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2004年肝病实验室诊断与临床研究专题学术会议

作者：成军 100039 北京解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心

乙型肝炎病毒(HBV)感染,不仅引起急性、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌(HCC)的发生和发展密切相关.数十年来,随着HBV抗原和抗体标志物检测技术的建立及应用,血源性、基因工程疫苗的免疫预防接种,干扰素α(IFNα)以及核苷类似... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)感染,不仅引起急性、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌(HCC)的发生和发展密切相关.数十年来,随着HBV抗原和抗体标志物检测技术的建立及应用,血源性、基因工程疫苗的免疫预防接种,干扰素α(IFNα)以及核苷类似物如拉米夫定等抗HBV药物的临床应用,在一定程度上控制了HBV感染的进一步流行,同时,也改变了HBV感染分布的规律和流行模式.但是,HBV感染的现患病人的治疗仍然是一个十分棘手的问题,而且离我们最终控制HBV感染的流行还有相当的距离.原因是多方面的,其中包括对于HBV的特性还没有全面而深刻的认识,如HBV基因的异质性(heterogenity)与准种(quasispecies)的特点等.本文即探讨了乙型肝炎病毒基因异质性及准种特点研究的临床意义。

关键词：乙型肝炎病毒基因异质性免疫接种

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应用抑制性消减杂交技术克隆HCV NS3蛋白反式激活基因2的上调基因

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世界华人消化杂志 2004年第4期12卷 847-850页

作者：党晓燕成军邓红王建军杨倩刘妍纪冬王春花陕西西安交通大学第二医院感染科陕西省西安市710004 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消文库,克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因. 方法:以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染... 详细信息

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消文库,克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因. 方法:以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建人HCV NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到61个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到100-1000 bp插入片段.挑取30 个插入片段测序分析,得到30个已知功能基因序列. 结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了NS3TP2可能存在的调控机制的线索.

关键词：抑制性消减杂交技术克隆 HCV NS3蛋白反式激活基因2 上调基因细胞凋亡

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应用表达谱芯片技术筛选HBcAg反式调节基因

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世界华人消化杂志 2004年第12期12卷 2886-2890页

作者：徐志强成军张鸿飞王建军刘妍纪冬中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室感染三科北京市100039

目的:筛选与克隆HBcAg激活基因,了解其在体内的调节功能线索及机制. 方法:以分子生物学技术构建HBcAg的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBcAg,以表达质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg 转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解... 详细信息

目的:筛选与克隆HBcAg激活基因,了解其在体内的调节功能线索及机制. 方法:以分子生物学技术构建HBcAg的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBcAg,以表达质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg 转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA.应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析. 结果:HBcAg表达质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确.经基因表达谱芯片分析,29种基因的表达水平上调,17种基因的表达水平下调. 结论:筛选到一些与细胞内信号传导、免疫调节、细胞凋亡、蛋白质翻译合成、肿瘤发生相关的HBcAg反式调节的靶基因.

关键词：表达谱芯片技术筛选 HBcAg 反式调节基因分子生物学技术

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应用噬菌体展示技术筛选HBsAg启动子I的DNA结合蛋白

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世界华人消化杂志 2004年第11期12卷 2737-2739页

作者：杨艳杰成军陈东风王春花黄燕萍吴煜刘敏王建军钟彦伟刘妍张黎颖中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100038 中国人民解放军第三军医大学大坪医院消化内科重庆市400038

目的:通过筛选HBsAg基因启动子Ⅰ(SP Ⅰ,surface promoter Ⅰ)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径. 方法:应用噬菌体展示技术,以HBsAg基因启动子Ⅰ的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮... 详细信息

目的:通过筛选HBsAg基因启动子Ⅰ(SP Ⅰ,surface promoter Ⅰ)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径. 方法:应用噬菌体展示技术,以HBsAg基因启动子Ⅰ的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索. 结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的14个克隆中得到8 个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV表面抗原基因启动子Ⅰ特异结合的肝细胞蛋白,共编码7种蛋白.其中3个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码4-氨基丁酸氨基转移酶、触珠蛋白、复制蛋白等蛋白. 结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBsAg基因启动子Ⅰ的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因.

关键词：噬菌体展示技术筛选 HBsAg 启动子I DNA结合蛋白聚合酶链反应乙型肝炎病毒

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乙型肝炎病毒基因分型的临床意义

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世界华人消化杂志 2004年第7期12卷 1670-1673页

作者：杨艳杰成军陈东风吴煜黄燕萍钟彦伟王春花刘敏中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039 中国人民解放军第三军医大学大坪医院消化内科重庆市400038

虽然近年来对乙型肝炎病毒(HBV)基因组变异已边行了较为系统的研究,但仍有许多问题尚未解决.目前研究的热点集中在HBV基因型的特点及临床意义和HBV聚合酶基因变异与核苷类似物耐药性的研究.根据聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-R... 详细信息

虽然近年来对乙型肝炎病毒(HBV)基因组变异已边行了较为系统的研究,但仍有许多问题尚未解决.目前研究的热点集中在HBV基因型的特点及临床意义和HBV聚合酶基因变异与核苷类似物耐药性的研究.根据聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因型分型法,目前已将前-S基因分为A,B,C,D,E,F,G,H八种基因型.现就HBV基因型分型方法,基因型与肝炎疾病的关系、预后以及与干扰素、拉米夫定等抗病毒疗效相关性的研究作一综述.

关键词：乙型肝炎病毒基因分型聚合酶链反应 PCR-RFLP

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乙型肝炎病毒对c-fos基因表达调节的影响

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世界华人消化杂志 2004年第4期12卷 938-940页

作者：党晓燕成军邓红中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039 西安交通大学第二医院传染科陕西省西安市710004

癌基因(oncogene)是一类编码关键性调控蛋白的正常细胞基因，在正常情况下，不表达或只有有限表达，又称原癌基因(proto-oncogene)，当受到理化等因素刺激时，他们可以异常表达，导致细胞的增生、分化或癌变，众所周知，乙型肝炎病毒(H... 详细信息

癌基因(oncogene)是一类编码关键性调控蛋白的正常细胞基因，在正常情况下，不表达或只有有限表达，又称原癌基因(proto-oncogene)，当受到理化等因素刺激时，他们可以异常表达，导致细胞的增生、分化或癌变，众所周知，乙型肝炎病毒(HBV)不仅可引起急慢性病毒性肝炎，而且与肝纤维化和肝细胞癌(HCC)的发生及发展密切相关，许多实验已证实肝细胞癌变过程涉及多种原癌基因的激活和突变，其中HBV对原癌基因c-fos的激活及表达调节也越来越受到关注。通过对HBV与c-fos之间表达调节的阐述，有助于进一步了解HBV导致HCC的分子学机制。

关键词：乙型肝炎病毒 C-fos基因基因表达癌基因肿瘤

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β_2-微球蛋白对乙型肝炎病毒核心启动子转录活性的调节作用

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世界华人消化杂志 2004年第10期12卷 2491-2494页

作者：高学松成军甄真杨艳杰黄燕萍郭江刘妍戴久增中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039 河北医科大学第三医院感染科河北省石家庄市050051

目的:研究β2-m对核心启动子表达的调节作用方法:根据HBV核心启动子及β2-微球蛋白的序列设计引物,用聚合酶链反应(PCR)的方法分别扩增HBV核心启动子和β2-微球蛋白基因,分别构建HBV核心启动子的报告载体及β2-微球蛋白的真核表达载体,... 详细信息

目的:研究β2-m对核心启动子表达的调节作用方法:根据HBV核心启动子及β2-微球蛋白的序列设计引物,用聚合酶链反应(PCR)的方法分别扩增HBV核心启动子和β2-微球蛋白基因,分别构建HBV核心启动子的报告载体及β2-微球蛋白的真核表达载体,脂质体法瞬时转染HepG2细胞.结果:成功构建HBV核心启动子的报告载体及β2-微球蛋白(β2-m)的真核表达载体.脂质体法瞬时转染HepG2细胞48h后,核心启动子在β2-微球蛋白(β2-m)的影响下,其启动子活性降底2倍.结论:β2-微球蛋白(β2-m)

关键词： β2-微球蛋乙型肝炎病毒核心启动子转录活性调节作用

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核孔复合体相互作用蛋白(NPIP)对乙型肝炎病毒核心启动子转录活性的调节作用

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世界华人消化杂志 2004年第10期12卷 2488-2491页

作者：高学松成军甄真黄燕萍郭江刘妍戴久增中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039 河北医科大学第三医院感染科河北省石家庄市050051

目的:构建HBV核心启动子及NPIP的重组载体,研究NPIP对核心启动子表达的调节作用.方法:根据HBV核心启动子及NPIP的序列设计引物,用聚合酶链反应(PCR)的方法分别扩增HBV核心启动子和NPIP基因,分别构建HBV核心启动子的报告载体及NPIP的真... 详细信息

目的:构建HBV核心启动子及NPIP的重组载体,研究NPIP对核心启动子表达的调节作用.方法:根据HBV核心启动子及NPIP的序列设计引物,用聚合酶链反应(PCR)的方法分别扩增HBV核心启动子和NPIP基因,分别构建HBV核心启动子的报告载体及NPIP的真核表达载体,脂质体法瞬时转染HepG2细胞.结果:成功构建HBV核心启动子的报告载体及NPIP的真核表达载体.脂质体法瞬时转染HepG2细胞48h后,用ELISA法检测β-gal的表达,显示核心启动子在NPIP的影响下,其活性有降低3-4倍.通过体内实验证明NPIP可以下调HBV核心启动子的表达.结论:NPIP明显降低HBV核心启动子的表达,为进一步研究HBV复制的分子生物学机制提供了新的线索.

关键词：核孔复合体相互作用蛋白 NPIP 乙型肝炎病毒核心启动子转录活性调节作用

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应用表达谱芯片技术研究NS5ATP13的反式调节基因

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世界华人消化杂志 2004年第11期12卷 2757-2761页

作者：张黎颖邓红成军党晓燕刘妍蔺淑梅黄燕萍纪冬吴顺华纪泛扑邵清西安交通大学第二医院感染科陕西省西安市710004 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:应用基因表达谱芯片研究HCV非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP13的反式调节基因. 方法:构建NS5ATP13基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)- NS5ATP13,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)- NS5ATP13转染的人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片研究HCV非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP13的反式调节基因. 方法:构建NS5ATP13基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)- NS5ATP13,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)- NS5ATP13转染的人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析. 结果:HepG2细胞经转染NS5ATP13后,有86条差异基因表达,其中46条基因表达增强,40条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化及细胞的信号转导、代谢、凋亡密切相关. 结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了NS5ATP13的反式调节基因,为进一步阐明NS5ATP13的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.

关键词：表达谱芯片技术 NS5ATP13 反式调节基因丙型肝炎病毒外膜蛋白

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传染性非典型肺炎的病原学鉴定及其意义

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中华流行病学杂志 2003年第5期24卷 344-346页

作者：王福生解放军第三○二医院传染病研究所北京100039

2002年11月份在我国广东省最先发现临床上类似肺炎的病例。2003年1月份，我国专家考虑到此病与我国法定的34种传染病不同，确定此为"非典型肺炎"(atypical pneumonias)。由于该病具有起病急、传播快、人群普遍易感和病死率较... 详细信息

2002年11月份在我国广东省最先发现临床上类似肺炎的病例。2003年1月份，我国专家考虑到此病与我国法定的34种传染病不同，确定此为"非典型肺炎"(atypical pneumonias)。由于该病具有起病急、传播快、人群普遍易感和病死率较高等特点，特别是该病很快在我国香港以及世界上20多个国家和地区流行，加上当时病因尚未完全明确，所以引起全球民众、各国政府和科研人员的高度关注。到3月12日，世界卫生组织（WHO）就非典型肺炎向全球发布了卫生警报，并将此病命名为"严重急性呼吸道综合征"( severe acute respiratory syndrome,SARS) 1'-31。近2个多月以来，由WHO负责牵头，组织全世界13个实验室的科研和医务人员合作攻关，通过应用经典的病毒分离和培养、血清学分析和现代分子遗传学技术，分离并鉴定出SARS的主要病原体为一种新型的冠状病毒，后者既是SARS发病的原因，也是疾病进展的前提［L4-,1。现就SASR流行最主要的特点和病原学研究进展等相关问题简介如下。

关键词：传染性非典型肺炎病原学鉴定

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