目的:比较不同钙浓度培养的人表皮角质细胞(HEKs)增殖能力的差异,确定体外培养表皮角质细胞的最适钙浓度。方法:根据培养液中CaCl_2浓度不同,将HEKs分为无钙培养组和0.1、0.3、0.5、1.0 mmol/L CaCl_2培养组。细胞培养3 h后,加钙离子荧... 详细信息

目的:比较不同钙浓度培养的人表皮角质细胞(HEKs)增殖能力的差异,确定体外培养表皮角质细胞的最适钙浓度。方法:根据培养液中CaCl_2浓度不同,将HEKs分为无钙培养组和0.1、0.3、0.5、1.0 mmol/L CaCl_2培养组。细胞培养3 h后,加钙离子荧光染料Fluo-3-AM,显微镜观察细胞内的荧光强度,以反映细胞内钙离子浓度的变化;细胞培养2 d后加Hochest33258核染液,荧光显微镜下观察细胞生长形态;培养3 d时镜下观察细胞的生长情况,并分别用流式细胞术和MTT法分析细胞的增殖情况。结果:钙培养可使细胞内钙离子浓度增加,表现为细胞内Fluo-3-AM荧光强度增强,且随着CaCl_2浓度的增加,荧光强度亦随之增加;在钙浓度为0.3 mmol/L时,细胞的增殖指数最高,为(51.98±4.31)%,增殖活性最强;0.1mmol/L组次之;随着钙浓度的增加,细胞的增殖指数下降,增殖活性受到抑制,0.5～1.0mmol/L钙培养组的增殖指数和增殖活性均明显低于无钙培养组(P均<0.01)。结论:不同钙浓度培养影响表皮角质细胞的增殖能力,钙浓度为0.3 mmol/L时细胞的增殖能力最强。

关键词：钙表皮角质细胞细胞增殖

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创伤修复与肿瘤发生之间的信号联系

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创伤外科杂志 2007年第2期9卷 174-176页

作者：付小兵程飚刘宏伟解放军总医院基础医学研究所第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853 广州军区总医院整形外科广东广州510010

创伤修复与肿瘤发生都是细胞增殖与分化的结果,其涉及许多相似信号通路的调控。重视和了解这些信号通路的共性和个性对于促进创伤修复和控制肿瘤发生具有重要作用,重视这一领域的研究对创伤修复有重要意义。

关键词：创伤修复肿瘤信号转导

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肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

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感染．炎症．修复 2007年第3期8卷 140-143,F0002页

作者：李金凤段海峰吴彬毕建进孙同柱付小兵王立生吴祖泽军事医学科学院放射与辐射研究所实验血液学实验室北京100850 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of in... 详细信息

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。

关键词：肝细胞生长因子增生性瘢痕成纤维细胞腺病毒

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CK10、CK14、p63在移植至裸鼠皮下的人表皮的表达

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解剖科学进展 2007年第3期13卷 200-202页

作者：郭永峰付小兵蔡飒李海红王玉新中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科辽宁沈阳110002 解放军总医院附属第一医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的研究人表皮移植至裸鼠皮下后表皮细胞的表型变化。方法将制备的人包皮表皮皮片移植到裸鼠背部皮下,7d取材。移植前后人表皮皮片标本行HE染色及细胞角蛋白10(CK10)、细胞角蛋白14(CK14)、p63免疫组织化学染色镜下观察。结果人表皮皮... 详细信息

目的研究人表皮移植至裸鼠皮下后表皮细胞的表型变化。方法将制备的人包皮表皮皮片移植到裸鼠背部皮下,7d取材。移植前后人表皮皮片标本行HE染色及细胞角蛋白10(CK10)、细胞角蛋白14(CK14)、p63免疫组织化学染色镜下观察。结果人表皮皮片移植到裸鼠皮下成活率达70%,移植成活的表皮基底层细胞增殖,细胞数增多,新生表皮增厚。免疫组化结果显示,与移植前相比,CK10表达减弱,CK14和p63表达增强,这与人皮肤创伤愈合过程中表皮细胞表型变化一致。结论移植人表皮到裸鼠皮下的方法可以模拟人皮肤创伤愈合过程,是一种可行的在体研究人表皮细胞的实验方法。

关键词：细胞角蛋白10 细胞角蛋白14 p63 人表皮裸鼠

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大鼠脂肪干细胞(rADSCs)转运VEGF基因促进随意皮瓣成活率的研究

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中国美容医学 2007年第1期16卷 7-10页

作者：雷永红付小兵盛志勇鲁开化赵京禹孙同柱韩冰陈伟解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 第四军医大学西京医院整形外科陕西西安710032 内蒙古医学院呼和浩特100059

目的:探讨人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠脂肪干细胞(rADSCs)的稳定表达系统对皮瓣成活的影响。方法:①培养和鉴定大鼠ADSCs,脂质体介导pcDNA3.1-VEGF165质粒转染大鼠(rADSCs),经G418筛选抗性rADSCs并继续培养4周,用ELIS... 详细信息

目的:探讨人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠脂肪干细胞(rADSCs)的稳定表达系统对皮瓣成活的影响。方法:①培养和鉴定大鼠ADSCs,脂质体介导pcDNA3.1-VEGF165质粒转染大鼠(rADSCs),经G418筛选抗性rADSCs并继续培养4周,用ELISA法检测转染后细胞培养上清中VEGF浓度。②Brdu标记被转染rADSCs后,在大鼠背部制备8.0cm×2.5cm的随意型皮瓣模型,实验组(10只大鼠)为注射pcDNA3.1-VEGF165质粒转染的rADSCs悬液到大鼠腹腔,对照组(8只大鼠)为注射2ml被空载体pcDNA3.1(-)转染的rADSCs悬液,术后7天用透明纸描记法记录皮瓣成活范围,记数坐标纸格子并换算为成活面积百分率。分别于术后3天、5天、7天在成活皮瓣的远端切取皮瓣组织标本行免疫组化染色。结果:①ELISA检测4株转染和经G418筛选抗性并继续培养2周的第二代rADSCs上清中VEGF浓度多达(4.21±0.35)pmol VEGF/1×106细胞/48h(x±s,n=4),有2株细胞培养液上清分泌VEGF较强,其余2株细胞相对较弱,均大于对照的空载体转染组和未转染组rADSCs培养液上清中的(0.49±0.15)pmol VEGF/1×106细胞/48h(x±s,n=3)和(0.62±0.86)pmol VEGF/1×106细胞/48h(x±s,n=3),均P<0.01,差异有统计学意义。分泌VEGF较强的rADSCs经Brdu标记后阳性率达到70%以上。②将获得的稳定表达VEGF165的rADSCs移植到随意型皮瓣动物模型体内,7天后实验组皮瓣的成活面积为(59.6±0.52)%,大于对照组的皮瓣成活面积(40.5±0.27)(%P<0.01)。成活皮瓣的远端组织标本切片在显微镜下可见皮下脂肪中有大量核仁深染棕黄色的细胞。结论:ADSCs可以作为载体细胞运送VEGF基因到达皮瓣远端并通过分泌VEGF提高皮瓣的成活面积。

关键词：成体干细胞基因治疗随意型皮瓣

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烧伤血清对大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的动态影响

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中国临床康复 2006年第37期10卷 7-10页

作者：韩冰付小兵陈伟周岗孙同柱白晓东解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的:观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠,取股骨并暴露骨髓腔,用培养基冲洗骨髓腔,将骨髓... 详细信息

目的:观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠,取股骨并暴露骨髓腔,用培养基冲洗骨髓腔,将骨髓细胞悬液用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞并接种于培养瓶,贴壁法培养骨髓间充质干细胞。②用沸水烫伤的方法制作15%TBSAⅢ度烧伤模型。③烧伤3d后经腹主动脉取烧伤大鼠血液,分离血清备用。④同样取正常大鼠血液,分离血清备用。⑤骨髓间充质干细胞传代后分别用含有体积分数为0.1的正常大鼠血清(正常血清组)和烧伤后3d大鼠血清(烧伤血清组)的F-12培养基培养24h及72h。⑥从处理过的间充质干细胞内提取RNA,反转录为cDNA并以cy3-dUTP和cy5-dUT进行标记为荧光探针。⑦以含有5705种基因的寡核苷酸微阵列检测两组细胞基因表达的差异。结果:①烧伤血清处理不同时间后,两组间充质干细胞对比,均有不同数量的基因表达存在明显差异。②烧伤血清处理24h后,两组相比较有4条基因表达存在明显差异。③烧伤血清处理72h后,两组相比较有11条基因表达存在明显差异。④两个时间点差异表达的基因无相同基因。结论:烧伤后大鼠血清刺激间充质干细胞,使其基因表达发生了改变,且随着烧伤血清处理时间的不同,差异表达的基因也发生动态变化。这种改变可能与间充质干细胞受到刺激后参与创面修复有关。

关键词：间质干细胞基因表达烧伤

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人骨髓间充质干细胞表型转化为汗腺细胞的体外研究

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中华创伤杂志 2006年第2期22卷 81-86页

作者：李海红付小兵欧阳云淑周岗陈伟孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培... 详细信息

目的研究体外人骨髓间充质干细胞(MSCs)和汗腺细胞(SGCs)直接和间接共培养条件下骨髓间充质干细胞的表型转化及其机制。方法体外分别分离培养、扩增并鉴定MSCs和汗腺细胞。将培养的MSCs和经47℃高温处理造成热休克的SGCs直接和间接共培养,1周后,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪法检测共培养体系中MSCs的表型改变,W estern b lot测定细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达。结果MSCs和SGCs均呈克隆样生长,MSCs表达CD44、CD105和CD29,不表达CD34、CEA、CK19和CK7;SGCs表达CEA、CK19、CK8和CK7。MSCs与经高温损伤后的SGCs共培养1周后,部分MSCs呈汗腺细胞表型,间接共培养结果示各组MSCs均表达水平相当的ERK,但pERK水平表达不同。结论成人MSCs和热休克的SGCs直接和间接共培养均可诱导MSCs向SGCs表型转化,pERK途径参与这一过程。

关键词：干细胞细胞,汗腺 Ca(2+)-calmodulin dependent protein kinase 表型转化

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