检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 248-251页

作者：刘妍成军白桂芹严福明吴顺华王琳张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和Xα半乳糖(Xαgal)上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌,接种在氨苄西林LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCVNS4B基因并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在4缺(SD/TrpLeuAdeHis)培养基又能在铺有Xαgal的4缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落5个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞代谢、生物氧化、生长调节等多种生物学过程。结论成功克隆出HCVNS4B蛋白与肝细胞相互作用蛋白,为进一步研究NS4B蛋白的功能,阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。

关键词：肝炎,丙型肝炎病毒属病毒非结构蛋白质类双杂交系统技术丙型肝炎病毒(HCV) NS4B基因结合蛋白基因人肝细胞非结构蛋白克隆

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肝细胞癌和癌旁组织中乙型肝炎病毒DNA整合的克隆性

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中华肝脏病杂志 2005年第5期13卷 389-390页

作者：张沛怡王燕颖成军郎振为杨倩张建中黄德庄杨艳杰黑龙江省医院消化科哈尔滨150036 北京地坛医院传染病研究所北京市佑安医院病理科解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗中心解放军第三0六医院病理科

目前肝细胞癌(HCC)的诊断从临床诊断发展到亚临床诊断.许多并无症状及体征的亚临床期患者亦可获得明确的诊断.但一些体积较小的如直径小于2 cm的肝内瘤样病变与甲胎蛋白(AFP)阴性小HCC,因病灶过小,肝穿刺活体组织检查也不易获得准确诊断... 详细信息

目前肝细胞癌(HCC)的诊断从临床诊断发展到亚临床诊断.许多并无症状及体征的亚临床期患者亦可获得明确的诊断.但一些体积较小的如直径小于2 cm的肝内瘤样病变与甲胎蛋白(AFP)阴性小HCC,因病灶过小,肝穿刺活体组织检查也不易获得准确诊断[1].

关键词：肝细胞癌癌旁组织乙型肝炎病毒DNA 克隆性肿瘤 HCC

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乙型肝炎病毒前-S2蛋白下调诱导型一氧化氮合酶基因启动子的转录活性

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中华肝脏病杂志 2005年第10期13卷 749-753页

作者：郭风劲成军纪冬刘妍张黎颖宋方洲北京地坛医院传染病研究所解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心重庆医科大学分子生物学教研室

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(pre-S2)蛋白对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子转录的调节作用。方法利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp)和3个缺失突变体的基因序列,聚合酶链反应(PCR)分别扩增iNOSp和3个缺失突变... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(pre-S2)蛋白对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子转录的调节作用。方法利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp)和3个缺失突变体的基因序列,聚合酶链反应(PCR)分别扩增iNOSp和3个缺失突变体的基因序列,分别克隆至报告基因表达载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-iNOSp载体;以构建的这4种报告基因表达载体,分别转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBV pre-S2共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果成功获得iNOS基因启动子和3个缺失突变体的正确克隆,p1-iNOSp、p3-iNOSp启动子和pcDNA3.1 (-)-HBV pre-S2瞬时共转染HepG2细胞时,iNOS启动子的转录活性明显下降,HBV pre-S2蛋白对p1- iNOSp、p3-iNOSp表达活性的抑制率分别是54.7%和79.5%,p2-iNOSp、p4-iNOSp与pcDNA3.1(-)-HBV pre-S2共转染HepG2细胞后,HBV pre-S2蛋白对p2-iNOSp、p4-iNOSp表达活性没有明显的调节作用。重复试验得到了相似的结果。结论HBV pre-S2蛋白在细胞内的表达对iNOS启动子的转录活性具有明显的下调作用。

关键词：肝炎病毒,乙型启动子一氧化氮合酶,诱导型诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 乙型肝炎病毒(HBV) preS2蛋白基因启动子转录活性下调作用 HepG2细胞系

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抑制性消减杂交技术克隆和筛选丙型肝炎病毒F蛋白的反式调节基因

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中华肝脏病杂志 2005年第9期13卷 660-663页

作者：郭江成军纪冬赵龙凤高学松刘妍吴顺华北京地坛医院传染病研究所 100011 解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心山西医科大学第一附属医院

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA,克隆HCV F蛋白反式激活相关基因。方法以HCV F表达质粒pcDNA3.1(-)-F转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1 (-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经... 详细信息

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA,克隆HCV F蛋白反式激活相关基因。方法以HCV F表达质粒pcDNA3.1(-)-F转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1 (-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆聚合酶链反应后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCV F蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到56个200-1000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中28个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得19种编码基因,其中2个为未知功能的新基因。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。

关键词：肝炎病毒,丙型反式激活(遗传学) F蛋白抑制性消减杂交技术克隆聚合酶链反应丙型肝炎病毒反式调节基因筛选 pcDNA3 HepG2细胞

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呼肠病毒相关受体及其介导的信号转导途径

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国外医学（流行病学．传染病学分册） 2005年第6期32卷 361-363页

作者：孙颖辛绍杰貌盼勇解放军第三二医院传染病研究所北京100039

呼肠病毒感染主要是通过与宿主细胞表面的受体相互作用,从而活化细胞内的信号转导途径,最终导致一些新基因的转录和DNA片段的凋亡而引起疾病。本文就呼肠病毒相关受体及其介导的细胞内信号转导途径作了综述。

关键词：呼肠病毒科受体信号转导途径

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CCR5△32、CCR5m303、CCR264I、SDF13′A基因多态性对中国HIV-1感染者预后的影响

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 256-259页

作者：王晓辉冯铁建王福生陈琳石向东金磊深圳市疾病预防控制中心艾滋病防治科 518020 解放军第三○二医院传染病研究所

目的研究CCR5△32、CCR5m303、CCR264I、SDF13′A基因多态性对中国HIV1感染者预后的影响。方法对在深圳地区发现的HIV1感染者进行流行病学调查,应用PCR/RFLP技术分析感染者CCR5△32、CCR5m303、CCR264I、SDF13′A4种基因的多态性,对部... 详细信息

目的研究CCR5△32、CCR5m303、CCR264I、SDF13′A基因多态性对中国HIV1感染者预后的影响。方法对在深圳地区发现的HIV1感染者进行流行病学调查,应用PCR/RFLP技术分析感染者CCR5△32、CCR5m303、CCR264I、SDF13′A4种基因的多态性,对部分人群进行HIV1血浆病毒载量和CD4+细胞计数的检测,判断感染者的潜伏期,使用SPSS11.0统计软件分析基因多态性对感染者病毒载量和潜伏期的影响。结果在189例HIV1感染者中没有发现CCR5△32和CCR5m303突变基因型,SDF13′A的等位基因频率为26.14%,CCR264I的等位基因频率为19.82%。方差分析发现,CCR264I基因野生型与杂合型的两组HIV1感染者人群病毒载量对数的大小差异无统计学意义(P=0.272),两组人群潜伏期的长短差异无统计学意义(P=0.662)。SDF1基因野生型、杂合型和纯合型的3组HIV1感染者人群病毒载量对数的大小差异有统计学意义(P=0.001),但3组人群潜伏期的长短差异无统计学意义(P=0.228)。结论CCR264I基因突变对中国汉族HIV1感染者病毒载量没有明显影响,因而也不影响感染者的潜伏期。SDF13′A基因突变对于病毒载量有降低作用,但对延长感染者潜伏期可能没有作用。

关键词： HIV-1 遗传学技术基因频率预后 HIV-1感染者 CCR2-64I 基因多态性 SDF1 中国汉族 CCR5△32

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A基因酵母表达载体的构建及表达

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肝脏 2005年第4期10卷 297-298页

作者：刘妍白杜芹成军王琳蔺淑梅黄燕萍戴久增解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心

丙型肝炎病毒（HCV）是一种单股正链RNA病毒，在HCV丝氨酸蛋白酶和宿主细胞信号肽酶的联合作用下，裂解成为10余种结构和非结构蛋白。其中，HCV NS4A蛋白作为一种非结构蛋白形式，是NS3丝氨酸蛋白酶裂解活性的辅因子，并参与NSSA蛋白磷... 详细信息

丙型肝炎病毒（HCV）是一种单股正链RNA病毒，在HCV丝氨酸蛋白酶和宿主细胞信号肽酶的联合作用下，裂解成为10余种结构和非结构蛋白。其中，HCV NS4A蛋白作为一种非结构蛋白形式，是NS3丝氨酸蛋白酶裂解活性的辅因子，并参与NSSA蛋白磷酸化修饰和免疫应答的调节。为了进一步研究NS4A蛋白在肝细胞内的功能，我们在酵母细胞中表达了NS4A蛋白。

关键词：丙型肝炎病毒(HCV) NS4A蛋白非结构蛋白酵母表达载体 NS3丝氨酸蛋白酶 A基因单股正链RNA病毒蛋白磷酸化细胞信号免疫应答

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应用基因芯片技术对乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节基因的研究

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肝脏 2005年第3期10卷 189-191页

作者：陈国凤成军王琳张健邵清刘妍李莉张玲霞解放军第三0二医院感染七科北京100039 北京地坛医院解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 京解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 解放军第三0二医院专家组北京100039

目的应用基因表达谱芯片(基因芯片)技术检测乙型肝炎病毒DNA聚合酶(HBVDNAP)三个功能域[(N末端蛋白(TP),逆转录酶DNA多聚酶(PR),核糖核酸酶H(RNaseH)]的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明HBVDNAP对肝细胞基因表达... 详细信息

目的应用基因表达谱芯片(基因芯片)技术检测乙型肝炎病毒DNA聚合酶(HBVDNAP)三个功能域[(N末端蛋白(TP),逆转录酶DNA多聚酶(PR),核糖核酸酶H(RNaseH)]的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明HBVDNAP对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能。方法以常规分子生物学技术分别构建真核表达载体pcDNA3.1()TP,pcDNA3.1()PR和pcDNA3.1()RNaseH,以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1()的HepG2细胞进行DNA芯片分析。结果TP有111条基因表达水平上调,88条基因表达水平下调。PR有79条基因表达水平上调,90条基因表达水平下调。RNaseH有113条基因表达水平上调,109条基因表达水平下调。结论应用基因芯片成功筛选HBVDNAP三个功能域蛋白转染细胞后的差异表达基因,为进一步研究HBVDNAP的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据。

关键词：基因芯片技术乙型肝炎病毒病毒DNA 聚合酶反式调节基因免疫调节

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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP13的克隆

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传染病信息 2005年第4期18卷 177-179页

作者：宫嫚成军纪冬刘妍郭江张黎颖王建军张健李筠解放军第三○二医院病毒性肝炎研究室北京100039 北京市地坛医院传染病研究所北京100011

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多... 详细信息

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增新基因序列。结果获得新基因的全长序列,并测序证实,命名为 X 蛋白反式激活蛋白13(XTP13)。结论成功克隆 XTP13,为进一步阐明 HBxAg 在 HBV 感染中的分子生物学机制奠定基础。

关键词：乙型肝炎病毒 X抗原反式激活

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甘草甜素抑制肝星状细胞增殖作用的研究

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肝脏 2005年第3期10卷 225-226页

作者：王志凌成军刘妍张连峰北京地坛医院传染病研究所 100011 解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心郑州大学第一附属医院消化科

肝星状细胞的激活、增殖导致大量的细胞外基质产生，在肝纤维化的发生和发展中起着重要作用。本实验通过研究体外甘草甜素对肝星状细胞增殖的抑制作用，了解甘草甜素防治肝纤维化的细胞学机制，为甘草甜素应用于临床防治肝纤维化提供实... 详细信息

肝星状细胞的激活、增殖导致大量的细胞外基质产生，在肝纤维化的发生和发展中起着重要作用。本实验通过研究体外甘草甜素对肝星状细胞增殖的抑制作用，了解甘草甜素防治肝纤维化的细胞学机制，为甘草甜素应用于临床防治肝纤维化提供实验基础和理论依据。

关键词：甘草甜素肝星状细胞细胞增殖抑制作用肝纤维化中医药疗法

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