检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2008年第2期22卷 110-112页

作者：侯俊胡燕沈宏辉白冰珂王志杰貌盼勇解放军第三О二医院传染病研究所病毒室北京100039

目的测定并分析新分离肠道病毒基因组序列，从病毒的分子生物学角度研究其分类学位置。方法从1例不明病因的急性肝炎患者粪便标本中提取病毒RNA，以随机引物逆转录PCR法及5′、3′RACE扩增病毒全基因序列。将拼接得到的核苷酸序列及推... 详细信息

目的测定并分析新分离肠道病毒基因组序列，从病毒的分子生物学角度研究其分类学位置。方法从1例不明病因的急性肝炎患者粪便标本中提取病毒RNA，以随机引物逆转录PCR法及5′、3′RACE扩增病毒全基因序列。将拼接得到的核苷酸序列及推断的氨基酸序列与GenBank数据库中序列进行比较并建立系统进化树。结果分离病毒基因与肠道病毒76、89型有较高的同源性，尤其是与肠道病毒89型，相应片段的核苷酸序列同源性达83％-94％，推断相应氨基酸序列同源性高达91％-100％，而与其他病毒不存在有意义的同源性；系统进化树分析显示新分离肠道病毒株属于肠道病毒属中新型肠道病毒89型一簇。结论新分离病毒属肠道病毒89型，可能为89型的一个新亚型。

关键词：肠道病毒属基因组基因结构病毒

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340例慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒多位点耐药相关突变分析

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中华肝脏病杂志 2008年第10期16卷 735-738页

作者：徐东平刘妍成军李晓东戴久增李乐梁兆玲白丽钟彦伟许智慧任晓强张玲霞解放军第三0二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因1... 详细信息

目的分析慢性乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因与核苷（酸）类似物耐药相关的12个位点上的突变情况及其临床意义。方法提取血清HBVDNA，扩增HBV逆转录酶基因，对PCR产物进行DNA双向测序，对测序成功的样本进行基因型分析。检测逆转录酶基因12个位点上的碱基突变情况，分析不同核苷（酸）．类似物使用情况、患者的耐药相关突变情况及不同核苷（酸）类似物耐药的突变形式。结果检出拉米夫定耐药突变63例，阿德福韦耐药突变10例，恩替卡韦耐药突变8例，替比夫定耐药突变l例。拉米夫定耐药突变中以M204V和M204I最常见，前者通常伴随L180M突变，后者常单独出现；阿德福韦耐药中以N236T±A181位碱基替换为主；恩替卡韦耐药突变发生在拉米夫定耐药基础上，以T184位碱基替换为主；替比夫定的耐药突变为M204I。少数未接受过核苷（酸）类似物治疗的患者也可检出耐药相关突变。结论检测HBV逆转录酶基因多位点耐药相关突变，有助于临床及时发现和确认乙型肝炎患者是否存在HBV耐药，合理进行抗病毒治疗。

关键词：肝炎病毒乙型突变耐药

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丙型肝炎高变区1合成肽体外刺激HCV感染PBMC细胞因子分泌的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 279-281页

作者：迟淑萍李靖高蓉苏海滨李伯安李薇程云解放军第三○二医院传染病研究所免疫研究室北京100039 中华医学会

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周... 详细信息

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周血单核细胞(PBMC)后,患者PBMC出现了明显的增殖;(2)培养上清中干扰素γ(IFNγ)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)都有不同程度的提高,白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平并没有提高;(3)增殖细胞主要为CD4阳性淋巴细胞。结论我们设计的HCV高变区1合成肽引发的免疫因子的释放倾向于TH2类因子。

关键词：肝炎病毒属肽合成表位细胞因子类单核细胞/血液丙型肝炎病毒(HCV) 细胞因子分泌 HCV感染高变区1 PBMC

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A反式激活基因的克隆化研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第3期20卷 270-272页

作者：刘妍白桂芹成军杨倩张黎颖纪冬王建军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）... 详细信息

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，进行SSH分析。将富集的二次PCR产物与TIA载体连接，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑取克隆，聚合酶链反应（PCR）扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到36个阳性克隆，经菌落PCR分析显示200～1000bp插入片段。对其中的25个片段测序，并进行同源性分析，显示18种已知基因编码蛋白和2种未知功能基因序列，包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因，可能是NS4A反式激活靶基因。结论成功构建了HCV NS4A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，为进一步阐明HCV NS4A反式调节的靶基因等提供了相关的平台。

关键词：肝炎病毒病毒非结构蛋白质类反式激活(遗传学) 抑制,遗传杂交

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HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测试剂盒的研制与评价

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第4期21卷 391-393页

作者：胡燕侯俊冯燕青冯长访史素娟沈宏辉王志杰王保君貌盼勇解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室 100039 解放军第三○二医院传临床检验中心 100039 北京科卫临床诊断试剂有限公司

目的研制HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测酶免疫试剂盒并评价其实用性。方法联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,研制了联合检测H... 详细信息

目的研制HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测酶免疫试剂盒并评价其实用性。方法联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,研制了联合检测HIV1/2抗体和P24抗原的ELISA诊断试剂,并对其特异性、敏感性、稳定性等进行评价和临床考评。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0.2ng/ml;与雅培公司试剂比较检测78份AIDS患者血清和85份正常人血清、对照检测中国药品生物制品检定所研制的HIV参比血清,特异度和灵敏度均为100%。临床考核检测12051份各种血清,灵敏度为100%(543/543),特异度为99.48%(11448/11508)。试剂在37℃放置6d后,试验结果无明显差异。结论本试剂盒具备特异度强、敏感度高、稳定性好、操作简便等优点,可以一步检出HIV特异性抗体和HIVP24抗原,缩短了HIV感染的检测窗口期,适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。

关键词： HIV 抗原病毒抗体单克隆试剂盒诊断

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利用丙酮酸脱氢酶复合物原核表达产物检测原发性胆汁性肝硬变患者血清自身抗体

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中华检验医学杂志 2004年第5期27卷 318-321页

作者：舒翠莉赵军李靖李伯安高蓉郑宇程云解放军第三○二医院传染病研究所免疫室北京100039

目的建立一种利用重组表达的丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位(PDC-E2)和E3结合蛋白(PDC-E3BP)检测原发性胆汁肝硬变(PBC)患者血清的方法。方法以适当的条件诱导PDC-E2和PDC-E3BP表达质粒pExSecI/PDC-E2和pET28/E3BP,利用表达产物通过酶联... 详细信息

目的建立一种利用重组表达的丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位(PDC-E2)和E3结合蛋白(PDC-E3BP)检测原发性胆汁肝硬变(PBC)患者血清的方法。方法以适当的条件诱导PDC-E2和PDC-E3BP表达质粒pExSecI/PDC-E2和pET28/E3BP,利用表达产物通过酶联免疫吸附试验检测PBC、正常人及其他原因肝硬变患者血清,并与欧盟的检测试剂盒比较。结果显示PDC-E2和PDC-E3BP表达产物检测PBC患者血清中的自身抗体阳性率为93.3％,与欧盟试剂盒比较,总符合率为98.03％。结论建立了利用重组表达丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位和E3结合蛋白检测PBC患者血清中自身抗体的方法,且获得PDC-E2和PDC-E3BP的高效表达产物。

关键词：丙酮酸脱氢酶复合物原核表达产物检测原发性胆汁性肝硬变血清自身抗体

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小儿慢性丙型肝炎外周血T细胞亚群和TH1／TH2型细胞因子的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第1期21卷 26-28页

作者：董漪张鸿飞陈昊李靖杨晓晋朱世殊程云解放军第三0二医院感染五科北京 100039 解放军第三0二医院传染病研究所免疫室北京 100039

目的通过研究小儿慢性丙型肝炎外周血T细胞亚群及TH1／TH2型细胞因子的表达，进一步探讨小儿慢性丙型肝炎的免疫发病机制。方法（1）流式细胞仪（FACS）检测16例慢性丙型肝炎患儿及10例正常对照外周血T细胞亚群。（2）将慢性丙型肝炎... 详细信息

目的通过研究小儿慢性丙型肝炎外周血T细胞亚群及TH1／TH2型细胞因子的表达，进一步探讨小儿慢性丙型肝炎的免疫发病机制。方法（1）流式细胞仪（FACS）检测16例慢性丙型肝炎患儿及10例正常对照外周血T细胞亚群。（2）将慢性丙型肝炎患儿和正常对照外周血单个核细胞（PBMC）体外培养72h后，用ELISA法检测培养上清中TH1型细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-12和TNF-γ）和TH2型细胞因子（IL-4、IL-10）的浓度。结果（1）CD4^＋细胞无明显变化。CD8^＋细胞与正常对照比较明显升高（P〈0．05）。CD3^＋细胞升高，CD4^＋／CD8^＋比值下降，但与正常对照比较无统计学意义（P〉0．05）。（2）PBMC培养上清中IFN-γ、IL-10和TNF-α的水平明显升高（P〈0．01），而没有检测到IL-2、IL-4、IL-12的基础分泌。结论慢性丙型肝炎患儿体内T淋巴细胞存在数量和功能的异常，CD8^＋细胞数升高，CD4^＋细胞功能异常，表现在以TH2型细胞因子的分泌为主。这可能与丙肝病毒（HCV）感染的慢性化有关。

关键词：儿童保健服务肝炎,丙型,慢性 T淋巴细胞细胞因子类

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慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者PBMC中TNF—α的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2009年第2期23卷 109-111页

作者：董漪张鸿飞朱世殊陈昊李靖程云解放军第三0二医院感染五科北京100039 解放军第三0二医院传染病研究所免疫室北京100039

目的通过研究慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者外周血单个核细胞（PBMC）中肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达，初步探讨慢性丙型肝炎患者合并非酒精性脂肪肝的发病机制。方法将20例慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者、20例单纯的慢性... 详细信息

目的通过研究慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者外周血单个核细胞（PBMC）中肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达，初步探讨慢性丙型肝炎患者合并非酒精性脂肪肝的发病机制。方法将20例慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者、20例单纯的慢性丙型肝炎患者及10例正常对照PBMC体外培养72h后，用ELISA法检测培养上清中TNF-α的浓度。结果（1）慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者组、单纯的慢性丙型肝炎患者组PBMC培养上清中TNF-α的水平较正常对照组明显升高（P〈0．05）。（2）慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝患者组PBMC培养上清中TNF-α的水平较单纯的慢性丙型肝炎患者组也明显升高（P〈0．01）。结论TNF—α是导致慢性丙型肝炎患者合并非酒精性脂肪肝的一个重要因素。

关键词：肝炎丙型慢性脂肪肝非酒精性肿瘤坏死因子

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腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移联合化疗药物治疗恶性淋巴瘤的研究

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中华肿瘤杂志 2002年第6期24卷 529-532页

作者：徐东平王福生 Takao Ohnuma 金磊解放军第三○二医院传染病研究所生物工程研究室北京100039 Division of Medical Oncoloty

目的　探讨腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移在体内外逆转肿瘤细胞中P 糖蛋白(P gp)介导的多重耐药性 (MDR)的作用。方法　构建并纯化制备了含有抗MDR1核酶基因的腺病毒Ad 196MDR1 Rz。在体外 ,用该重组腺病毒转导具有P gp介导的、MDR特... 详细信息

目的　探讨腺病毒介导的抗MDR1核酶基因转移在体内外逆转肿瘤细胞中P 糖蛋白(P gp)介导的多重耐药性 (MDR)的作用。方法　构建并纯化制备了含有抗MDR1核酶基因的腺病毒Ad 196MDR1 Rz。在体外 ,用该重组腺病毒转导具有P gp介导的、MDR特性的人淋巴瘤细胞株Daudi MDR2 0 ,并分别用RT PCR、FACS分析和MTT法测定核酶基因转导对Daudi MDR2 0细胞MDR1mRNA和膜表面P gp表达的影响及对长春新碱 (VCR)敏感性的改变 ;在体内 ,通过局部注入重组腺病毒联合VCR全身化疗 ,对接种Daudi MDR2 0细胞的SCID小鼠进行治疗观察。结果　在感染Ad 196MDR1 Rz后 ,Daudi MDR2 0细胞MDR1mRNA的表达被阻断 ,细胞膜表面P gp表达水平显著降低 ,细胞对VCR的敏感性增加。在接种Daudi MDR2 0细胞后 ,采用Ad 196MDR1 Rz联合VCR化疗的治疗组小鼠有6 6 .7% (6 9)未发生肿瘤 ,存活时间超过 12 0d ;而采用空载腺病毒联合VCR化疗或单纯VCR化疗的对照组小鼠 ,其长期存活率分别为 12 .5 % (1 8)和 0 (0 9) ,两组差异有极显著性。结论　Ad 196MDR1 Rz能有效阻断Daudi MDR2 0细胞膜表面P gp表达 ,并恢复肿瘤细胞对VCR的敏感性。体内联合VCR化疗能有效抑制肿瘤的发生。

关键词：腺病毒介导抗MDR1核酶基因化疗药物恶性淋巴瘤多药耐药性基因转导

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慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前PBMC细胞因子的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第5期22卷 364-366页

作者：董漪张鸿飞陈昊李靖杨晓晋朱世殊程云解放军第三○二医院感染五科北京100039 传染病研究所免疫室

目的研究准备抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者的免疫特点。方法将30例慢性丙型肝炎患者和10例正常对照外周血单个核细胞（PBMC）体外培养72h后，用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的浓度。结果（... 详细信息

目的研究准备抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者的免疫特点。方法将30例慢性丙型肝炎患者和10例正常对照外周血单个核细胞（PBMC）体外培养72h后，用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的浓度。结果（1）慢性丙型肝炎患者PBMC培养上清中IFN-γ、IL-10和TNF-α的水平明显升高（P〈0．05），没有检测到IL-2、IL-4、IL-12的基础分泌。（2）不同病情患者间的细胞因子的分泌水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论慢性丙型肝炎患者体内TH2型细胞因子的分泌占优势。提示通过调整TH1／TH2失衡可能达到抗病毒治疗目的。

关键词：肝炎丙型慢性细胞因子类外周血单个核细胞

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