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北京大学学报（医学版） 2010年第6期42卷 739-745页

作者：徐京杭于岩岩斯崇文陈新月韩忠厚陈勇张文谨徐道振陈宇萍于敏席宏丽李雪迎北京大学第一医院感染疾病科北京100034 北京佑安医院国际医疗部河北省秦皇岛市第三医院肝病科江苏省淮安市第四人民医院肝病研究所中国人民解放军第三○二医院11科北京地坛医院肝病科河北省保定市传染病医院传染科北京大学第一医院医学统计室

目的:比较拉米夫定或干扰素单药治疗和序贯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效和安全性。方法:225例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者,随机分为序贯治疗组(A组)83例、拉米夫定组(B组)89例和干扰素组(C组)53例。A组单用拉米夫定100mg/d,疗程32周... 详细信息

目的:比较拉米夫定或干扰素单药治疗和序贯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效和安全性。方法:225例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者,随机分为序贯治疗组(A组)83例、拉米夫定组(B组)89例和干扰素组(C组)53例。A组单用拉米夫定100mg/d,疗程32周,从第25周开始加用α2b干扰素(500万IU,皮下注射,隔日1次),总疗程48周;B组单用拉米夫定100mg/d,共48周;C组单用α2b干扰素(500万IU,皮下注射,隔日1次),总疗程24周,所有患者随访24周。结果:A、B和C组的基线HBV DNA分别为7.8±1.0、7.9±1.1和8.0±0.9log10 copies/mL,3组间差异无统计学意义(P>0.05);基线丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)分别为167.5(99.0,267.8)、134.0(101.0,275.0)和131.0(99.0,192.8)U/L,3组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗结束时A、B和C组HBV DNA下降率分别为78.2%、87.8%和78.4%,3组间差异无统计学意义(P>0.05);随访结束时A、B和C组HBV DNA下降率分别为54.4%、63.6%和66.7%,3组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗结束时A、B和C组综合应答率分别为65.8%、83.5%和39.6%,B组最高(P<0.05),C组最低(P<0.05);随访结束时A、B和C组综合应答率分别为36.2%、54.4%和42.1%,3组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗结束时病毒酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(tyrosine-methionine-aspartate-aspartate,YMDD)变异率A组低于B组(10.5% vs.26.9%,P<0.05)。结论:拉米夫定-干扰素序贯疗法可减少病毒变异,但疗效与拉米夫定或干扰素单药组比较差异无统计学意义。

关键词：肝炎,乙型,慢性干扰素类拉米夫定治疗结果

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慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者PBMC中TNF—α的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2009年第2期23卷 109-111页

作者：董漪张鸿飞朱世殊陈昊李靖程云解放军第三0二医院感染五科北京100039 解放军第三0二医院传染病研究所免疫室北京100039

目的通过研究慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者外周血单个核细胞（PBMC）中肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达，初步探讨慢性丙型肝炎患者合并非酒精性脂肪肝的发病机制。方法将20例慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者、20例单纯的慢性... 详细信息

目的通过研究慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者外周血单个核细胞（PBMC）中肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达，初步探讨慢性丙型肝炎患者合并非酒精性脂肪肝的发病机制。方法将20例慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者、20例单纯的慢性丙型肝炎患者及10例正常对照PBMC体外培养72h后，用ELISA法检测培养上清中TNF-α的浓度。结果（1）慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者组、单纯的慢性丙型肝炎患者组PBMC培养上清中TNF-α的水平较正常对照组明显升高（P〈0．05）。（2）慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者组PBMC培养上清中TNF-α的水平较单纯的慢性丙型肝炎患者组也明显升高（P〈0．01）。结论TNF—α是导致慢性丙型肝炎患者合并非酒精性脂肪肝的一个重要因素。

关键词：肝炎丙型慢性脂肪肝非酒精性肿瘤坏死因子

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40例乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因耐药突变分析与表达载体构建

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中华实验和临床病毒学杂志 2009年第5期23卷 340-342页

作者：苏何玲刘妍刘文钟彦伟陈雪媛王春梅刘永明徐东平桂林医学院生物技术学院 541004 解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室

目的分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变，构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析。方法从服用抗HBV核苷（酸）类似物的患者血清中提取病毒DNA，PCR扩增HBVRT全长基因，克隆到pGEM—Teasy载体中，随机挑... 详细信息

目的分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变，构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析。方法从服用抗HBV核苷（酸）类似物的患者血清中提取病毒DNA，PCR扩增HBVRT全长基因，克隆到pGEM—Teasy载体中，随机挑选3～5个克隆进行DNA序列测定，以DNASTAR软件分析RT基因内与核苷（酸）类似物耐药相关的常见突变位点。用XhoI和NcoI双酶切pGEM—Teasy—RT及pTriEx—HBV（C）构建1．1表达载体，测序正确后转染Huh7细胞，检测HBsAg和HBeAg表达水平。结果40例患者均分别检出拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦耐药相关的单一或联合突变；成功克隆了96条HBVRT基因，分别带有上述核苷（酸）类似物耐药相关变异的序列；挑选主要突变组合形式的40条RT基因构建pTriEx—HBV（C）1．1表达载体，转染Huh7细胞48h后在培养上清中检测到HBsAg和HBeAg，表明表达载体构建成功。结论本研究成功进行了临床患者HBV耐药相关突变分析与突变体重组表达载体构建，为进行表型耐药分析打下了基础。

关键词：肝炎病毒,乙型药物耐受,病毒重组遗传

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建立一种PCR产物直接测序检测HBV YMDD突变的方法

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中华检验医学杂志 2009年第7期32卷 777-780页

作者：许彪李晓东刘志国毛远丽胡瑾华王业东徐东平解放军第二○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第二○二医院肝衰竭治疗研究中心北京100039 解放军第二○二医院检验中心北京100039 解放军第二○二医院传染病研究所医院办公室北京100039

目的建立检测HBV YMDD变异的PCR产物直接测序法，并与传统实时荧光PCR检测YMDD突变的结果进行比较分析。方法选取103份慢性乙型肝炎患者血清标本，提取血清HBV DNA。用实时荧光PCR检测YMDD突变；用巢式PCR扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产... 详细信息

目的建立检测HBV YMDD变异的PCR产物直接测序法，并与传统实时荧光PCR检测YMDD突变的结果进行比较分析。方法选取103份慢性乙型肝炎患者血清标本，提取血清HBV DNA。用实时荧光PCR检测YMDD突变；用巢式PCR扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，NTI软件比对结果。采用Kappa一致性检验对DNA测序法检测的rt204位点突变与实时荧光PCR检测的YMDD突变结果进行比较。结果PCR产物直接测序法可有效检测低病毒载量标本（500拷贝／m1）和高病毒载量（10^10拷贝／ml）标本，同时可以避免高病毒载量标本的抑制效应。与实时荧光PCR相比较，YIDD突变检测符合率为100％，YVDD突变检测符合率97．1％，YIDD与YVDD共生突变符合率76．2％（Kappa=0．853，P〈0．01）。结论本研究建立的PCR产物直接测序法检测HBV耐药相关基因突变，灵敏度高，检测范围宽，与实时荧光PCR检测结果有较高的符合率，并可同时检出YMDD、YIDD和YVDD。

关键词：肝炎病毒乙型序列分析 DNA 聚合酶链反应突变

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234例慢性乙型肝炎患者HBV前C/BCP区突变分析

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实用肝脏病杂志 2009年第1期12卷 14-16,40页

作者：白丽王琳李乐孟玉华万芃瑾刘晓红陈雪源张玲霞徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京市100039

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子(BCP)区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选... 详细信息

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子(BCP)区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选取1753、1762、1764、1862、1896和1899共6个位点进行突变分析,并重点分析不同突变对患者血清HBeAg阳性率和病情的影响。结果在234例中6个位点均无突变者为74例(31.6%),其血清HBeAg阳性率为74.3%(55/74)。在234例中6个位点检出至少1种突变的病例为160例(68.4%),突变形式包括4种单一位点突变和21种组合形式的突变;检出G1896A突变73例(31.2%),其中36例检出有共存未突变序列,37例仅检出突变序列,后者血清HBeAg的阳性率为18.9%(7/37)。检出G1896A以外其他形式突变的有87例,HBeAg阳性率为63.2%(55/87);其中以A1762T+G1764A最为常见,HBeAg阳性率为69.4%(34/49)。在1753、1862位点上检出4种特殊碱基突变,前C区有基因片段插入或缺失的有2例。结论多数慢性乙型肝炎患者在HBV前C/BCP区可检出突变,突变形式多样,其中G1896A突变样本血清HBeAg阳性率显著下降,而其他突变对其影响较小。应用DNA序列测定法分析HBV前C/BCP区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。

关键词：乙型肝炎 HBV前C/BCP区突变 HBeAg 基因测序

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乙型肝炎病毒耐药的检测与判断

乙型肝炎病毒耐药的检测与判断

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慢性乙型肝炎抗病毒治疗难点和热点学术会议

作者：徐东平 100039 解放军第三○二医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室

核苷(酸)类药物是实施慢性乙型肝炎抗病毒治疗的主要药物，目前在我国上市的有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定四种，除阿德福韦酯为核苷酸类药物外，其他三种为核苷类药物。本文介绍了HBV的变异特点，探讨了HBV耐药相关基因... 详细信息

核苷(酸)类药物是实施慢性乙型肝炎抗病毒治疗的主要药物，目前在我国上市的有拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦和替比夫定四种，除阿德福韦酯为核苷酸类药物外，其他三种为核苷类药物。本文介绍了HBV的变异特点，探讨了HBV耐药相关基因突变的检测方法，阐述了对HBV耐药相关基因突变检测结果的分析。

关键词：乙型肝炎抗病毒治疗基因突变核苷酸病毒耐药

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自身免疫性肝炎患者血清中高迁移率族蛋白B1检测及临床意义

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临床肝胆病杂志 2009年第2期25卷 118-119页

作者：赵擎辛绍杰侯俊胡燕貌盼勇中国人民解放军总医院南楼消化科北京100853 解放军第三0二医院传染三科北京100039 解放军第三O二医院传染病研究所病毒研究室北京100039

目的采用ELISA检测方法,初步探讨人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与自身免疫性肝炎(AIH)发病的相互作用关系。方法将纯化的HMGB1蛋白,包被ELISA检测微孔板,检测AIH患者和健康献血员的血清分别165份和69份,分析比较AIH患者和健康献血员的血清... 详细信息

目的采用ELISA检测方法,初步探讨人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与自身免疫性肝炎(AIH)发病的相互作用关系。方法将纯化的HMGB1蛋白,包被ELISA检测微孔板,检测AIH患者和健康献血员的血清分别165份和69份,分析比较AIH患者和健康献血员的血清中抗HMGB1抗体的分泌情况。结果AIH患者血清中抗HMGB1抗体的阳性率明显高于健康献血员(78.7%VS50.7%,P<0.05)。直线回归分析显示,抗HMGB1抗体滴度(OD值)与ALT水平有很好的相关性(相关系数r=0.968)。结论HMGB1是AIH疾病发生发展中一个重要的炎症蛋白,与疾病的炎症活动程度有很好的相关性。

关键词：高迁移率族蛋白B1 自身免疫性肝炎 ELISA

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自身免疫性肝炎肝穿标本中高迁移率族蛋白B1免疫组织化学研究

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胃肠病学和肝病学杂志 2009年第7期18卷 597-599页

作者：赵擎辛绍杰胡燕侯俊貌盼勇中国人民解放军总医院南楼消化科北京100853 解放军第302医院感染三科解放军第302医院传染病研究所病毒研究室

目的观察自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者和健康供肝标本中人高迁移率族蛋白B1(high mobility groupbox-1 protein,HMGB1)的表达情况,探讨HMGB1蛋白与AIH发病的相互作用。方法免疫组织化学方法观察55例AIH患者肝穿组织标... 详细信息

目的观察自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者和健康供肝标本中人高迁移率族蛋白B1(high mobility groupbox-1 protein,HMGB1)的表达情况,探讨HMGB1蛋白与AIH发病的相互作用。方法免疫组织化学方法观察55例AIH患者肝穿组织标本和10例健康肝移植供肝标本中HMGB1蛋白表达情况。结果AIH患者的肝穿标本与健康肝脏标本相比,肝细胞中HMGB1阳性表达明显增多,HMGB1阳性颗粒主要分布在肝细胞核和Kuffer细胞核中,在点灶状坏死区和界面炎症区浸润的炎性细胞细胞核和细胞浆内可见HMGB1阳性颗粒。结论HMGB1是AIH发生发展中一个重要的炎症蛋白。

关键词：高迁移率族蛋白B1 自身免疫性肝炎免疫组织化学

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新型肠道病毒分离株（BJ302）全基因组序列测定及分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第2期22卷 110-112页

作者：侯俊胡燕沈宏辉白冰珂王志杰貌盼勇解放军第三О二医院传染病研究所病毒室北京100039

目的测定并分析新分离肠道病毒基因组序列，从病毒的分子生物学角度研究其分类学位置。方法从1例不明病因的急性肝炎患者粪便标本中提取病毒RNA，以随机引物逆转录PCR法及5′、3′RACE扩增病毒全基因序列。将拼接得到的核苷酸序列及推... 详细信息

目的测定并分析新分离肠道病毒基因组序列，从病毒的分子生物学角度研究其分类学位置。方法从1例不明病因的急性肝炎患者粪便标本中提取病毒RNA，以随机引物逆转录PCR法及5′、3′RACE扩增病毒全基因序列。将拼接得到的核苷酸序列及推断的氨基酸序列与GenBank数据库中序列进行比较并建立系统进化树。结果分离病毒基因与肠道病毒76、89型有较高的同源性，尤其是与肠道病毒89型，相应片段的核苷酸序列同源性达83％-94％，推断相应氨基酸序列同源性高达91％-100％，而与其他病毒不存在有意义的同源性；系统进化树分析显示新分离肠道病毒株属于肠道病毒属中新型肠道病毒89型一簇。结论新分离病毒属肠道病毒89型，可能为89型的一个新亚型。

关键词：肠道病毒属基因组基因结构病毒

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340例慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒多位点耐药相关突变分析

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中华肝脏病杂志 2008年第10期16卷 735-738页

作者：徐东平刘妍成军李晓东戴久增李乐梁兆玲白丽钟彦伟许智慧任晓强张玲霞解放军第三0二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因1... 详细信息

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因12个位点上的碱基突变情况，分析不同核苷（酸）．类似物使用情况、患者的耐药相关突变情况及不同核苷（酸）类似物耐药的突变形式。结果检出拉米夫定耐药突变63例，阿德福韦耐药突变10例，恩替卡韦耐药突变8例，替比夫定耐药突变l例。拉米夫定耐药突变中以M204V和M204I最常见，前者通常伴随L180M突变，后者常单独出现；阿德福韦耐药中以N236T±A181位碱基替换为主；恩替卡韦耐药突变发生在拉米夫定耐药基础上，以T184位碱基替换为主；替比夫定的耐药突变为M204I。少数未接受过核苷（酸）类似物治疗的患者也可检出耐药相关突变。结论检测HBV逆转录酶基因多位点耐药相关突变，有助于临床及时发现和确认乙型肝炎患者是否存在HBV耐药，合理进行抗病毒治疗。

关键词：肝炎病毒乙型突变耐药

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