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第八届全国创伤学术会议

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院山东大学第二医院组织工程研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

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pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

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急慢性创面治疗新技术专题系列研讨会之感染创面综合治疗论坛

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院山东大学第二医院组织工程研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的构建展示pComb3-KGF活性肽,促进表皮细胞增殖。方法应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3,将4个KGF基因亚克隆至pComb3;应用噬菌体呈现技术,将插入的基因展示于噬菌体表面;抽提纯化噬菌体DNA,进行... 详细信息

目的构建展示pComb3-KGF活性肽,促进表皮细胞增殖。方法应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3,将4个KGF基因亚克隆至pComb3;应用噬菌体呈现技术,将插入的基因展示于噬菌体表面;抽提纯化噬菌体DNA,进行酶切、PCR和测序鉴定;应用MTT方法检测pComb3-KGF活性肽促进表皮细胞增殖的作用,应用免疫荧光方法检测pComb3-KGF活性肽的细胞亲和力,应用RT-PCR方法检测pComb3-KGF活性肽对KGFR、c-Fos和c-Jun的表达水平的影响。结果应用RT-PCR方法获得目的基因,并构建在噬菌粒pComb3中,目的基因成功表达于载体表面;酶切、PCR和测序结果证实目的基因已成功构建在载体中;MTT结果显示4种pComb3-KGF活性肽均能够促进表皮细胞增殖;免疫荧光检测结果证明其具有较好的细胞亲和力;RT-PCR结果显示KGF及两种pComb3-KGF活性肽能够促进KGFR的表达,4种pComb3-KGF活性肽促进c-Fos和cJun表达的作用均弱于KGF。结论成功构建展示pComb3-KGF活性肽,能够显著促进表皮细胞增殖,但促进肿瘤基因c-Fos和c-Jun的表达弱于KGF。

关键词： pComb3-KGF MTT 细胞增殖活性肽

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pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

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中华医学会烧伤外科学分会第十二届学术年会

作者：宗宪磊姜笃银付小兵中国医学科学院整形外科医院北京 100144 山东大学第二医院组织工程研究所济南 250033 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京

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中国人群体表慢性难愈合创面病原微生物学特征分析

中国人群体表慢性难愈合创面病原微生物学特征分析

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第八届全国创伤学术会议

作者：姜玉峰谢挺李强王凌峰刘毅叶祥柏李鹰陈华德王润秀付小兵陆树良韩春茂胡大海刘宏伟程飙章宏伟冉兴无解放军306医院全军糖尿病诊治中心武汉市第三医院烧伤整形科哈尔滨医科大学第二附属医院内分泌科内蒙古包钢医院烧伤整形科兰州军区总医院烧伤整形科新疆军区总医院烧伤整形科山东济宁医学院附属医院烧伤整形科广东省人民医院烧伤整形科广西医科大学第一附属医院烧伤整形科解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室上海交通大学附属瑞金医院烧伤研究所浙江大学第二附属医院烧伤整形科第四军医大学附属西京医院烧伤整形科广州暨南大学第一附属医院烧伤整形科广州军区总医院烧伤整形科南京医科大学第一附属医院烧伤整形科四川大学附属华西医院糖尿病足诊治中心

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中国人群体表慢性难愈合创面病原微生物学特征分析

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感染．炎症．修复 2011年第3期12卷 134-138页

作者：姜玉峰付小兵陆树良韩春茂胡大海刘宏伟程飙章宏伟冉兴无谢挺李强王凌峰刘毅叶祥柏李鹰陈华德王润秀解放军第三○六医院全军糖尿病诊治中心北京100101 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 上海交通大学附属瑞金医院烧伤研究所上海200025 浙江大学第二附属医院烧伤整形科浙江杭州310009 第四军医大学附属西京医院烧伤整形科陕西西安710032 广州暨南大学第一附属医院烧伤整形科广东广州511632 广州军区总医院烧伤整形科广东广州510010 南京医科大学第一附属医院烧伤整形科江苏南京210029 四川大学附属华西医院糖尿病足诊治中心四川成都610041 武汉市第三医院烧伤整形科湖北武汉430060 哈尔滨医科大学第二附属医院内分泌科黑龙江哈尔滨150086 内蒙古包钢医院烧伤整形科内蒙古包头014010 兰州军区总医院烧伤整形科甘肃兰州730050 兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科新疆乌鲁木齐830000 山东济宁医学院附属医院烧伤整形科山东济宁272029 广东省人民医院烧伤整形科广东广州510080 广西医科大学第一附属医院烧伤整形科广西南宁530021

目的:研究体表慢性难愈合创面病原微生物学特征,为选择正确的创面抗感染治疗方法提供依据。方法:采用多中心横断性病例回顾调查研究的方法,对2007—2008年我国17家医院中因体表慢性难愈合创面住院治疗患者的住院病历中有关细菌病原学特... 详细信息

目的:研究体表慢性难愈合创面病原微生物学特征,为选择正确的创面抗感染治疗方法提供依据。方法:采用多中心横断性病例回顾调查研究的方法,对2007—2008年我国17家医院中因体表慢性难愈合创面住院治疗患者的住院病历中有关细菌病原学特征进行记录,分析其规律。结果:共有1 488 201个病案被纳入观察对象,从中获得符合入选标准的2 513例体表慢性难愈合创面患者作为研究对象,年龄18 d～96岁,中位年龄58岁。660个病案记录了细菌培养结果,1 853个病案无记录,144个记录显示培养结果为阴性,4个记录无法进行分类。记录革兰阴性杆菌36种,347株;革兰阳性球菌17种,265株;革兰阳性杆菌5种,7株;革兰阴性球菌1种,4株;真菌7种,42株;共计可分类阳性记录66种,665株。金黄色葡萄球菌(不含耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)是最常见致病菌,其次为铜绿假单孢菌、大肠埃希菌、凝固酶阴性葡萄球菌。革兰阳性杆菌、革兰阴性球菌少见。白色念珠菌为最常见真菌。结论:体表慢性难愈合创面感染病原微生物种类繁多、特征复杂,提示在创面病原微生物的抗感染治疗过程中应加强并重视对创面的细菌培养,这样才能给予针对性强的抗生素或其他方式治疗,从而避免抗生素的联用及滥用,降低抗生素滥用造成的耐药性,以及抗生素过度使用而导致的医药费用的额外增加。

关键词：创面难愈合慢性体表病原微生物中国

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蜕皮甾酮在体外条件下对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

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南方医科大学学报 2010年第5期30卷 1180-1182,1184页

作者：吴昌昊吴旭付小兵周云峰张元中张子良南方医科大学南方医院胸心血管外科广东广州510515 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所创伤修复重点实验室北京100048

目的分离培养并鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC),观察不同剂量蜕皮甾酮(EDS)对hMSC增殖的影响。方法密度梯度离心法获取hMSC,检测第2代细胞CD44、CD105、CD34及CD29的表达以鉴定其为hMSC。设不同浓度EDS的细胞培养体系(10、25、50和100μg... 详细信息

目的分离培养并鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC),观察不同剂量蜕皮甾酮(EDS)对hMSC增殖的影响。方法密度梯度离心法获取hMSC,检测第2代细胞CD44、CD105、CD34及CD29的表达以鉴定其为hMSC。设不同浓度EDS的细胞培养体系(10、25、50和100μg/ml)与对照组(单纯hMSC培养基,无EDS)作对比,MTT比色法测定hMSC的增殖活力,并行流式细胞周期观察。结果 EDS各浓度组hMSC的MTT吸光度值与对照组比较均有明显差异(P<0.01);EDS浓度为25μg/ml时hMSCMTT吸光度值显著高于其余各组(P<0.01);在EDS浓度为10、50、100μg/ml时,组间吸光度值未见明显差异(P>0.05),但显著高于对照组(P<0.01)。流式细胞周期显示EDS浓度为25μg/ml时hMSC培养体中细胞S期细胞所占比例、增殖指数均明显高于对照组。结论 EDS在一定浓度范围内对体外培养条件下的hMSC具有生长促进作用,该作用在EDS浓度为25μg/ml时最为显著,但是EDS促进hMSC增殖的作用不随剂量的增加而增加。

关键词：蜕皮甾酮人骨髓间充质干细胞细胞增殖

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去分化来源表皮干细胞的分离、培养和鉴定

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中华创伤杂志 2010年第12期26卷 1132-1135页

作者：张翠萍付小兵陈鹏孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射与辐射医学研究所

目的分离培养去分化来源的表皮十细胞（dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs）,并进一步观察其表型特征.方法包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去... 详细信息

目的分离培养去分化来源的表皮十细胞（dedifferentiation-derived epidermal stem cells,DDESCs）,并进一步观察其表型特征.方法包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮.分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮十细胞后,移植到BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,移植5 d后收集皮片制备单细胞悬液,流式检测CK10、CK19和β1整合素阳性细胞白分数,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内DDESCs,并采用免疫荧光法和荧光定量PCR法分别检测去分化细胞内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达.结果流式检测结果表明,皮片移植5 d后,CK10阳性细胞减少（P＜0.01）,CK19和β1整合素阳性细胞增加（P＜0.01）.Ⅳ型胶原粘贴分离DDESCs,结果表明,移植皮片组在10 min内约有4.56%的贴壁细胞出现.细胞的表型分析结果表明,DDESCs内CK19、β1整合素、Oct4和Nanog的表达量类似于原始表皮干细胞（P＞0.05）,但明显高于成熟表皮细胞（P＜0.01）.结论 DDESCs的表型特征与原始表皮干细胞相类似,提示去分化细胞有可能代替原始表皮干细胞应用于创伤部位的修复和再生.

关键词：表皮干细胞去分化细胞分离表型

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慢性伤口诊疗指导建议

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中华烧伤杂志 2010年第5期26卷 390-402页

作者：韩春茂孙华凤姜丽萍涂倩董超群付小兵浙江大学医学院附属第二医院烧伤科杭州400038 温州医学院护理学院解放军总医院基础医学所第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目前由于引起慢性伤口的原因不同、对照研究难度较大、各地条件不一,其经验总结和指南也各有差异.为了规范慢性伤口诊疗,笔者在复习国内外文献和相关指南的基础上,撰写了以下慢性伤口诊疗指导建议,供大家在实践中应用并逐渐完善.

关键词：慢性伤口诊疗国内外指南

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Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响

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第三军医大学学报 2010年第16期32卷 1716-1719页

作者：张翠萍陈鹏付小兵孙同柱解放军总医院第一附属医院创伤外科全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射与辐射医学研究所电磁和激光生物学实验室北京100850

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响。方法差速贴壁法分离人成熟表皮细胞。并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组又分为氯化锂(LiCl,20mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形... 详细信息

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路活化对人表皮细胞表型变化的影响。方法差速贴壁法分离人成熟表皮细胞。并将细胞分为对照组和诱导组,诱导组又分为氯化锂(LiCl,20mmol/L)诱导组和GSK-3β抑制子(15μmol/L)诱导组,诱导6d后观察细胞的形态变化,并采用Westernblot检测表皮细胞内β-catenin的表达水平,免疫组织化学法检测表皮细胞表面标志性蛋白CK10、CK14、CK19和β1整合素的表达变化。结果人表皮细胞内β-catenin的表达在被LiCl(2.15±0.54)和GSK-3β(2.58±0.65)抑制子诱导后分别比对照组(0.71±0.23)增加了2倍和2.5倍(P<0.01)。而且诱导后细胞体积变小变圆,细胞核、细胞质比例变大。免疫组织化学检测结果表明,诱导前表皮细胞高表达CK10,部分细胞表达CK14,CK19和β1整合素表达阴性;诱导后已无CK10阳性细胞存在,有部分CK14阳性细胞,而且CK19和β1整合素的表达呈强阳性。结论 Wnt/β-catenin通路活化可引起人成熟表皮细胞的去分化,即Wnt/β-catenin通路可能是调控人表皮细胞去分化的关键环节。

关键词：表皮细胞 Wnt/β-catenin信号通路表型特征去分化

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有关我国再生医学研究的一些思考

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感染．炎症．修复 2010年第1期11卷 4-5页

作者：付小兵解放军总医院基础医学研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

组织再生及其相关领域的研究近年来在我国发展十分迅速，许多大学、医院、研究机构以及公司等都涉足于这个领域，标志着一个多学科、跨专业和产学研相结合的再生医学研究正在逐步形成。从学术层面来看，我国科学家在再生医学基础研究的... 详细信息

组织再生及其相关领域的研究近年来在我国发展十分迅速，许多大学、医院、研究机构以及公司等都涉足于这个领域，标志着一个多学科、跨专业和产学研相结合的再生医学研究正在逐步形成。从学术层面来看，我国科学家在再生医学基础研究的某些领域已有明显突破，如证明诱导性多能干细胞（iPS）具有发育的全能性，利用维生素C提高iPS产生率以及有关表皮细胞通过去分化途径转变为表皮干细胞现象的发现等都在国际重要杂志发表了相关结果，引起了较大的反响。

关键词：组织再生医学研究医学基础研究多能干细胞表皮干细胞研究机构分化途径表皮细胞

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