检索结果-内蒙古大学图书馆

中华烧伤杂志 2021年第10期37卷 937-945页

作者：朱冬振姚斌崔晓丽黄沙付小兵解放军总医院医学创新研究部创伤修复与组织再生研究中心北京100048 解放军总医院第四医学中心全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室 100048

目的探讨年龄对人增生性瘢痕硬度和成纤维细胞(Fb)纤维化表型的影响及其可能的分子机制。方法采用实验研究方法。收集2020年1—6月解放军总医院第四医学中心烧伤整形外科收治的10例瘢痕患者(男4例、女6例)手术切除的增生性瘢痕组织和10... 详细信息

目的探讨年龄对人增生性瘢痕硬度和成纤维细胞(Fb)纤维化表型的影响及其可能的分子机制。方法采用实验研究方法。收集2020年1—6月解放军总医院第四医学中心烧伤整形外科收治的10例瘢痕患者(男4例、女6例)手术切除的增生性瘢痕组织和10例患者(男5例、女5例,年龄7~41岁)手术后剩余的正常全层皮肤组织。根据患者年龄,将6例患者[(10.7±1.6)岁]瘢痕组织纳入年轻组,将4例患者[(40.0±2.2)岁]瘢痕组织纳入年长组。对正常皮肤和2组瘢痕组织,行苏木精-伊红(HE)染色观察组织形态,行Masson染色观察胶原形态、排列并测定胶原含量,冻干及金属镀膜后在扫描电子显微镜下观察真皮层胶原纤维微观形态。采用原子力显微镜在液相下测量2组瘢痕组织硬度。取2组瘢痕组织,分离和培养Fb,采用倒置相差显微镜观察其形态,并采用细胞免疫荧光法检测桩蛋白的表达以反映细胞形态,采用细胞免疫荧光法检测促纤维化蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))和Ⅰ型胶原表达及机械力转导相关蛋白Yes相关蛋白(YAP)和增殖相关蛋白Ki67的表达,采用实时荧光定量反转录PCR法检测促纤维化基因TGF-β_(1)、α-SMA和Ⅰ型胶原,抑制纤维化基因TGF-β3及机械力转导相关基因Rho相关激酶1(ROCK1)和YAP mRNA表达。对数据行单因素方差分析、LSD-t检验。结果HE染色可见,正常皮肤表皮层凹凸不平,真皮层可见血管和汗腺等附属器;年轻组、年长组瘢痕组织表皮层均较为扁平,真皮层血管和汗腺等附属器罕见。Masson染色和扫描电子显微镜下可见,正常皮肤胶原纤维排列松散、无序,而2组瘢痕组织胶原纤维排列均较为致密、整齐,且年轻组瘢痕组织胶原纤维较年长组更为致密。年轻组、年长组瘢痕组织胶原含量明显高于正常皮肤组织(t=8.02、3.15,P<0.05或P<0.01),年长组瘢痕组织胶原含量明显低于年轻组(t=4.84,P<0.05)。年长组瘢痕组织真皮层硬度为(50.3±1.1)kPa,明显高于年轻组的(35.2±0.8)kPa(t=11.43,P<0.05)。2组瘢痕Fb在倒置相差显微镜下及经细胞免疫荧光法观察,在形态上无明显差异。年长组瘢痕Fb细胞质中Ⅰ型胶原和TGF-β_(1)表达较年轻组明显升高,2组瘢痕Fb细胞质中α-SMA表达相近。年长组瘢痕Fb细胞质和细胞核中YAP表达较年轻组明显增多,2组瘢痕Fb细胞核中Ki67表达无明显差异。年长组瘢痕Fb中TGF-β_(1)和Ⅰ型胶原mRNA表达量明显高于年轻组(t=2.87、4.85,P<0.05或P<0.01),TGF-β3 mRNA表达量明显低于年轻组(t=3.36,P<0.05),α-SMA mRNA表达量与年轻组无明显差异(t=1.14,P>0.05)。年长组瘢痕Fb中ROCK1和YAP mRNA表达量明显高于年轻组(t=2.98、7.60,P<0.05或P<0.01)。结论年长者皮肤损伤后更容易发生瘢痕愈合,其分子机制可能是由于创面愈合过程中会产生硬度较高的细胞外基质成分使得组织硬度增加,从而激活ROCK和YAP/转录共激活因子PDZ结合基序基因的表达,进而促进促纤维化基因和蛋白的表达。

关键词：瘢痕硬度成纤维细胞年龄纤维化基因和蛋白机械转导基因和蛋白

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自制毛囊再生乳膏对小鼠皮肤创面毛囊再生的影响

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解放军医学院学报 2021年第3期42卷 319-326页

作者：孙浩汤茂孙梦黎秦华马奎梅谨瑜赵安东付小兵解放军总医院医学创新研究部创伤修复和组织再生研究中心北京100853 解放军总医院第四医学中心全军创伤修复与组织再生重点实验室皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048 天津医科大学天津300070 中国医学科学院严重创伤救治和组织修复与再生医学创新单元北京100048 解放军总医院第一医学中心组织再生与创面修复科北京100853

背景创面愈合时无毛囊等皮肤附属器再生是创面修复领域的难题。小分子化合物能够调控细胞增殖与分化,促使成熟体细胞再分化为具有增殖能力的前体细胞或其他细胞系,还能够靶向调控信号通路与代谢进程,是一种促进皮肤及附属器原位再生的... 详细信息

背景创面愈合时无毛囊等皮肤附属器再生是创面修复领域的难题。小分子化合物能够调控细胞增殖与分化,促使成熟体细胞再分化为具有增殖能力的前体细胞或其他细胞系,还能够靶向调控信号通路与代谢进程,是一种促进皮肤及附属器原位再生的安全有效的方法。目的本研究拟通过小分子化合物组合探索其促进创面毛囊再生的效果及机制。方法选取C57BL/6小鼠45只,雌性,体质量(20±5)g。以打孔器配合眼科剪制作小鼠背部双侧皮肤全层缺损创面动物模型,左侧创面为用药侧,右侧创面为对照侧。以负载CHIR-99021、Purmorphamine、Tofacitinib和SJ000291942四种小分子化合物的凡士林药膏(以下简称毛囊再生乳膏)连续涂抹小鼠背部皮肤全层缺损创面28 d,通过常规HE染色、Masson染色以及免疫组织化学染色分析创面愈合和毛囊再生情况。结果用药组与对照组小鼠背部创面愈合率无统计学差异,提示毛囊再生乳膏对创面愈合速度无显著影响。HE染色发现,毛囊再生乳膏处理创面14 d左右,用药组创面表皮形成毛囊上皮芽基细胞,真皮中出现毛乳头细胞。28 d可见用药组创面中大量毛囊样结构,免疫荧光染色证实其表达毛囊细胞特征性标志物CK5、CK15、CK17、Noggin,而对照组创面毛囊再生数量极少,用药组与对照组新生毛囊数量差异有统计学意义(17 vs 4,P<0.001)。Masson染色可见用药组与对照组创面胶原纤维密度及排列方式无明显区别,提示毛囊再生乳膏可诱导纤维瘢痕中毛囊再生。免疫组织化学染色显示用药侧创面新生的表皮细胞、毛囊上皮芽基细胞、新生毛乳头细胞中Wnt信号通路和Shh信号通路相关标志物β-catenin、Shh、Gli1显色明显,表明毛囊再生乳膏可能通过激活Wnt、Shh信号通路促进创面毛囊再生。结论本研究自制的毛囊再生乳膏能够通过调控毛囊生长发育过程中的Wnt信号通路和Shh信号通路促进创面愈合时毛囊再生,有望转化为创面治疗药物应用于临床。

关键词：小鼠皮肤创面小分子化合物CHIR-99021 小分子化合物Purmorphamine 小分子化合物Tofacitinib 小分子化合物SJ000291942 毛囊再生

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间充质干细胞在血脑屏障损伤修复中的作用及相关研究进展

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感染．炎症．修复 2018年第4期19卷 250-253,256页

作者：杨劼张翠萍马奎杨思明付小兵解放军总医院第四医学中心全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

中枢神经系统疾病如阿尔茨海默病(AD)、脑卒中(stroke)、创伤性脑损伤(TBI)以及多发性硬化(MS)在全球的发病率日益增高,严重影响患者的生活质量,并且给家庭和社会带来沉重的负担。目前临床上对这些疾病还缺乏有效的治疗方法。有研究发现... 详细信息

中枢神经系统疾病如阿尔茨海默病(AD)、脑卒中(stroke)、创伤性脑损伤(TBI)以及多发性硬化(MS)在全球的发病率日益增高,严重影响患者的生活质量,并且给家庭和社会带来沉重的负担。目前临床上对这些疾病还缺乏有效的治疗方法。有研究发现,血脑屏障(BBB)可在中枢神经系统疾病的发病早期就受到破坏,并且BBB的修复预示着疾病预后的好坏,这意味着BBB不仅可以对中枢神经系统疾病进行早期诊断,而且其功能的修复也可能是治疗这些疾病的关键[1]。中枢神经系统疾病的发病过程主要通过炎症破坏BBB导致持续性神经系统损伤,从而引起中枢神经系统功能障碍,甚至中枢神经系统退行性病变的发生。

关键词：损伤修复血脑屏障间充质干细胞中枢神经系统疾病中枢神经系统功能障碍阿尔茨海默病创伤性脑损伤神经系统损伤

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改性纳米生物玻璃水凝胶的制备及特性初步研究

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中华烧伤杂志 2020年第10期36卷 930-938页

作者：韦丽春张熠杰黄沙姚斌李想陈旭源黎彦付小兵吴旭南方医科大学南方医院惠侨医疗中心胸外科广州510515 解放军总医院基础医学研究所北京100039 解放军总医院第四医学中心全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与再生北京市重点实验室 100048 南方医科大学南方医院急诊科广州510515 南方医科大学南方医院综合科广州510515

目的初步探讨改性纳米生物玻璃水凝胶的制备以及它的理化、生物学特性。方法(1)取400 mL氢氧化钙饱和溶液,加入纳米二氧化硅悬液67 mL,制备纳米生物玻璃悬液,观察其悬浮稳定性。(2)制备终质量分数为10%明胶、1%海藻酸钠的水凝胶,设为对... 详细信息

目的初步探讨改性纳米生物玻璃水凝胶的制备以及它的理化、生物学特性。方法(1)取400 mL氢氧化钙饱和溶液,加入纳米二氧化硅悬液67 mL,制备纳米生物玻璃悬液,观察其悬浮稳定性。(2)制备终质量分数为10%明胶、1%海藻酸钠的水凝胶,设为对照组;在对照组水凝胶基础上加入实验(1)制备的纳米生物玻璃悬液,制备终质量分数为0.5%生物玻璃、10%明胶、1%海藻酸钠的水凝胶,设为实验组。观察2组水凝胶在4、25℃的成胶情况并记录成胶时间及在37℃的熔解情况并记录熔胶时间。另取2组水凝胶,4℃冷浴后用25 g/L的氯化钙溶液交联,用杨氏模量测定仪测量压缩模量。另取2组水凝胶,同前交联后于-20℃冻干,测量相关体积并计算孔隙率。样本数均为3。(3)取12只24 h龄C57BL/6J小鼠乳鼠,分离培养成纤维细胞(Fb),倒置显微镜下观察其形态,并培养第3代Fb,用于后续实验。取Fb,制备细胞浓度为1×10^5个/mL的单细胞悬液,按随机数字表法(下同)分为实验组和对照组,分别加入实验(2)制备的实验组和对照组液态水凝胶,培养12、24、48 h,每组各取3孔,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率。(4)取第3代Fb,制备细胞浓度为(3.0~4.5)×10^7个/mL的单细胞悬液,分为实验组和对照组,每组1管,加入绿色荧光探针DIO染色,分别加入实验(2)中制备的实验组和对照组液态水凝胶9 mL,同前交联后制备载细胞水凝胶。培养3 d,激光共聚焦显微镜下观察细胞在凝胶中的存活情况;同前制备载细胞水凝胶块但不加绿色荧光探针DIO,培养7 d,在扫描电子显微镜下观察细胞在水凝胶中的黏附及伸展情况。(5)取6周龄雌性BALB/c-nu裸鼠12只,分为实验组和对照组,每组6只,在背部制作直径为1 cm的圆形全层皮肤缺损创面,伤后即刻,分别放入1块实验(4)制备的实验组和对照组载细胞水凝胶块。伤后7、14 d,每组取3只裸鼠,收集创面及创周组织,苏木精-伊红染色,观察创面愈合情况。对数据行独立样本t检验。结果(1)纳米生物玻璃粒子可在水中均匀分散,具有良好的悬浮稳定性。(2)2组水凝胶在37℃下均呈熔融状态,均未见粒子析出。实验组和对照组水凝胶在37℃下的熔胶时间分别为5、10 min,在25℃下成胶时间分别为30、180 min,在4℃下成胶时间分别为5、10 min。实验组水凝胶压缩模量为(53±6)kPa,明显高于对照组的(23±6)kPa(t=6.364,P<0.01)。实验组水凝胶孔隙率为(86.1±2.1)%,与对照组的(88.2±4.4)%相近(t=1.210,P>0.05)。(3)细胞呈长梭形,细胞核所占比例较大,符合Fb形态学特征。培养12、24、48 h,实验组细胞存活率为(84±4)%、(89±4)%、(130±10)%,与对照组的(89±5)%、(90±4)%和(130±11)%相近(t=1.534、0.611、0.148,P>0.05)。(4)培养3 d,2组细胞在水凝胶中形态完整,未见细胞核裂解、消失,细胞质保持完好,并且实验组细胞荧光强度明显强于对照组。培养7 d,实验组和对照组细胞在水凝胶中黏附、伸展,且实验组细胞在水凝胶中黏附数明显多于对照组。(5)伤后7 d,对照组、实验组裸鼠创面面积均缩小,且实验组减小更明显,2组裸鼠创面及创周均可见大量炎症细胞分布。伤后14 d,对照组裸鼠创面面积大于实验组,且创面及创周炎症细胞明显多于实验组。结论纳米生物玻璃水凝胶具有良好的理化、生物学特性和载细胞潜能,同时还具有促创面愈合能力,在临床应用方面有着较好的潜力。

关键词：伤口愈合生物相容性材料水凝胶纳米生物玻璃

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伏立诺他对严重烫伤大鼠心脏的保护作用

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武警医学 2021年第2期32卷 119-122页

作者：孟祥熙温海玲郑金光胡森承德医学院附属医院烧伤整形科 067000 解放军总医院第四医学中心烧伤整形医学部烧伤研究所北京100048 解放军总医院第四医学中心全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的研究伏立诺他(SAHA)对严重烫伤大鼠心脏的保护作用及机制。方法雄性SD大鼠48只,随机分为假烫组、烫伤组和SAHA组,每组16只,烫伤组和SAHA组采用沸水水浴法制作50%TBSAⅢ度烫伤动物模型,伤后即刻腹腔内分别注射0.25 ml生理盐水或SAHA(... 详细信息

目的研究伏立诺他(SAHA)对严重烫伤大鼠心脏的保护作用及机制。方法雄性SD大鼠48只,随机分为假烫组、烫伤组和SAHA组,每组16只,烫伤组和SAHA组采用沸水水浴法制作50%TBSAⅢ度烫伤动物模型,伤后即刻腹腔内分别注射0.25 ml生理盐水或SAHA(7.5 mg/kg,溶于0.25 ml生理盐水),假烫组以37℃水浴代替沸水。每组根据烫伤后3、6 h两个观察时间点,又分为两个亚组,每亚组8只大鼠,分别于烫伤后3 h和6 h两个时间点取大鼠腹主动脉血,测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,然后处死动物取心肌组织,干/湿重法测定心肌组织含水率,TUNEL方法检测心肌凋亡细胞率,caspase-3活性试剂盒测定心肌组织内caspase-3活性。结果烫伤后3、6 h,烫伤组血浆内CK-MB[(2552.9±145.3)U/L,(5418.7±292.9)U/L]水平较假烫组[(585.6±46.1)U/L]明显升高,心肌组织含水率[(77.65±1.75)%,(80.23±1.82)%]较假烫组[(70.12±1.99)%]明显升高,心肌细胞凋亡率[(16.1±0.8)%,(21.5±1.2)%]较假烫组[(0.5±0.1)%]明显升高、caspase-3活性[(0.716±0.052)μmol/mg,(0.912±0.063)μmol/mg]较假烫组[(0.435±0.041)μmol/mg]明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05);而给予SAHA处理后,CK-MB水平[(1642.4±157.2)U/L,(3475.3±187.5)U/L]、心肌组织含水率[(72.31±1.95)%,(75.21±2.00)%]、心肌细胞凋亡率[(11.6±0.6)%,(15.1±0.9)%]、caspase-3活性[(0.557±0.052)μmol/mg,(0.535±0.034)μmol/mg]较烫伤组明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在严重烫伤大鼠治疗中,SAHA能显著降低血浆内CK-MB水平及心肌组织含水率,保护心脏功能,可能与减少心肌细胞凋亡、降低心肌组织内caspase-3活性有关。

关键词：烫伤伏立诺他组蛋白去乙酰化酶抑制剂凋亡

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差速贴壁交换法在C57小鼠骨髓间充质干细胞集落形成实验中的新发现

差速贴壁交换法在C57小鼠骨髓间充质干细胞集落形成实验中的新发现

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：吴旭张振中刘南波付小兵黄沙南方医科大学南方医院惠侨医学中心解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室

目的：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中引入差速贴壁交换法,初步探索骨髓间充质干细胞集落的形成过程.方法：实验一：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中,采用差速贴壁法将骨髓中的细胞按照贴壁的先后顺...

目的：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中引入差速贴壁交换法,初步探索骨髓间充质干细胞集落的形成过程.方法：实验一：在全骨髓法提取C57 小鼠骨髓间充质干细胞的过程中,采用差速贴壁法将骨髓中的细胞按照贴壁的先后顺序进行分离培养,每隔2h 将已接种但仍未贴壁的细胞重新悬浮和接种至新的细胞培养皿中,进而将细胞分为0～2h 组、2h～4h 组、4h～6h 组、6h～8h组、8h～48h 组,并观察和比较其形态特征和生长规律;实验二：选取GFP(+)或GFP(-)的C57 小鼠作为研究对象,分为GFP(+)组和GFP(-)组.全骨髓法提取C57 小鼠骨髓细胞.在细胞混悬液恒温孵育4h 后,悬浮起仍未贴壁的骨髓细胞,在GFP(+)组和GFP(-)组间进行交换,并继续孵育至48h,从而获得了"(0～4h 内贴壁)GFP(+)细胞/(4h～48h内贴壁)GFP(-)细胞"混合组A 及"(0～4h 内贴壁)GFP(-)细胞/(4h～48h 内贴壁)GFP(+)细胞"混合组B.继续原代培养上述两组细胞,并观察其中的集落形成过程.结果：在实验一中：0～2h 组和2h～4h 组的细胞形态和生长规律相似,4h～6h 组、6h～8h 组和8h～48h 组的细胞形态和生长规律相似.重复上述实验,将细胞重新分为0～4h 组和4h～48h组,继续孵育3 天,0～4h 组的细胞悉数凋亡,继续孵育10 天,4h～48h 组的细胞相继凋亡;在实验二中："(0～4h 内贴壁)GFP(+)细胞"和"(4h～48h 内贴壁)GFP(-)细胞"混合培养后分别发现了由"(0～4h 内贴壁)GFP(+)细胞"和"(4h～48h 内贴壁)GFP(-)细胞"形成的细胞集落,两种集落的细胞形态有较大差异.结论：通过全骨髓法获得的C57 小鼠"骨髓间充质干细胞"中至少应该含有两种不同的细胞类型(暂命名为"先贴细胞"和"后贴细胞")."先贴细胞"和"后贴细胞"的贴壁时间不同,但在体外培养时相互依存,并共同参与了"骨髓间充质干细胞"的集落形成、和传代.

关键词：

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