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中华医学会全国第九次感染病学学术会议

作者：刘妍成军徐东平戴久增韩萍陆荫英解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心北京地坛医院传染病研究所北京地坛医院传染病研究所北京地坛医院传染病研究所

目的:构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式激活基因的消减文库,并观察其对细胞原癌基因c-myc的反式激活作用。方法:以重组表达质粒pcDNA3．1(-)-MHBst和空载体pcDNA3．1(-)瞬时转染HepG2细胞,提取细胞mRNA并逆转录... 详细信息

目的:构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式激活基因的消减文库,并观察其对细胞原癌基因c-myc的反式激活作用。方法:以重组表达质粒pcDNA3．1(-)-MHBst和空载体pcDNA3．1(-)瞬时转染HepG2细胞,提取细胞mRNA并逆转录为cDNA,分别标记为实验组与对照组,应用抑制性消减杂交技术,构建MHBst反式激活的cDNA消减文库。针对其中的原癌基因c-

关键词：反式激活消减文库原癌基因 c-myc 羧基末端 HBV

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丙型肝炎病毒基因型分型及临床意义

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肝脏 2006年第6期11卷 416-417页

作者：王琳徐东平张玲霞北京解放军第三二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 100039

全世界约有1.7亿人受到丙型肝炎病毒(HCV)感染,我国HCV感染率为3.2%,感染者约3800万。HCV基因分型与病程发展和治疗应答有一定相关性,例行检测有助于对特定的感染做出判断和有效的临床干预。[第一段]

关键词：丙型肝炎病毒基因型分型临床意义 HCV基因分型感染率治疗应答病程发展临床干预

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羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研究

羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研...

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第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：刘妍徐东平戴久增韩萍陆荫英成军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院感染7科解放军第三○二医院感染9科北京地坛医院传染病研究所

目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝细胞癌(HCC)发生密切相关。研究发现,几乎所有HBV相关的HCC都具有HBV DNA的染色体整合现象,整合到染色体上的HBV DNA 能编码两种类型的反式激活因子,即HBxAg和羧基末端... 详细信息

目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝细胞癌(HCC)发生密切相关。研究发现,几乎所有HBV相关的HCC都具有HBV DNA的染色体整合现象,整合到染色体上的HBV DNA 能编码两种类型的反式激活因子,即HBxAg和羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白。本课题组前期构建了羧基端167位氨基酸截短的HBV中表面蛋白(MHBst),并证明具有反式激活SV40启动子的功能。为了深入探索MHBst反式激活靶基因的机制,本研究拟构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式

关键词：反式激活消减文库原癌基因 c-myc HBV 羧基末端

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DC疫苗诱导免疫效应细胞对BEL7 402和PC3的生长抑制

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中华肝胆外科杂志 2006年第5期12卷 343-345页

作者：孙诚谊孙早喜王福生贵阳医学院附院外科贵阳市550004 解放军第三○二医院传染病研究所生物工程室北京市100039

目的体内外比较多种细胞因子和(或)肿瘤相关抗原(tumorassocated antigen,TAA)培养的正常人树突状细胞(dendritic cell,DC)对肝癌 BEL7402和胰腺癌 PC3的生长抑制。方法体外用人巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人白介素-4(IL-4)、人肿... 详细信息

目的体内外比较多种细胞因子和(或)肿瘤相关抗原(tumorassocated antigen,TAA)培养的正常人树突状细胞(dendritic cell,DC)对肝癌 BEL7402和胰腺癌 PC3的生长抑制。方法体外用人巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人白介素-4(IL-4)、人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、BEL 7402和 PC3肿瘤相关抗原(TAA)和人白介素-2(IL-2)培养正常人 DC 和去 DC 的单核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMC)即免疫效应细胞.5～6 d 后混合培养 DC 和免疫效应细胞1～2 d。体外杀伤实验时效应细胞分无 DC 刺激组(A0组)、多种细胞因子培养的 DC 刺激组(A1组)、多种细胞因子和 TAA 培养的 DC 刺激组(A2组)。体内实验时,裸鼠分肝癌 BEL7402和胰腺癌 PC3两大组,每一大组分三组:阴性对照组(Ⅰ)给等量的1640培养液;预防组(Ⅱ),于接种 BEL7402或 PC3前1～2 d 给免疫效应细胞;治疗组(Ⅲ).待全部裸鼠移植瘤长出时给免疫效应细胞;组Ⅱ、Ⅲ于给予免疫效应细胞后再间断给予 DC 培养上清液。结果体外实验中,DC 诱导免疫效应细胞对 BEL7402的最大杀伤效率为81%,对 PC3的最大杀伤效率为62.4%。体内实验中,两大组中的组Ⅰ、Ⅲ成瘤率为100%(观察12 d);肝癌组Ⅱ成瘤率或成瘤比为1:6(观察30 d);胰腺癌组Ⅱ成瘤率或成瘤比为2:6(观察30 d);于移植瘤产生后的第45天处死所有裸鼠并称瘤体的重量,肝癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ两两比较有极显著性意义(P<0.01)。胰腺癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ有显著性意义(P<0.05),两两比较,组Ⅰ分别与组Ⅱ、Ⅲ有极显著性意义(P<0.01),组Ⅱ与组Ⅲ有显著性意义(P<0.05)。肝癌组和胰腺癌组比较无显著性意义。结论正常人 DC 诱导群体免疫效应细胞对恶性肿瘤的抑制有广谱性。

关键词：免疫疗法树突状细胞单核细胞肝癌胰腺癌

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丙型肝炎高变区1合成肽体外刺激HCV感染PBMC细胞因子分泌的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 279-281页

作者：迟淑萍李靖高蓉苏海滨李伯安李薇程云解放军第三○二医院传染病研究所免疫研究室北京100039 中华医学会

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周... 详细信息

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周血单核细胞(PBMC)后,患者PBMC出现了明显的增殖;(2)培养上清中干扰素γ(IFNγ)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)都有不同程度的提高,白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平并没有提高;(3)增殖细胞主要为CD4阳性淋巴细胞。结论我们设计的HCV高变区1合成肽引发的免疫因子的释放倾向于TH2类因子。

关键词：肝炎病毒属肽合成表位细胞因子类单核细胞/血液丙型肝炎病毒(HCV) 细胞因子分泌 HCV感染高变区1 PBMC

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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A调节新生多肽复合物启动子转录活性的研究

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中华肝脏病杂志 2005年第8期13卷 579-581页

作者：戴久增成军曲建慧纪冬解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验组,同时pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞系作为对照组。用酶联免疫吸附法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞的CAT酶表达活性与pCAT3-NACA和pcDNA3.1(-)-NS5A共转染组HepG2细胞的CAT酶表达活性比较,共转染组A值下降了79.3%。结论HCV NS5A能够抑制NACA 启动子的活性,对NACA的表达具有下调作用。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A 调节作用多肽复合物启动子转录活性 NACA HCV

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乙型肝炎病毒前-S1蛋白结合蛋白小鼠同源基因的生物信息学分析

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 241-244页

作者：成军董菁王建军张健纪冬钟彦伟刘妍王琳北京地坛医院传染病研究所 100011 解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室

目的克隆、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白结合蛋白(PS1BP)小鼠同源基因,并进行初步的生物信息学分析。方法以克隆的人PS1BP基因序列作为参照,利用美国国立卫生研究院国立医学图书馆生物工程信息学中心建立的的核苷酸数据库,以及在线... 详细信息

目的克隆、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白结合蛋白(PS1BP)小鼠同源基因,并进行初步的生物信息学分析。方法以克隆的人PS1BP基因序列作为参照,利用美国国立卫生研究院国立医学图书馆生物工程信息学中心建立的的核苷酸数据库,以及在线核苷酸序列同源性比对分析软件BLASTn,与数据库中已经收录的小鼠cDNA序列进行比对,确定PS1BP小鼠同源基因,比较人和小鼠PS1BP的蛋白质一级结构序列的同源性。对小鼠PS1BP蛋白质一级结构的特点进行生物信息学分析,并确定小鼠PS1BP基因组DNA的结构特点。结果通过不同种属核昔酸序列的同源性比对,确定小鼠PS1BP的cDNA由1455nt组成,编码产物由484aa组成。与人PS1BP蛋白质一级结构的同源性为84.92％(411／484)。对小鼠PS1BP蛋白一级结构序列进行生物信息学分析,发现一系列潜在的蛋白修饰位点。以小鼠PS1BP的cDNA序列作为参照,对高通量基因序列数据库进行同源基因的搜索,发现小鼠的一段基因组DNA序列(AC117576.3)与之同源,进一步的分子结果表明,小鼠的PS1BP基因组DNA含有3段外显子序列,2段内含子序列。结论确定了小鼠PS1BP基因序列,为进一步研究其功能和生物学作用奠定了基础。

关键词：乙型肝炎病毒前-S1蛋白结合蛋白小鼠同源基因生物信息学

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酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白的基因

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 245-248页

作者：王建军成军刘敏杨倩蔺淑梅刘妍解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)相互作用蛋白的基因。方法应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆HBeAg反式激活的新型靶基因HBeAgTP。用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBeAgTP基因,连接... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)相互作用蛋白的基因。方法应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆HBeAg反式激活的新型靶基因HBeAgTP。用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBeAgTP基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析。结果成功克隆出HBeAgTP基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交筛选出阳性菌落24个,经生物信息学分析为15种已知基因。结论成功克隆出HBeAgTP的结合蛋白,包括一些与细胞内蛋白质的转录、翻译、免疫调节及物质和能量代谢相关的基因。

关键词：酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白基因

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

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中华肝脏病杂志 2005年第10期13卷 738-740页

作者：刘妍白桂芹成军吴顺华王琳严福明张玲霞崔玉芳解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A) 相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将聚合酶链反应法扩增的HCV NS4A基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A) 相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将聚合酶链反应法扩增的HCV NS4A基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌,接种在氨苄青霉素-LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCV NS4A基因, 构建表达载体并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在四缺培养基又能在铺有X-α-半乳糖的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落22个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞能量代谢、蛋白翻译合成等多种生物学过程。结论成功克隆出HCV NS4A蛋白在肝细胞内的结合蛋白, 为进一步研究NS4A蛋白的功能、阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。

关键词：肝炎病毒,丙型病毒非结构蛋白基因表达肝细胞结合蛋白酵母双杂交丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白NS4A 结合蛋白基因人肝细胞克隆

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酵母双杂交技术筛选乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP结合蛋白的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第1期19卷 84-86页

作者：陈国凤王琳成军张玲霞李力张健邵清纪冬解放军第三○二医院感染四科北京100039 传染病研究所基因治疗研究中心传染病研究所专家组

目的　筛选与乙型肝炎病毒 (HBV)DNA聚合酶-N末端蛋白 (TP)相互结合的肝细胞蛋白 ,进一步探讨TP的生物学功能。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增TP片段 ,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒 ,转化酵母细胞AH 10 9并在其内表达 ... 详细信息

目的　筛选与乙型肝炎病毒 (HBV)DNA聚合酶-N末端蛋白 (TP)相互结合的肝细胞蛋白 ,进一步探讨TP的生物学功能。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增TP片段 ,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒 ,转化酵母细胞AH 10 9并在其内表达 ,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合 ,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖苷酶 (X-α-gel)上进行双重筛选阳性菌落 ,DNA序列测定并进行生物信息学分析。结果　成功获得了 4 7个与TP特异性结合的阳性克隆 ,包括人类固醇调节元件结合蛋白 1(SREBP1)、RNA聚合酶Ⅱ亚单位 (hsRPB7)、血浆铜蓝蛋白(CP)等 2 1种已知功能蛋白质基因和 19个假设蛋白基因。结论　HBVDNA聚合酶-TP可以与某些已知和未知功能蛋白相互结合。

关键词： TP 乙型肝炎病毒DNA 结合蛋白酵母双杂交技术筛选质粒血浆铜蓝蛋白 DNA聚合酶阳性克隆 RNA聚合酶Ⅱ

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