检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2015年第3期40卷 188-193页

作者：叶晓玲刘妍陈容娟许智慧李晓东叶海燕唐振祥程书权徐东平桂林医学院研究生学院广西桂林541004 解放军302医院全军传染病研究所、肝衰竭诊疗与研究中心病毒性肝炎研究室北京100039 桂林市第三人民医院肝病科广西桂林541002

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)反转录酶区rtI233V变异的演变规律及其与阿德福韦酯(ADV)耐药的相关性。方法分析9830例慢性HBV感染者血清样本中HBV rtI233V变异的检出率。选择其中2例代表性患者,动态收集血清样本,扩增HBV RT基因并克隆测序(... 详细信息

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)反转录酶区rtI233V变异的演变规律及其与阿德福韦酯(ADV)耐药的相关性。方法分析9830例慢性HBV感染者血清样本中HBV rtI233V变异的检出率。选择其中2例代表性患者,动态收集血清样本,扩增HBV RT基因并克隆测序(>20个克隆/样本),观察rtI233V变异的演变过程。构建pTriEx-HBV(C)1.1倍野生株和3种变异株(rtI233V、rtN236T、rtI233V+rtN236T)复制子,瞬时转染HepG2肝癌细胞,分别加入不同浓度的拉米夫定(LAM)、ADV、恩替卡韦(ETV)和替诺福韦(TDF)。采用实时荧光定量PCR法检测不同浓度药物作用后细胞培养上清中HBV DNA的水平,分析变异病毒复制力与表型耐药的变化特点。结果9830例慢乙肝患者血清样本中共检出rtI233V位点变异28例,检出率0.28%,其中rtI233V单独变异19例,与rtN236T等经典耐药变异联合出现9例。该变异的检出患者均有ADV治疗史,其中16例(57.1%)接受ADV单药治疗6个月以上,12例(42.9%)接受包括ADV的多药序贯联合治疗1年以上。病毒复制力与表型耐药分析显示,rtI233V变异株的复制力与野生株接近,rtN236T变异株的复制力较野生株显著降低;rtI233V变异株对LAM、ADV、ETV和TDF均敏感,rtI233V+rtN236T联合变异对耐药性的影响不大,但rtI233V变异可明显恢复rtN236T变异株受损的复制力。结论rtI233V位点变异与ADV应答不佳相关,虽不直接降低病毒对ADV的敏感程度,但可增加经典ADV耐药病毒株的复制力,是一种复制力补偿变异。

关键词：肝炎病毒乙型阿德福韦酯突变 DNA复制抗药性病毒

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转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 453-457页

作者：吴静王琳刘妍叶海燕丁宁刘永明徐东平桂林医学院广西桂林541004 解放军302医院全军传染病研究所肝衰竭研究中心病毒性肝炎研究室北京100039 桂林市第三人民医院肝病科广西桂林541004

目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LA... 详细信息

目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因;构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达。结果从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5～5.0)×105IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06%～2.25%,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03%～2.06%和1.05%～1.12%,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞均低于0.05%。结论通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性。

关键词：乙型肝炎病毒细胞毒性T淋巴细胞 T细胞受体表位特异性表达

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各种恩替卡韦耐药HBV株鉴定及替诺福韦酯对其抑制力分析

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传染病信息 2013年第2期26卷 96-99,107页

作者：李艳乐刘妍许智慧王晓陈丽戴久增姚增涛江玲张连峰徐东平炎研究室郑州大学第一附属医院消化科 450000 解放军第三○二医院全军传染病研究所/肝衰竭诊疗与研究中心病毒性肝炎研究室北京100039

目的分析临床分离的不同形式恩替卡韦(ETV)耐药HBV株的病毒复制力并探讨替诺福韦酯(TDF)对其的抑制力。方法从4例ETV治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中提取并扩增HBV反转录酶(reverse transcriptase,RT)基因,克隆测序分析其基因型耐药... 详细信息

目的分析临床分离的不同形式恩替卡韦(ETV)耐药HBV株的病毒复制力并探讨替诺福韦酯(TDF)对其的抑制力。方法从4例ETV治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中提取并扩增HBV反转录酶(reverse transcriptase,RT)基因,克隆测序分析其基因型耐药变异特点。选取代表性野生型和ETV耐药型HBV克隆株,构建pTriEx-HBV(C)1.1倍重组表达载体。提纯质粒转染HepG2细胞系,5d后检测上清中HBVDNA产生量,分析不同变异形式ETV耐药变异株体外复制力水平及TDF对其抑制力。结果 4份血清中共得到16种含不同HBVRT区变异形式的克隆株,10种与ETV耐药有关,另有6种与拉米夫定耐药有关。表型分析显示:与野生株相比,ETV耐药变异株复制力水平均有所下降,其中rtT184I+M204I变异株复制力最低,是野生株的19.3%,rtM204I+M250L基础上出现补偿突变(rtL80I、rtV173L和rtL180M)的变异株复制力较高,存在相同补偿突变的前提下,rtM204I基础上的耐药变异较rtM204V基础上的复制力低。TDF对各种类型ETV耐药变异病毒的复制力均有较强抑制作用(96.11%～99.90%)。结论与野生株相比,不同变异形式的ETV耐药变异株体外复制力均下降,TDF可有效抑制ETV耐药变异株复制,将是治疗ETV耐药患者的一种很好的选择。

关键词：乙型肝炎病毒突变抗病毒药抗药性

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54例慢性乙型肝炎患者肝组织HBV cccDNA与血清HBsAg定量检测结果分析

54例慢性乙型肝炎患者肝组织HBV cccDNA与血清HBsAg定量检测结果...

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2011北京地区肝病·感染学术年会

作者：李韦杰李伯安赵景民韩佳琪刘妍江玲毛远丽辛绍杰徐东平解放军第三○二医院肝衰竭诊疗研究中心全军传染病研究所病毒性肝炎研究室

共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的初始模板，其在肝细胞内的长期存在是导致乙肝病情慢性化及停药后复发的重要因素，因此检测HBV cccDNA具有重要临床意义，是评价HBV复制活跃程度和抗病毒疗效的重要指标。本研究收集了54例慢性乙型... 详细信息

共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的初始模板，其在肝细胞内的长期存在是导致乙肝病情慢性化及停药后复发的重要因素，因此检测HBV cccDNA具有重要临床意义，是评价HBV复制活跃程度和抗病毒疗效的重要指标。本研究收集了54例慢性乙型肝炎患者的肝组织标本和对应的血清，进行了HBV cccDNA定量、血清HBsAg定量，分析了两种定量指标之间及其与血清HBV DNA载量相关性。本研究结果表明，与血清HBV DNA相比，HBsAg与肝组织内cccDNA的相关性更好，支持在慢性乙肝患者中使用血清HBsAg定量评估患者的免疫和肝细胞内病毒的复制状态，帮助临床监测抗病毒治疗疗效、分析预后和选择停药时机。

关键词：慢性乙型肝炎肝组织共价闭合环状DNA 乙肝表面抗原定量检测

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乙型肝炎患者HBV X蛋白特异性CTL表位变异分析

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胃肠病学和肝病学杂志 2010年第1期19卷 67-70页

作者：刘志国许智慧洪炜刘佳任晓强刘妍毛远丽徐东平解放军三○二医院临床检验中心北京100039 解放军三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039

目的比较急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎与慢性重型乙型肝炎HBVX蛋白特异性CTL表位变异差异,探讨乙型肝炎重症化和慢性化的可能机理。方法对393例乙型肝炎患者的血清样本进行HLA-A2分型;用巢式PCR扩增血清HBV前S/S基因与X基因并对PCR产物... 详细信息

目的比较急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎与慢性重型乙型肝炎HBVX蛋白特异性CTL表位变异差异,探讨乙型肝炎重症化和慢性化的可能机理。方法对393例乙型肝炎患者的血清样本进行HLA-A2分型;用巢式PCR扩增血清HBV前S/S基因与X基因并对PCR产物进行序列测定;根据HBV前S/S基因序列,用VirusBlast软件鉴定患者感染的HBV基因型;用Vector NTI软件对目前已知的6个HLA-A2限制性X蛋白特异性CTL表位序列分析,对患者各个表位变异的差异进行卡方检验。结果190例(48.35%)患者HLA-A2阳性,其中急性乙型肝炎(AHB)67例,慢性乙型肝炎(CHB)52例,慢性重型乙型肝炎(CSHB)71例。CTL表位变异分析结果如下:对三组所有患者进行比较时,X92-100表位变异发生频数三组患者比较有非常显著性差异(P<0.01);对三组中HBV C基因型患者进行比较时,X92-100和X115-123表位变异发生频数三组患者比较有显著性差异(P<0.05);对三组中HBV B基因型患者进行比较时,各表位变异发生频数三组患者比较无显著差异。结论某些HBVX蛋白特异性CTL表位在AHB、CHB和CSHB患者间变异有明显差异且受病毒基因型影响,CTL表位变异可能与乙型肝炎的重症化和慢性化机制相关。

关键词：乙型肝炎病毒特异性CTL表位 X区蛋白

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40例乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因耐药突变分析与表达载体构建

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中华实验和临床病毒学杂志 2009年第5期23卷 340-342页

作者：苏何玲刘妍刘文钟彦伟陈雪媛王春梅刘永明徐东平桂林医学院生物技术学院 541004 解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室

目的分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变，构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析。方法从服用抗HBV核苷（酸）类似物的患者血清中提取病毒DNA，PCR扩增HBVRT全长基因，克隆到pGEM—Teasy载体中，随机挑... 详细信息

目的分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变，构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析。方法从服用抗HBV核苷（酸）类似物的患者血清中提取病毒DNA，PCR扩增HBVRT全长基因，克隆到pGEM—Teasy载体中，随机挑选3～5个克隆进行DNA序列测定，以DNASTAR软件分析RT基因内与核苷（酸）类似物耐药相关的常见突变位点。用XhoI和NcoI双酶切pGEM—Teasy—RT及pTriEx—HBV（C）构建1．1表达载体，测序正确后转染Huh7细胞，检测HBsAg和HBeAg表达水平。结果40例患者均分别检出拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦耐药相关的单一或联合突变；成功克隆了96条HBVRT基因，分别带有上述核苷（酸）类似物耐药相关变异的序列；挑选主要突变组合形式的40条RT基因构建pTriEx—HBV（C）1．1表达载体，转染Huh7细胞48h后在培养上清中检测到HBsAg和HBeAg，表明表达载体构建成功。结论本研究成功进行了临床患者HBV耐药相关突变分析与突变体重组表达载体构建，为进行表型耐药分析打下了基础。

关键词：肝炎病毒,乙型药物耐受,病毒重组遗传

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建立一种PCR产物直接测序检测HBV YMDD突变的方法

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中华检验医学杂志 2009年第7期32卷 777-780页

作者：许彪李晓东刘志国毛远丽胡瑾华王业东徐东平解放军第二○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第二○二医院肝衰竭治疗研究中心北京100039 解放军第二○二医院检验中心北京100039 解放军第二○二医院传染病研究所医院办公室北京100039

目的建立检测HBV YMDD变异的PCR产物直接测序法，并与传统实时荧光PCR检测YMDD突变的结果进行比较分析。方法选取103份慢性乙型肝炎患者血清标本，提取血清HBV DNA。用实时荧光PCR检测YMDD突变；用巢式PCR扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产... 详细信息

目的建立检测HBV YMDD变异的PCR产物直接测序法，并与传统实时荧光PCR检测YMDD突变的结果进行比较分析。方法选取103份慢性乙型肝炎患者血清标本，提取血清HBV DNA。用实时荧光PCR检测YMDD突变；用巢式PCR扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，NTI软件比对结果。采用Kappa一致性检验对DNA测序法检测的rt204位点突变与实时荧光PCR检测的YMDD突变结果进行比较。结果PCR产物直接测序法可有效检测低病毒载量标本（500拷贝／m1）和高病毒载量（10^10拷贝／ml）标本，同时可以避免高病毒载量标本的抑制效应。与实时荧光PCR相比较，YIDD突变检测符合率为100％，YVDD突变检测符合率97．1％，YIDD与YVDD共生突变符合率76．2％（Kappa=0．853，P〈0．01）。结论本研究建立的PCR产物直接测序法检测HBV耐药相关基因突变，灵敏度高，检测范围宽，与实时荧光PCR检测结果有较高的符合率，并可同时检出YMDD、YIDD和YVDD。

关键词：肝炎病毒乙型序列分析 DNA 聚合酶链反应突变

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234例慢性乙型肝炎患者HBV前C/BCP区突变分析

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实用肝脏病杂志 2009年第1期12卷 14-16,40页

作者：白丽王琳李乐孟玉华万芃瑾刘晓红陈雪源张玲霞徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京市100039

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子(BCP)区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选... 详细信息

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子(BCP)区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选取1753、1762、1764、1862、1896和1899共6个位点进行突变分析,并重点分析不同突变对患者血清HBeAg阳性率和病情的影响。结果在234例中6个位点均无突变者为74例(31.6%),其血清HBeAg阳性率为74.3%(55/74)。在234例中6个位点检出至少1种突变的病例为160例(68.4%),突变形式包括4种单一位点突变和21种组合形式的突变;检出G1896A突变73例(31.2%),其中36例检出有共存未突变序列,37例仅检出突变序列,后者血清HBeAg的阳性率为18.9%(7/37)。检出G1896A以外其他形式突变的有87例,HBeAg阳性率为63.2%(55/87);其中以A1762T+G1764A最为常见,HBeAg阳性率为69.4%(34/49)。在1753、1862位点上检出4种特殊碱基突变,前C区有基因片段插入或缺失的有2例。结论多数慢性乙型肝炎患者在HBV前C/BCP区可检出突变,突变形式多样,其中G1896A突变样本血清HBeAg阳性率显著下降,而其他突变对其影响较小。应用DNA序列测定法分析HBV前C/BCP区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。

关键词：乙型肝炎 HBV前C/BCP区突变 HBeAg 基因测序

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乙型肝炎病毒耐药的检测与判断

乙型肝炎病毒耐药的检测与判断

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慢性乙型肝炎抗病毒治疗难点和热点学术会议

作者：徐东平 100039 解放军第三○二医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室

核苷(酸)类药物是实施慢性乙型肝炎抗病毒治疗的主要药物，目前在我国上市的有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定四种，除阿德福韦酯为核苷酸类药物外，其他三种为核苷类药物。本文介绍了HBV的变异特点，探讨了HBV耐药相关基因... 详细信息

核苷(酸)类药物是实施慢性乙型肝炎抗病毒治疗的主要药物，目前在我国上市的有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定四种，除阿德福韦酯为核苷酸类药物外，其他三种为核苷类药物。本文介绍了HBV的变异特点，探讨了HBV耐药相关基因突变的检测方法，阐述了对HBV耐药相关基因突变检测结果的分析。

关键词：乙型肝炎抗病毒治疗基因突变核苷酸病毒耐药

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340例慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒多位点耐药相关突变分析

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中华肝脏病杂志 2008年第10期16卷 735-738页

作者：徐东平刘妍成军李晓东戴久增李乐梁兆玲白丽钟彦伟许智慧任晓强张玲霞解放军第三0二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因1... 详细信息

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因12个位点上的碱基突变情况，分析不同核苷（酸）．类似物使用情况、患者的耐药相关突变情况及不同核苷（酸）类似物耐药的突变形式。结果检出拉米夫定耐药突变63例，阿德福韦耐药突变10例，恩替卡韦耐药突变8例，替比夫定耐药突变l例。拉米夫定耐药突变中以M204V和M204I最常见，前者通常伴随L180M突变，后者常单独出现；阿德福韦耐药中以N236T±A181位碱基替换为主；恩替卡韦耐药突变发生在拉米夫定耐药基础上，以T184位碱基替换为主；替比夫定的耐药突变为M204I。少数未接受过核苷（酸）类似物治疗的患者也可检出耐药相关突变。结论检测HBV逆转录酶基因多位点耐药相关突变，有助于临床及时发现和确认乙型肝炎患者是否存在HBV耐药，合理进行抗病毒治疗。

关键词：肝炎病毒乙型突变耐药

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