检索结果-内蒙古大学图书馆

中华检验医学杂志 2001年第2期24卷 118-120页

作者：洪源成军杨守纯北京解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心 100039

　　分子灯塔(Molecular beacons)是近年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术，由纽约市公共健康研究协会的Tyagi等［1］于1996年首先建立。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光，故称为“分子灯塔”。它的... 详细信息

　　分子灯塔(Molecular beacons)是近年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术，由纽约市公共健康研究协会的Tyagi等［1］于1996年首先建立。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光，故称为“分子灯塔”。它的建立为研究核酸分子的组成、含量及对PCR过程中进行实时监测提供了快速、特异、方便的新方法，在基因检测领域有着广阔的应用前景。现试就其构成、原理、热力学特性、优缺点及在基因检测中的应用作一简要综述。　　一、分子灯塔的构成、原理及热力学特性　　分子灯塔是具有“发夹”样结构的单链寡核苷酸探针，一般为含20～30个核苷酸的2部分组成：环状部分及茎部。环状部分为单链核酸，与目标链形成特异的互补结合，茎部的2条核苷酸链互补，形成双链分子，大多含有5对碱基。茎部的末端分别与荧光素(5′端)和淬火物质(3′端)结合，淬火物质大多为4-4′二甲氮基苯偶氮苯甲酸，荧光素和淬火物质因研究目的不同可自行设计。茎部的双链互补结构使末端的荧光素和淬火物质紧靠在一起，因荧光素共振能量转移［2］作用而使荧光被吸收，这样荧光素就不能发光。当分子灯塔的环状部分与目标链特异性结合时，所形成的杂交分子比茎部双链结构更稳定，它的刚性使茎部双链分子分离，也就使荧光素和淬火物质相分离，通过自发构型重组作用，在室温下就可使荧光素发光得以恢复，通过荧光仪或合适配置的显微镜可观察到。在分子灯塔与目标链结合的过程中，因环境温度的不同，存在着3种不同的状态：在低温时与目标链结合，即为结合态，当温度升高至42℃时，分子灯塔与目标链的复合物变性，成为“发夹”样结构，导致荧光强度的下降。当温度升高至54℃时，出现茎部结构的变性，分子灯塔成为松散的随机卷曲状态，荧光强度上升。相比之下，如果分子灯塔与目标链有一个核苷酸不能互补，则解链温度要相应地下降约14℃［3］。

关键词：分子灯塔技术基因检测构成原理热力学特性

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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

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中国病毒学 2001年第3期16卷 220-223页

作者：成军施双双钟彦伟夏小兵王刚王琳刘妍陈菊梅解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有H... 详细信息

利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV E2 ScFv基因的噬菌体克隆 ,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经Ncol/NotI酶切鉴定后 ,该ScFv基因由 75 0bp组成 ,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV E2 ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性 ,对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表述的HCV E2 ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV E2 ScFv的分子量为 2 8kD。为应用HCV E2 ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白单链可变区抗体表达大肠杆菌

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检测HIV-1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制

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肝脏 2001年第S1期6卷 67-68页

作者：侯俊何红霞貌盼勇洪世雯胡燕沈宏辉杨松涛北京解放军第三○二医院传染病研究所病毒室 100039

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中国藏族人群具有低CCR5Δ32、高CCR2b-64I突变型基因频率

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中华医学遗传学杂志 2001年第4期18卷 268-271页

作者：洪卫国王福生金磊邢利和刘明旭杜清友雷周云李江解放军第三二医院传染病研究所北京100039 成都军区卫生部防疫处

目的　调查 CCR5 Δ32、CCR5 m30 3、CCR2 b- 6 4I和 SDF1- 3′A等人类免疫缺陷病毒 (humanimmune deficiency virus- 1,HIV- 1)相关的等位基因在中国藏族人群中的频率和分布情况。方法　随机采集血样 ,提取基因组 DNA,经 PCR或 PCR- RF... 详细信息

目的　调查 CCR5 Δ32、CCR5 m30 3、CCR2 b- 6 4I和 SDF1- 3′A等人类免疫缺陷病毒 (humanimmune deficiency virus- 1,HIV- 1)相关的等位基因在中国藏族人群中的频率和分布情况。方法　随机采集血样 ,提取基因组 DNA,经 PCR或 PCR- RFL P分析 ,计算突变型基因频率 ,并对其群体分布、性别分布以及其相关性进行统计学分析。结果　发现藏族人的 CCR5 Δ32和 CCR5 m30 3突变型基因频率均小于0 .15 % ;SDF1- 3′A和 CCR2 b- 6 4I突变型基因频率分别为 19.2 4%和 2 9.42 %。 4种突变等位基因群体分布均符合 Hardy- Weinberg平衡 ,性别之间差异无显著性。虽然中国藏族人群 CCR2 b- 6 4I的突变型基因频率较高 ,但 CCR5 Δ32和 SDF1- 3′A的突变型基因频率低 ,提示中国藏族人群很可能在遗传上是 HIV- 1易感的人群。结论　中国藏族人群与西方白人相比可能具有低 CCR5 Δ32和高 CCR2 b- 6

关键词：藏族人群低CCR5△32 高CC2b-64I 突变型基因频率艾滋病遗传多态性

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外周血中乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白基因的克隆化与序列分析

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中华肝脏病杂志 2001年第3期9卷 163-165页

作者：董菁成军王勤环王刚施双双刘妍夏小兵斯崇文解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京大学第一医院感染疾病科

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法采用特异性引物设计，以多聚酶链反应（ＰＣＲ）自患者血清中扩增全Ｓ基因片段，测序以明确变异的部位，并与既往已发表的ＨＢＶａｄｒ亚型进行序列比较。结果经... 详细信息

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法采用特异性引物设计，以多聚酶链反应（ＰＣＲ）自患者血清中扩增全Ｓ基因片段，测序以明确变异的部位，并与既往已发表的ＨＢＶａｄｒ亚型进行序列比较。结果经测序发现慢性ＨＢＶ感染者体内存有变异病毒株编码的截短型表面抗原中蛋白基因，并存有ＨＢｓＡｓ和多聚酶区缺陷型病毒基因。结论在外周血中存在ＨＢＶ截短型囊膜蛋白编码基因，可能与患者不良预后有关。

关键词：乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白聚合酶链反应突变准种克隆序列分析

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大鼠肝再生增强因子假基因的克隆化与序列分析

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中华肝脏病杂志 2001年第2期9卷 105-107页

作者：董菁成军刘友昭王勤环王刚施双双斯崇文解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京大学第一医院感染疾病科

目的　研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆ　ｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法　以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）... 详细信息

目的　研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆ　ｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法　以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，连入ｐＧＥＭＴｅａｓｙＶｅｃｔｏｒ后测序。结果ＰＣＲ法扩增出两条产物，其一经测序发现为ＡＬＲ的假基因，预测氨基酸序列与ＡＬＲ的同源性为８８．８％。结论　作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子，大鼠ＡＬＲ存在假基因，提示可能存在ＡＬＲ多基因家族。为研究ＡＬＲ分子的进化规律提供了依据。

关键词：肝再生多聚酶链反应假基因克隆序列分析

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宿主遗传因素与重要传染病发生、发展和结局相关性的研究进展

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肝脏 2001年第S1期6卷 38-40页

作者：王福生张玲霞北京解放军第三○二医院传染病研究所 100039

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抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS_3单链抗体的制备及免疫组织化学研究

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肝脏 2001年第S1期6卷 85-86页

作者：钟彦伟王松山赵景民成军张玲霞北京解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心 100039 北京解放军第三○二医院传染病研究所病理科 100039

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传染病的基因治疗

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肝脏 2001年第S1期6卷 23-31页

作者：成军北京解放军第三○二医院传染病研究所基因研究中心 100039

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乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白与白细胞介素18联合核酸免疫HBV表面抗原转基因小鼠的实验研究

乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白与白细胞介素18联合核酸免疫HBV...

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白真核表达载体并免疫小鼠,并观察同时接种白细胞介素18(IL-18)质粒对基因免疫的辅助作用.方法:构建并验证质粒pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18,肌注C57HBsAg转基因小鼠;3组小鼠分别注射100μg pVR101... 详细信息

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白真核表达载体并免疫小鼠,并观察同时接种白细胞介素18(IL-18)质粒对基因免疫的辅助作用.方法:构建并验证质粒pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18,肌注C57HBsAg转基因小鼠;3组小鼠分别注射100μg pVR1012(4只),pVR1012-M(7只),pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18质粒(7只),每2周1次,共3次.每次免疫2周后眼眶采血,检测血清抗-HBs、HBsAg和丙氨酸氨基转移酶(ALT),并对肝脏进行病理学检查.结果:免疫后未检测出

关键词： HBV 乙型肝炎病毒核酸免疫白细胞介素

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