检索结果-内蒙古大学图书馆

肝脏 2005年第1期10卷 24-26页

作者：刘妍成军王建军白桂芹王志凌郭风劲纪冬崔玉芳北京解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室

目的　应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法　以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B... 详细信息

目的　应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法　以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1( )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,进行抑制性消减杂交分析。将富集的二次PCR产物与T A载体连接 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增后进行测序及同源性分析。结果　文库扩增后得到 3 3个阳性克隆 ,经菌落PCR分析显示其中 2 8个克隆含有大小不等的 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。测序及同源性分析显示 ,12种已知基因编码蛋白 ,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS4B反式激活靶基因。结论　成功构建了HCVNS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为进一步阐明HCVNS4B反式调节的靶基因在肝炎。

关键词： NS4B 非结构蛋白反式激活基因克隆化研究丙型肝炎病毒(HCV) 聚合酶链反应(PCR) cDNA消减文库抑制性消减杂交分析反式激活相关基因 HepG2细胞反式激活靶基因分子生物学机制同源性分析基因编码蛋白蛋白编码基因

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病毒性肝炎临床免疫学特点和免疫细胞治疗

病毒性肝炎临床免疫学特点和免疫细胞治疗

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2005年北京地区肝病、感染学术年会

作者：王福生解放军第三○二医院全军传染病研究所全军艾滋病和病毒性肝炎重点实验室

本文介绍了实验室多年来从事HBV/HCV感染的免疫学特征研究,结合国内外以及我们自己在肝炎细胞免疫学方面进展进行了介绍。

关键词：病毒性肝炎免疫学免疫细胞

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乙型肝炎病毒e抗原基因作为酵母双杂交体系结合域载体的构建及表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第2期18卷 158-161页

作者：李伯安戚扬舒翠利刘岩陈昊李靖高蓉侯俊程云解放军第三○二医院传染病研究所免疫研究室北京100039

目的　以乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)全基因为外源片段 ,构建酵母双杂交体系中结合域载体 ,研究其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用及毒性作用 ,验证其适用性。方法　根据报道序列设计、合成HBeAg全基因巢式引物 ,取患者血清 ,通过... 详细信息

目的　以乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)全基因为外源片段 ,构建酵母双杂交体系中结合域载体 ,研究其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用及毒性作用 ,验证其适用性。方法　根据报道序列设计、合成HBeAg全基因巢式引物 ,取患者血清 ,通过PCR方法分离HBeAg全基因片段 ,克隆入T载体 ,酶切鉴定及序列测定后 ,克隆入酵母双杂交体系结合域载体pGBKT7,构建pGBKT7 eAg载体。再次酶切鉴定阳性克隆后转入酵母 ,验证毒性作用 ;通过Western blot实验证实外源基因在酵母中的表达 ;并进一步验证自身激活作用。结果　由血清中分离的及 2次酶切鉴定的片段大小分别为 6 5 7bp和 6 39bp ,与预期大小一致 ;序列测定与报道的HBV分离株核酸及氨基酸同源性分别为96 %和 10 0 % ;转人酵母后无毒性及自身激活作用 ;Western blot实验出现阳性与预期大小 (2 4 .3× 10 3)一致的条带。结论　pGBKT7 eAg载体在酵母细胞中表达出融合蛋白 ,进一步验证无自身激活及毒性作用 ,此载体构建成功 ,适用于酵母双杂交体系。

关键词：乙型肝炎病毒e抗原基因表达酵母双杂交体系结合域载体

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传染性非典型肺炎(SARS)患者CD35基因多态性特点和表达水平与发病进程的相关性研究

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中华医学杂志 2004年第3期84卷 235-236页

作者：褚福亮王福生徐东平金磊解放军第三○二医院传染病研究所北京100039

人体红细胞表面表达的CD35分子是补体C3b受体,又称之为CR1.近年来发现CD35基因中发生L型点突变可使红细胞表达CD35分子减少,尤其是在慢性病毒感染患者(如艾滋病、丙型肝炎等)中,红细胞表面CD35表达水平有不同程度的降低,而且此变化与病... 详细信息

人体红细胞表面表达的CD35分子是补体C3b受体,又称之为CR1.近年来发现CD35基因中发生L型点突变可使红细胞表达CD35分子减少,尤其是在慢性病毒感染患者(如艾滋病、丙型肝炎等)中,红细胞表面CD35表达水平有不同程度的降低,而且此变化与病情的进展相关[1,2].在传染性非典型肺炎(SARS)急性感染和发病过程中,患者CD35基因型有何特征?红细胞表面CD35分子有无变化?与疾病的进展之间有何联系?为了回答这些问题,我们分析了北京地区54例SARS患者CD35的基因多态性、在红细胞上表达水平,并据临床资料进一步分析了CD35水平的改变与病程进展之间的关系。

关键词：传染性非典型肺炎 CD35基因基因多态性发病进程相关性急性感染

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利用丙酮酸脱氢酶复合物原核表达产物检测原发性胆汁性肝硬变患者血清自身抗体

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中华检验医学杂志 2004年第5期27卷 318-321页

作者：舒翠莉赵军李靖李伯安高蓉郑宇程云解放军第三○二医院传染病研究所免疫室北京100039

目的建立一种利用重组表达的丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位(PDC-E2)和E3结合蛋白(PDC-E3BP)检测原发性胆汁肝硬变(PBC)患者血清的方法。方法以适当的条件诱导PDC-E2和PDC-E3BP表达质粒pExSecI/PDC-E2和pET28/E3BP,利用表达产物通过酶联... 详细信息

目的建立一种利用重组表达的丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位(PDC-E2)和E3结合蛋白(PDC-E3BP)检测原发性胆汁肝硬变(PBC)患者血清的方法。方法以适当的条件诱导PDC-E2和PDC-E3BP表达质粒pExSecI/PDC-E2和pET28/E3BP,利用表达产物通过酶联免疫吸附试验检测PBC、正常人及其他原因肝硬变患者血清,并与欧盟的检测试剂盒比较。结果显示PDC-E2和PDC-E3BP表达产物检测PBC患者血清中的自身抗体阳性率为93.3％,与欧盟试剂盒比较,总符合率为98.03％。结论建立了利用重组表达丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位和E3结合蛋白检测PBC患者血清中自身抗体的方法,且获得PDC-E2和PDC-E3BP的高效表达产物。

关键词：丙酮酸脱氢酶复合物原核表达产物检测原发性胆汁性肝硬变血清自身抗体

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SARS-CoV特异性抗体产生规律的初步研究

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中华流行病学杂志 2004年第10期25卷 856-858页

作者：貌盼勇朱雷王佑春侯俊胡燕沈宏辉辛绍杰李保森毛远丽庄辉解放军第三○二医院传染病研究所北京100039 中国药品生物制品检定所细胞室北京大学医学部病原微生物学系

目的研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染后体内病毒特异性抗体产生规律。方法收集临床确诊为SARS患者的血清和非SARS人群血清标本,用IgM捕获法、间接法和抗原夹心法三种不同方法检测抗SARS病毒特异性IgM、IgG和总抗体。结果检测14... 详细信息

目的研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染后体内病毒特异性抗体产生规律。方法收集临床确诊为SARS患者的血清和非SARS人群血清标本,用IgM捕获法、间接法和抗原夹心法三种不同方法检测抗SARS病毒特异性IgM、IgG和总抗体。结果检测146份临床诊断为SARS的患者不同发病时间血清标本,三种抗体阳性率分别为61.64％、53.43％和69.86％;SARS病毒特异性IgM、IgG抗体的最早检出时间分别在发病第7天和第12天,特异性IgM抗体最短在发病后42天消失。三种方法检测70份甲型肝炎患者血清时,均有2份非特异阳性反应,检测127份其他病种血清均阴性,1例密切接触SARS患者的医务人员SARS特异性IgG抗体和总抗体均阳性,三种检测方法均不受类风湿因子影响。结论与其他病毒感染相比,SARS病毒感染者的特异性IgM抗体检出时间较晚,且持续时间较短;三种检测方法均有较好的特异性和敏感性,可用于SARS的流行病学调查和临床诊断的确认和补充,但不适用于SARS的早期诊断。

关键词：患者 SARS 血清标本特异性IgM抗体检出特异性抗体发病产生规律确诊检测方法

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HBcAg核酸疫苗与白细胞介素表达质粒联合接种小鼠的免疫应答观察

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中华传染病杂志 2004年第5期22卷 310-313页

作者：黄祖瑚吴欣成军邢益平董菁李军卢山南京医科大学第一附属医院感染病科 210029 解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心美国马萨诸塞大学医学中心基因免疫研究室

目的观察HBcAg核酸疫苗与鼠白细胞介素12(IL12)和白细胞介素18(IL18)表达质粒联合免疫小鼠所诱导的特异性免疫应答。方法小鼠随机分为载体质粒组、HBcAg核酸疫苗组(核酸疫苗组)、HBcAg核酸疫苗+IL12组(C+IL12组)、HBcAg核酸疫苗+IL18组(... 详细信息

目的观察HBcAg核酸疫苗与鼠白细胞介素12(IL12)和白细胞介素18(IL18)表达质粒联合免疫小鼠所诱导的特异性免疫应答。方法小鼠随机分为载体质粒组、HBcAg核酸疫苗组(核酸疫苗组)、HBcAg核酸疫苗+IL12组(C+IL12组)、HBcAg核酸疫苗+IL18组(C+IL18组)和HBcAg核酸疫苗+IL12/IL18组(C+IL12/IL18组)。载体质粒、HBcAg核酸疫苗、IL12及IL18表达质粒经肌内注射法免疫各组小鼠。采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清HBcAg特异性抗体、IgG亚类(IgG1,IgG2a)以及小鼠脾淋巴细胞培养上清液干扰素(IFN)γ含量。采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠特异杀伤性T淋巴细胞(CTL)活性。结果除对照质粒组外,核酸疫苗免疫的各组小鼠均能检出血清抗HBc,C+IL12组、C+IL18组和C+IL12/IL18组的抗HBc终点滴度与C组相比均明显增高(P<0.05)。各组小鼠抗HBcIgG亚类均以IgG2a占优。核酸疫苗免疫组除C+IL12+IL18组外,小鼠脾细胞培养上清液IFNγ水平均显著高于对照质粒组(P<0.01)。C+IL18组和C+IL12/IL18组小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性强于其他各组。结论IL12和(或)IL18表达质粒与HBcAg核酸疫苗联合免疫,具有增强HBcAg核酸疫苗所激发的免疫应答特别是细胞免疫应答的作用。

关键词： HBcAg核酸疫苗白细胞介素表达质粒接种小鼠免疫应答白细胞介素12 白细胞介素18

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肝癌患者自体CIK细胞治疗后免疫活性细胞检测及其临床意义

肝癌患者自体CIK细胞治疗后免疫活性细胞检测及其临床意义

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第八届全国肿瘤生物治疗学术会议

作者：施明王福生雷周云张冰汤紫荣刘敬超范振平解放军第三O二医院传染病研究所生物工程室

目的:观察肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞)回输后,外周血中T细胞亚群及树突状细胞亚群的变化,评价CIK细胞治疗肝癌的临床效果。方法:采用成份血采血机采集13例肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC),经多种细胞因子诱导后,于培... 详细信息

目的:观察肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞)回输后,外周血中T细胞亚群及树突状细胞亚群的变化,评价CIK细胞治疗肝癌的临床效果。方法:采用成份血采血机采集13例肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC),经多种细胞因子诱导后,于培养的第4,7,10,13,15天流式细胞仪检测细胞表型;CIK细胞回输前及回输后取病人外周血,流式细胞仪测定Ⅰ型树突状细胞(DC1)和Ⅱ型树突状细胞(DC2)的比例。结果:诱

关键词：肝癌患者 CIK 细胞治疗免疫活性细胞临床意义

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乙型肝炎病毒新开放读码框架的确定及其意义

乙型肝炎病毒新开放读码框架的确定及其意义

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第九届全军传染病学术研讨会

作者：成军解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗中心北京 100039

乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝部分双链DNA病毒，不仅引起急、慢性病毒性肝炎，而且与肝纤维化(LF)、肝细胞癌(HCC)的发生、发展密切相关。全世界约有3.5亿人受到HBV感染，危害严重。但目前除了一小部分患者对干扰素α(IFNα)或核苷类似... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝部分双链DNA病毒，不仅引起急、慢性病毒性肝炎，而且与肝纤维化(LF)、肝细胞癌(HCC)的发生、发展密切相关。全世界约有3.5亿人受到HBV感染，危害严重。但目前除了一小部分患者对干扰素α(IFNα)或核苷类似物拉米夫定的治疗有一定应答之外，还没有特效的治疗技术和方法。1979年Gelibert等首次报道了HBV DNA的全基因序列，并确定4个主要的开放读码框架(ORF)之后，一直沿用至今。HBV基因组只有3.2 kb，其结构特点是结构基因与调节基因序列之间重叠，甚至结构基因序列之间重叠，HBV DNA序列的利用率之高实属罕见。关于这一紧密DNA结构中是否存在新的编码序列，一直没有进行系统的研究。最近，笔者对于中国HBV流行株的全基因序列进行克隆和序列分析，发现了前-前-s和前-X基因序列，改写了HBV DNA编码基因序列研究的历史。

关键词：乙型肝炎病毒开放读码框架 DNA结构编码序列

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HBcAg生物学特性研究进展

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世界华人消化杂志 2004年第12期12卷 2833-2836页

作者：徐志强成军张鸿飞中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室感染三科北京市100039

HBcAg存在于Dane颗粒的核心,是HBV的结构蛋白即病毒核壳蛋白,具有重要的生物学特性和临床病理意义. HBcAg由HBV基因组的C开放读码区(ORFI)编码,具有高度免疫原性,对HBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要作用.血清HBcAg阳性可提供肝内HBV... 详细信息

HBcAg存在于Dane颗粒的核心,是HBV的结构蛋白即病毒核壳蛋白,具有重要的生物学特性和临床病理意义. HBcAg由HBV基因组的C开放读码区(ORFI)编码,具有高度免疫原性,对HBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要作用.血清HBcAg阳性可提供肝内HBV合成的信息,是病毒存在的直接标志.HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞,肝细胞溶解后HBcAg可直接释放入血,故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度.检测肝组织HBcAg 有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向,推测慢性乙型肝炎的预后.血清和肝组织HBcAg检测具有多种实用价值,值得推荐.

关键词： HBcAg 生物学特性研究进展免疫原性 HBcAg感染

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