检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 1997年第1期17卷 56-59页

作者：刘丽谢宝树冷爱军解放军空军总医院分子生物学研究中心

本文报道了一种高活性人肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）突变体与人白细胞介素－６（ＩＬ－６）的融合蛋白在大肠杆菌中表达产物的纯化及其对Ｌ９２９细胞和人骨髓瘤细胞的细胞毒作用。结果表明，该融合蛋白既具有ＴＮＦ抗肿瘤活性，又具有对高... 详细信息

本文报道了一种高活性人肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）突变体与人白细胞介素－６（ＩＬ－６）的融合蛋白在大肠杆菌中表达产物的纯化及其对Ｌ９２９细胞和人骨髓瘤细胞的细胞毒作用。结果表明，该融合蛋白既具有ＴＮＦ抗肿瘤活性，又具有对高表达ＩＬ－６受体的肿瘤细胞特异性的杀伤作用。

关键词：肿瘤坏死因子白细胞介素融合蛋白骨髓肿瘤

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人TPO全长分子在大肠杆菌中的表达及其活性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 1997年第6期17卷 463-470页

作者：刘丽田生礼王艳华芦兴武孟岩谢宝树中国人民解放军空军总医院分子生物学研究中心

利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤＮＡ，在大肠杆菌中表达了人ＴＰＯ全长分子。电镜观察结果，目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的２７％；表达产物经初步纯化后，与ＣＯ... 详细信息

利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤＮＡ，在大肠杆菌中表达了人ＴＰＯ全长分子。电镜观察结果，目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的２７％；表达产物经初步纯化后，与ＣＯＳ－７细胞中表达的人ＴＰＯ３５３个氨基酸全长分子分别做ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体内活性分析，结果表明，原核与真核系统表达的ＴＰＯ均具有明显促进血小板生成的作用。这为进一步研究ＴＰＯ的糖基化与其生物学活性及半衰期关系打下基础。

关键词：血小板生成素基因表达

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通用引物聚合酶链反应一次检测4种疱疹病毒DNA

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中华医学检验杂志 1995年第5期18卷 279-282页

作者：蔡庆陈友纯刘红巾向培德姜建东林万明解放军空军总医院空军临床分子生物学研究中心

为了能一次性分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型、爱泼斯坦巴尔病毒、人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝... 详细信息

为了能一次性分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型、爱泼斯坦巴尔病毒、人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶ＢａｍＨＩ或ＳｍａＩ酶切扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述４种病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法。敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到１ｆｇＤＮＡ，相当于６个病毒颗粒，且引物仅对４种疱疹病毒扩增。用建立的ＰＣＲ法和酶切分型法检测病毒性脑炎患者脑脊液和慢性宫颈炎患者宫颈分泌物中的疱疹病毒，取得较好结果。该法的建立为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、判定药物疗效和流行病学研究等提供了有效的手段。

关键词：人疱疹病毒聚合酶链反应 DNA 引物

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丹参和碱性成纤维细胞生长因子对正加速度重复暴露大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响(英文)

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中国临床康复 2006年第27期10卷 156-157,160页

作者：刘红巾蔡庆姜建东占志朱美财解放军空军总医院全军航空病研究中心北京市100036 解放军空军总医院分子生物学研究中心北京市100036

背景:正加速度引起急性脑功能障碍及其防护是航空医学研究的重要课题之一,但其病理机制尚不清楚,防护措施有待进一步探讨。目的:观察诱导型一氧化氮合酶在正加速度重复暴露大鼠脑组织中的表达变化,分析碱性成纤维细胞生长因子和丹参对... 详细信息

背景:正加速度引起急性脑功能障碍及其防护是航空医学研究的重要课题之一,但其病理机制尚不清楚,防护措施有待进一步探讨。目的:观察诱导型一氧化氮合酶在正加速度重复暴露大鼠脑组织中的表达变化,分析碱性成纤维细胞生长因子和丹参对反复高正加速度暴露致脑损伤的防护作用。设计:随机对照动物实验。单位:解放军空军总医院分子生物学研究中心。材料:实验于2000-04/08在解放军空军总医院分子生物学研究中心完成。选用健康清洁级SD大鼠20只,按随机数字表法分为5组,即对照组、正加速度暴露组、碱性成纤维细胞生长因子组、丹参组和生理盐水组,每组4只。方法:将所有大鼠固定于动物离心机的转臂上,头朝向离心机轴心。除对照组外,其余各组大鼠正加速度暴露G值为+14Gz,增长率1.5G/s,峰值持续时间45s,共作用3次,两次中间间歇30min。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤,所承受的G值为+1Gz。碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组大鼠分别于离心前30min和离心后即刻腹腔注射碱性成纤维细胞生长因子(100μg/kg)或丹参注射液(15g/kg),生理盐水组则给予等量生理盐水。于暴露后6h麻醉断头取脑,保存于液氮内用于RNA的提取。用半定量反转录聚合酶链反应方法检测各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平,以相对表达量即诱导型一氧化氮合酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶的比率来计算。主要观察指标:各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平。结果:各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平比较:①正加速度重复暴露组显著高于对照组[0.452±0.014,0.065±0.008(P<0.01)]。②碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组显著低于正加速度暴露组[0.196±0.010,0.183±0.011,0.452±0.014(P<0.01)]。结论:正加速度重复暴露可引起大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶mRNA表达增加,它可能在反复高正加速度暴露致脑损伤中起重要作用,而碱性成纤维细胞生长因子和丹参对正加速度暴露所致的脑损伤具有防护作用。

关键词：丹参加速度一氧化氮合酶基因表达成纤维细胞生长因子碱性

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用飞行时间质谱研究尿素对重组人肝再生增强因子的修饰作用

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生物化学与生物物理学报 2003年第4期35卷 355-359页

作者：潘韵何国庆李茹冰易学瑞孔祥平浙江大学生物系统工程与食品科学学院空军广州医院解放军传染病研究中心分子生物学室空军广州医院解放军传染病研究中心分子生物学室杭州310029 广州510620

为研究尿素在变性、复性过程中对重组人肝再生增强因子 (recombinanthumanaugmenterofliverregeneration ,rhALR)的修饰作用及被修饰后蛋白质的结构和生物活性 ,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 (MALDI TOF MS)测定蛋白质分子... 详细信息

为研究尿素在变性、复性过程中对重组人肝再生增强因子 (recombinanthumanaugmenterofliverregeneration ,rhALR)的修饰作用及被修饰后蛋白质的结构和生物活性 ,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 (MALDI TOF MS)测定蛋白质分子量及以胰蛋白酶酶解后的蛋白质各肽段的分子量 ,验证蛋白质是否被修饰 ,以急性肝损伤动物模型检测被修饰后蛋白质的生物活性。结果包涵体用尿素变性、复性 ,再经纯化获得的rhALR分子量为 30780 ,比理论分子量 30 0 98增加 6 82 ,且含有赖氨酸残基的酶解肽段分子量增加 4 3。采用盐酸胍变性、复性 ,再经纯化获得的rhALR分子量为 30 0 87,与理论值基本吻合。含赖氨酸残基的酶解肽段分子量亦正常。说明尿素可对rhALR蛋白肽链上的赖氨酸残基修饰。活性实验表明虽然尿素分解释放的氰酸盐在变性复性过程中能与蛋白质肽链上赖氨酸的ε氨基结合 ,造成rhALR蛋白质分子量增加 ,但被修饰的rhALR仍能提高四氯化碳致肝损伤小鼠的存活率。

关键词：重组人肝再生增强因子基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱尿素化学修饰

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血小板生成素突变体的克隆和扩增及其融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的研究

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中华血液学杂志 1997年第12期18卷 634-637页

作者：田生礼刘丽冯彪刘及白求恩医科大学预防医学院解放军空军总医院分子生物学研究中心

目的：通过获得编码血小板生成素（Ｔｐｏ）成熟肽Ｎ端１～１９６个氨基酸的突变体ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＪＭ１０９中的表达，为Ｔｐｏ进一步的结构和功能研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术，将ＰＣＲ产... 详细信息

目的：通过获得编码血小板生成素（Ｔｐｏ）成熟肽Ｎ端１～１９６个氨基酸的突变体ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＪＭ１０９中的表达，为Ｔｐｏ进一步的结构和功能研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术，将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９载体并测序，然后克隆到表达载体ｐＭＡＬ－ｃ２上。结果：转化重组质粒ｐＭＡＬ－ＭＢＰ／ＴｐｏＭ的大肠杆菌经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷诱导４～５小时，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白（ＭＢＰ／ＴｐｏＭ）的分子量约为６．３万。薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的３７％。结论：经ＰＣＲ方法扩增的Ｔｐｏ基因突变体可在大肠杆菌中高效表达，为Ｔｐｏ突变体的进一步结构和功能研究以及Ｔｐｏ抗体的制备打下了基础。

关键词：血小板生成素突变体融合蛋白基因表达

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应用增强化学发光法检测人巨细胞病毒DNA

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中华医学检验杂志 1994年第5期17卷 287-289页

作者：蔡庆卢强陈友纯林万明北京中国人民解放军空军总医院空军临床分子生物学研究中心

用增强化学发光法（ＥＣＬ）检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。该检测系统用戊二醛将辣根过氧化酶与ＨＣＭＶ特异片段结合制备酶标基因探针。探针与靶ＤＮＡ杂交后，酶催化检测系统中发光底物，再经增强剂作用将光信号放大，杂交信... 详细信息

用增强化学发光法（ＥＣＬ）检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。该检测系统用戊二醛将辣根过氧化酶与ＨＣＭＶ特异片段结合制备酶标基因探针。探针与靶ＤＮＡ杂交后，酶催化检测系统中发光底物，再经增强剂作用将光信号放大，杂交信号通过Ｘ光自显影。经狭缝杂交证明ＥＣＬ的敏感性达到０．２ｐｇ同源ＤＮＡ，且仅与ＨＣＭＶＤＮＡ杂交。用ＥＣＬ检测４２例巨细胞包涵体病（ＣＩＤ）患儿和２０例正常同龄儿童尿中ＨＣＭＶＤＮＡ，结果阳性率分别为５４．８％和３５．０％。与病毒分离相比较，ＥＣＬ的敏感性为９２．３％，符合率为８７．１％，表明用ＥＣＬ检测ＨＣＭＶ是安全、快速、敏感和特异的方法，适用于临床诊断和研究。

关键词：巨细胞病毒核酸杂交化学发光法

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一种高活性人新型TNF的研制

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中华微生物学和免疫学杂志 1996年第4期16卷 254-258页

作者：刘丽田生礼冯彪王国志谢宝树冷爱军中国人民解放军空军总医院临床分子生物学研究中心北京100036 白求恩医科大学

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）除抗肿瘤活性外，还具有其它广泛的生物学活性，但因其严重的毒副作用极大地限制了它的临床应用。在ＴＮＰ结构与功能关系研究的基础上，该文作者利用ＰＣＲ技术构建了一种新型人ＴＮＦ的编码基因，并使其在大肠... 详细信息

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）除抗肿瘤活性外，还具有其它广泛的生物学活性，但因其严重的毒副作用极大地限制了它的临床应用。在ＴＮＰ结构与功能关系研究的基础上，该文作者利用ＰＣＲ技术构建了一种新型人ＴＮＦ的编码基因，并使其在大肠杆菌中进行了高效表达。活性测定结果表明，新型ＴＮＦ对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性较天然型人ＴＮＰ增高了约７１４倍。

关键词：肿瘤坏死因子突变体 PCR 高活性

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血小板生成素突变体融合蛋白表达及纯化研究

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白求恩医科大学学报 1998年第4期24卷 331-333页

作者：田生礼冯彪刘及刘丽白求恩医大预防医学院卫生毒理教研室解放军空军总医院分子生物学研究中心

目的：用大肠杆菌融合蛋白表达载体pMAL—c2构建人血小板生成素突变体融合蛋白表达质粒pMAL-TPOM。方法：采用基因重组和表达、SD-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白纯化技术。结果：SDS-PAGE分析表明，IPTG诱导5h后大肠杆菌JM109表达到最高水... 详细信息

目的：用大肠杆菌融合蛋白表达载体pMAL—c2构建人血小板生成素突变体融合蛋白表达质粒pMAL-TPOM。方法：采用基因重组和表达、SD-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白纯化技术。结果：SDS-PAGE分析表明，IPTG诱导5h后大肠杆菌JM109表达到最高水平，约占大肠杆菌菌体总体蛋白的36．6％。除了大肠杆菌RR1不表达以外，大肠杆菌DH5a、H101均有较高水平的表达，表达产物血小板生成素突变体融合蛋白经SephacyIS-200和DEAE-SepharoseFF层析纯化后，蛋白纯度约为87．6％。结论：人血小板生成素突变体融合蛋白在大肠杆菌JM109、DH5a和H101中均获得高效表达。

关键词：血小板生成素突变体融合蛋白纯化

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利用RT-PCR从人胎肝获得血小板生成素cDNA

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白求恩医科大学学报 1997年第5期23卷 460-462页

作者：田生礼冯彪刘及刘丽白求恩医大预防医学院卫生毒理教研室解放军空军总医院分子生物学研究中心

采用反转录-PCR（RT-PCR）技术，成功地从人胎肝细胞mRNA中获得了血小板生成素（TPO）信号肽和成熟肽编码区cDNA。序列分析表明，该cDNA序列与DeSauveg等报道的人TPO相应的核苷酸序列完全一致，为TPO基因工程的进一步研究打下基础。

关键词：血小板生成素基因克隆 RT-PCR CDNA 胎肝

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