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中国医师杂志 2009年第5期11卷 603-605页

作者：李冰昱王福生刘慧霞中南大学湘雅医院老年病科湖南长沙410008 解放军第三0二医院传染病研究所生物工程室

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）与临床及病理特点的关系。方法对80例CHB患者进行血清谷丙转氨酶（ALT）、乙肝病毒载量（HBVDNA）及HOMA—IR的检测，并将其与肝组织病理进行相关性分析。结果胰岛素抵抗（IR... 详细信息

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）与临床及病理特点的关系。方法对80例CHB患者进行血清谷丙转氨酶（ALT）、乙肝病毒载量（HBVDNA）及HOMA—IR的检测，并将其与肝组织病理进行相关性分析。结果胰岛素抵抗（IR）随着炎症活动度、纤维化程度的递增而加重。胰岛素水平（FINS）与HOMA-IR在G3级（15．24±7．41，3．51±1．91）高于G2级（10．33±6．28，2．25±1．39）；在S3期（16．65±6．46，3．79±1．50）高于S2期（9．06±4．61，2．02±1．11）。HOMA—IR与年龄、ALT呈正相关（r=0．273，0．224，P〈0．05）。结论CHB患者IR的发生、发展与年龄、肝组织炎症活动度和纤维化程度密切相关。

关键词：肝炎乙型慢性胰岛素抗药性

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DC疫苗诱导免疫效应细胞对BEL7 402和PC3的生长抑制

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中华肝胆外科杂志 2006年第5期12卷 343-345页

作者：孙诚谊孙早喜王福生贵阳医学院附院外科贵阳市550004 解放军第三○二医院传染病研究所生物工程室北京市100039

目的体内外比较多种细胞因子和(或)肿瘤相关抗原(tumorassocated antigen,TAA)培养的正常人树突状细胞(dendritic cell,DC)对肝癌 BEL7402和胰腺癌 PC3的生长抑制。方法体外用人巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人白介素-4(IL-4)、人肿... 详细信息

目的体内外比较多种细胞因子和(或)肿瘤相关抗原(tumorassocated antigen,TAA)培养的正常人树突状细胞(dendritic cell,DC)对肝癌 BEL7402和胰腺癌 PC3的生长抑制。方法体外用人巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人白介素-4(IL-4)、人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、BEL 7402和 PC3肿瘤相关抗原(TAA)和人白介素-2(IL-2)培养正常人 DC 和去 DC 的单核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMC)即免疫效应细胞.5～6 d 后混合培养 DC 和免疫效应细胞1～2 d。体外杀伤实验时效应细胞分无 DC 刺激组(A0组)、多种细胞因子培养的 DC 刺激组(A1组)、多种细胞因子和 TAA 培养的 DC 刺激组(A2组)。体内实验时,裸鼠分肝癌 BEL7402和胰腺癌 PC3两大组,每一大组分三组:阴性对照组(Ⅰ)给等量的1640培养液;预防组(Ⅱ),于接种 BEL7402或 PC3前1～2 d 给免疫效应细胞;治疗组(Ⅲ).待全部裸鼠移植瘤长出时给免疫效应细胞;组Ⅱ、Ⅲ于给予免疫效应细胞后再间断给予 DC 培养上清液。结果体外实验中,DC 诱导免疫效应细胞对 BEL7402的最大杀伤效率为81%,对 PC3的最大杀伤效率为62.4%。体内实验中,两大组中的组Ⅰ、Ⅲ成瘤率为100%(观察12 d);肝癌组Ⅱ成瘤率或成瘤比为1:6(观察30 d);胰腺癌组Ⅱ成瘤率或成瘤比为2:6(观察30 d);于移植瘤产生后的第45天处死所有裸鼠并称瘤体的重量,肝癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ两两比较有极显著性意义(P<0.01)。胰腺癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ有显著性意义(P<0.05),两两比较,组Ⅰ分别与组Ⅱ、Ⅲ有极显著性意义(P<0.01),组Ⅱ与组Ⅲ有显著性意义(P<0.05)。肝癌组和胰腺癌组比较无显著性意义。结论正常人 DC 诱导群体免疫效应细胞对恶性肿瘤的抑制有广谱性。

关键词：免疫疗法树突状细胞单核细胞肝癌胰腺癌

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肝癌患者自体CIK细胞治疗后免疫活性细胞检测及其临床意义

肝癌患者自体CIK细胞治疗后免疫活性细胞检测及其临床意义

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第八届全国肿瘤生物治疗学术会议

作者：施明王福生雷周云张冰汤紫荣刘敬超范振平解放军第三O二医院传染病研究所生物工程室

目的:观察肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞)回输后,外周血中T细胞亚群及树突状细胞亚群的变化,评价CIK细胞治疗肝癌的临床效果。方法:采用成份血采血机采集13例肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC),经多种细胞因子诱导后,于培... 详细信息

目的:观察肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞)回输后,外周血中T细胞亚群及树突状细胞亚群的变化,评价CIK细胞治疗肝癌的临床效果。方法:采用成份血采血机采集13例肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC),经多种细胞因子诱导后,于培养的第4,7,10,13,15天流式细胞仪检测细胞表型;CIK细胞回输前及回输后取病人外周血,流式细胞仪测定Ⅰ型树突状细胞(DC1)和Ⅱ型树突状细胞(DC2)的比例。结果:诱

关键词：肝癌患者 CIK 细胞治疗免疫活性细胞临床意义

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慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群与病程相关性的研究

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肝脏 2003年第2期8卷 18-20页

作者：王敏王福生刘敬超北京解放军第三0二医院传染病研究所生物工程室 100039

目的　对慢性乙型肝炎轻中度、重度和肝硬化患者外周血淋巴细胞亚群的百分比和绝对细胞数进行观察 ,探讨慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的变化与病程的关系。方法　采集 88例慢性乙型肝炎患者柠檬酸钠新鲜抗凝血 ,经流式细胞仪进... 详细信息

目的　对慢性乙型肝炎轻中度、重度和肝硬化患者外周血淋巴细胞亚群的百分比和绝对细胞数进行观察 ,探讨慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的变化与病程的关系。方法　采集 88例慢性乙型肝炎患者柠檬酸钠新鲜抗凝血 ,经流式细胞仪进行免疫分型检测。结果　慢性乙型肝炎重度患者的CD3 + CD4+ 细胞百分比显著低于轻中度患者 (P <0 .0 5 ) ,肝硬化患者的CD3 + 和CD3 + CD8+ 细胞百分比显著低于轻中度患者 (P <0 .0 1)。肝硬化患者CD3 -CD19+ 细胞百分比显著高于重度和轻中度患者 (P <0 .0 1)。CD4/CD8比例在慢性乙型肝炎轻中度、重度和肝硬化患者间无显著差异。肝硬化和重度患者淋巴细胞、CD3 + 、CD3 + CD4+ 、CD3 + CD8+ 细胞的绝对细胞数均显著低于轻中度患者 (P <0 .0 1) ,且肝硬化患者CD3 -CD16+ 5 6+ 细胞的绝对细胞数显著低于轻中度患者 (P <0 .0 5 )。肝硬化患者与轻中度患者的DNA载量分布差异有显著性 (P <0 .0 1) ,其高水平病毒载量的患者比例高于轻中度患者。结论　慢性乙型肝炎轻中度发展为重度和肝硬化的过程中 ,外周血淋巴细胞亚群绝对细胞数随病情的进展显著减少 ,主要表现为CD3 +CD4+ 和CD3 + CD8+ 的T淋巴细胞亚群的百分比进行性降低。

关键词：慢性乙型肝炎外周血淋巴细胞亚群流式细胞术病程相关性

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原代小型猪肝细胞微载体培养及其功能特性

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中国血液净化 2003年第2期2卷 82-85,111页

作者：李保森邹正升王敏游绍莉辛绍杰王福生刘敬超赵军解放军第302医院感染二科北京100039 北京解放军302医院传染病研究所生物工程研究室

目的研究原代小型猪肝细胞微载体培养方法的建立及肝细胞功能特性。方法将3.20×107个的肝细胞及2g/L cytodexTM 3微载体连同40ml含100ml/L Hyclone小牛血清及其他辅助因子的RPMI 1640培养基加入250ml已硅化的方瓶中培养。对不同... 详细信息

目的研究原代小型猪肝细胞微载体培养方法的建立及肝细胞功能特性。方法将3.20×107个的肝细胞及2g/L cytodexTM 3微载体连同40ml含100ml/L Hyclone小牛血清及其他辅助因子的RPMI 1640培养基加入250ml已硅化的方瓶中培养。对不同培养时间的肝细胞进行形态学观察。同时测定不同培养时期肝细胞生物合成及生物转化功能。结果肝细胞产量为6.8×109～8.1×109(7.58±0.57)×109/肝细胞;肝细胞活率为92.0%～99.0％(96.25％±3.10％);肝细胞具有正常肝细胞的超微结构特征;接种培养后肝细胞呈明显的朝CytodexTM 3聚集,二者易相粘贴,粘附在微载体上的肝细胞增殖生长旺盛;当肝细胞数为3.20×107个时,接种后24h肝细胞尿素及白蛋白合成量分别为1.22mmol/L及0.075g/L;随着时间的延长,利多卡因的转化率逐渐增加,在24h时即达到100％。结论使用微载体培养的小型猪肝细胞具有较旺盛的增殖生长能力、良好的生物转化及生物合成功能,可作为体外生物人工肝较为理想的细胞来源。

关键词：肝细胞微载体培养培养基血清辅助因子人工肝

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腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移联合化疗药物治疗恶性淋巴瘤的研究

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中华肿瘤杂志 2002年第6期24卷 529-532页

作者：徐东平王福生 Takao Ohnuma 金磊解放军第三○二医院传染病研究所生物工程研究室北京100039 Division of Medical Oncoloty

目的　探讨腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移在体内外逆转肿瘤细胞中P 糖蛋白(P gp)介导的多重耐药性 (MDR)的作用。方法　构建并纯化制备了含有抗MDR1核酶基因的腺病毒Ad 196MDR1 Rz。在体外 ,用该重组腺病毒转导具有P gp介导的、MDR特... 详细信息

目的　探讨腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移在体内外逆转肿瘤细胞中P 糖蛋白(P gp)介导的多重耐药性 (MDR)的作用。方法　构建并纯化制备了含有抗MDR1核酶基因的腺病毒Ad 196MDR1 Rz。在体外 ,用该重组腺病毒转导具有P gp介导的、MDR特性的人淋巴瘤细胞株Daudi MDR2 0 ,并分别用RT PCR、FACS分析和MTT法测定核酶基因转导对Daudi MDR2 0细胞MDR1mRNA和膜表面P gp表达的影响及对长春新碱 (VCR)敏感性的改变 ;在体内 ,通过局部注入重组腺病毒联合VCR全身化疗 ,对接种Daudi MDR2 0细胞的SCID小鼠进行治疗观察。结果　在感染Ad 196MDR1 Rz后 ,Daudi MDR2 0细胞MDR1mRNA的表达被阻断 ,细胞膜表面P gp表达水平显著降低 ,细胞对VCR的敏感性增加。在接种Daudi MDR2 0细胞后 ,采用Ad 196MDR1 Rz联合VCR化疗的治疗组小鼠有6 6 .7% (6 9)未发生肿瘤 ,存活时间超过 12 0d ;而采用空载腺病毒联合VCR化疗或单纯VCR化疗的对照组小鼠 ,其长期存活率分别为 12 .5 % (1 8)和 0 (0 9) ,两组差异有极显著性。结论　Ad 196MDR1 Rz能有效阻断Daudi MDR2 0细胞膜表面P gp表达 ,并恢复肿瘤细胞对VCR的敏感性。体内联合VCR化疗能有效抑制肿瘤的发生。

关键词：腺病毒介导抗MDR1核酶基因化疗药物恶性淋巴瘤多药耐药性基因转导

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慢性乙型肝炎患者体内干扰素产生细胞的初步检测及其临床意义

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肝脏 2002年第1期7卷 8-10页

作者：邢利和刘敬超朱传琳王慧芬雷周云王福生北京解放军第三0二医院传染病研究所生物工程研究室 100039 北京解放军第三0二医院四科 100039

目的　研究慢性乙型肝炎患者体内干扰素产生细胞 (IPCs)的特点。方法　用流式细胞仪对 2 1例慢性乙型肝炎患者和 12名健康人外周血中IPCs数量的变化进行了检测 ,同时与T淋巴细胞亚群CD4+ /CD8+ 的比值进行了比较分析。结果　慢性乙型肝... 详细信息

目的　研究慢性乙型肝炎患者体内干扰素产生细胞 (IPCs)的特点。方法　用流式细胞仪对 2 1例慢性乙型肝炎患者和 12名健康人外周血中IPCs数量的变化进行了检测 ,同时与T淋巴细胞亚群CD4+ /CD8+ 的比值进行了比较分析。结果　慢性乙型肝炎患者外周血IPCs的百分数 ( 0 .0 97± 0 .0 82 )较正常人 ( 0 .310± 0 .0 87)明显降低 ,两者相差3.2倍 ,有显著差异 (P <0 .0 0 1) ,而CD4+ /CD8+ 的比值 ( 1.79± 0 .46 1)则明显高于正常人的 1.39± 0 .396 (P <0 .0 1) ,同时发现在HBVDNA阳性的患者中 ,其IPCs的百分数和CD4+ /CD8+ 的比值分别为 0 .0 83± 0 .0 5 7和 1.98± 0 .5 2 7,均明显高于HBVDNA阴性患者 (分别为 0 .0 42± 0 .0 2 9和 1.47± 0 .46 6 ) ,差异显著 (P <0 .0 1)。结论　与正常人相比 ,慢性乙型肝炎患者外周血中IPCs的数量降低 ,后者可能与慢性乙型肝炎患者病程的进展以及血清中HBVDNA阳性有关 ,确切机制有待进一步研究。

关键词：慢性乙型肝炎干扰素产生细胞 T淋巴细胞亚群免疫耐受

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中国小型猪肝细胞cytodex^(TM)3微载体培养及其功能

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世界华人消化杂志 2002年第12期10卷 1376-1380页

作者：辛绍杰邹正升王敏王福生游绍莉李保森王永刚刘敬超张冰邢汉前中国人民解放军第302医院感染二科北京市100039 中国人民解放军第302医院传染病研究所生物工程研究室北京市100039

目的:研究原代小型猪肝细胞微载体培养方法的建立、肝细胞功能特性及其安全性.方法:将3.20×107个的肝细胞及2g/LcytodexTM3微载体连同40mL含100mL/LHyclone小牛血清及其他附助因子的RPMI1640培养基加入250mL已硅化的方瓶中培养.对... 详细信息

目的:研究原代小型猪肝细胞微载体培养方法的建立、肝细胞功能特性及其安全性.方法:将3.20×107个的肝细胞及2g/LcytodexTM3微载体连同40mL含100mL/LHyclone小牛血清及其他附助因子的RPMI1640培养基加入250mL已硅化的方瓶中培养.对不同培养时间的肝细胞进行形态学观察.同时测定不同培养时期肝细胞生物合成及生物转化功能,并对培养上清进行质控实验.结果:肝细胞产量为6.8×109-8.1×109(7.58±0.57)×109/肝;肝细胞活率为92-99%(96±3%);肝细胞具有正常肝细胞的超微结构特征;接种培养后肝细胞呈明显的朝CytodexTM3聚集,二者易相粘贴,黏附在微载体上的肝细胞增生生长较旺盛;当肝细胞数为3.20×107个时,接种后24h肝细胞尿素及白蛋白的合成量分别为1.22mmol/L及0.075g/L;随着时间的延长,利多卡因的转化率逐渐增加,在24h时即达到100%;培养上清需氧、厌氧、真菌培养、支原体检查及热源实验均为阴性.结论:使用微载体培养的小型猪肝细胞具有较旺盛的增生生长能力、良好的生物转化及生物合成功能,同时又是安全可靠的,可作为体外生物人工肝较为理想的细胞来源.

关键词：小型猪肝细胞 cytodex^TM3 微载体细胞培养人工肝支持系统

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原代小型猪肝细胞的分离培养及其功能

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世界华人消化杂志 2002年第5期10卷 549-553页

作者：邹正升游绍莉王福生王敏李保森辛绍杰王永刚刘敬超张冰邢汉前中国人民解放军第302医院感染二科北京市100039 中国人民解放军第302医院传染病研究所生物工程研究室北京市100039

目的:研究原代小型猪肝细胞的分离、培养及肝细胞的形态学变化及其功能特性.方法:用体外灌流装置,DTA和胶原酶两步灌流法消化分离小型猪肝细胞.在含100 ml/L小牛血清及其附助因子的RPMI 1640培养基中培养.对不同培养时间的肝细胞进行形... 详细信息

目的:研究原代小型猪肝细胞的分离、培养及肝细胞的形态学变化及其功能特性.方法:用体外灌流装置,DTA和胶原酶两步灌流法消化分离小型猪肝细胞.在含100 ml/L小牛血清及其附助因子的RPMI 1640培养基中培养.对不同培养时间的肝细胞进行形态学观察.同时测定不同培养时期肝细胞生化合成及生物转化功能.结果:(1)肝细胞产量为6.0×109～8.2×109(7.0 × 109±0.79×109)/每只猪肝;(2)肝细胞活率为90.0～99%(94.4±3.07%);(3)肝细胞具有正常肝细胞的超微结构特征;(4)接种培养后肝细胞增生生长旺盛;(5)接种后20 h内每107个肝细胞尿素及白蛋白的合成量分别为1.21～1.50 mmol/L及0.58～0.80 g/L;(6)肝细胞数在1.25×107个～1.60×107个时,利多卡因的转化率在24 h时均在80%以上,随着时间的延长及肝细胞数的增多,利多卡因的转化率逐渐增加.结论:本方法分离获取的肝细胞产率高、活性高、增生生长旺盛、具有良好的生物合成及生物转化功能,可作为生物人工肝较为理想的细胞来源.

关键词：原代小型猪肝细胞分离培养功能

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干扰素抗体与HBV C基因启动子变异对干扰素疗效的影响

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肝脏 2001年第4期6卷 228-230页

作者：邢利和王福生朱传琳李力王慧芬雷周云北京解放军第三0二医院传染病研究所生物工程研究室 100039 北京解放军第三0二医院四科 100039

目的　探讨HBVC基因启动子 (BCP)变异的肝炎患者干扰素抗体 (抗 IFN )的产生对干扰素疗效的影响。方法　采用错配PCR RFLP技术检测 89例慢性乙型肝炎血清中BCP变异和血清中抗 IFN的水平。结果　BCP变异率为 5 2 .8%,抗 IFN阳性率为 1... 详细信息

目的　探讨HBVC基因启动子 (BCP)变异的肝炎患者干扰素抗体 (抗 IFN )的产生对干扰素疗效的影响。方法　采用错配PCR RFLP技术检测 89例慢性乙型肝炎血清中BCP变异和血清中抗 IFN的水平。结果　BCP变异率为 5 2 .8%,抗 IFN阳性率为 15 .6 %,而干扰素治疗前抗 IFN阳性与治疗后转为阳性的患者 ,其干扰素治疗的有效率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而治疗前后抗 IFN均为阴性者 ,其有效率明显优于阳性者 ,差异显著 (P <0 .0 5 )。在IFN治疗前 ,有BCP变异组抗 IFN阳性 10例 ,野生株组抗 IFN阳性 2例 ,两组相比 ,差异显著 (P <0 .0 5 )。IFN治疗后 ,变异株组出现抗 IFN阳性 4例 ,野生株组出现抗 IFN阳性 1例 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　抗 IFN阳性的患者 ,干扰素治疗效果差。BCP变异的患者 ,在干扰素治疗前 ,有可能促进干扰素抗体的产生 ,但在干扰素治疗后 ,则不增加抗 IFN的产生。

关键词：乙型肝炎病毒 C基因启动子变异干扰素抗体干扰素 HBV

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