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中华医学杂志 2018年第3期98卷 171-175页

作者：黄海燕肖漓毕丽丽高钰孔祥瑞杜若李彬钰韩永张文慧石炳毅解放军第三0九医院全军器官移植研究所器官移植与免疫调节北京市重点实验室 100091

目的探讨移植后病毒感染患者人群体液中存在的病毒颗粒和核酸物质是否会存在于提取的外泌体样品中。方法选取2015年1月至2017年7月于解放军第三。九医院全军器官移植中心行同种异体肾脏移植手术的受者10例，其中白细胞人巨细胞病毒（HCM... 详细信息

目的探讨移植后病毒感染患者人群体液中存在的病毒颗粒和核酸物质是否会存在于提取的外泌体样品中。方法选取2015年1月至2017年7月于解放军第三。九医院全军器官移植中心行同种异体肾脏移植手术的受者10例，其中白细胞人巨细胞病毒（HCMV）-pp65抗原检测阳性，同时血浆HCMVDNA检测结果为阳性或可疑阳性的病例5例，血浆BK病毒（BKV）DNA检测结果为阳性的病例5例。用试剂盒法提取血浆外泌体，电镜和纳米颗粒粒度分析仪（NTA）观察和分析外泌体。用实时荧光定量PCR分别检测并比较血浆、外泌体和流出液中的病毒DNA拷贝数。结果电镜下可见样本中的外泌体样囊泡结构，NTA检测样品浓度为（1．2～4．5）X10^11颗粒／Ⅱd，颗粒直径30～200nm。外泌体与血浆病毒DNA定量结果基本在同一数量级，而流出液中急遽降低。结论病毒DNA在移植后病毒感染患者外泌体样品中被大量检测出来，不仅提示了病毒传播可能利用了外泌体的生物形成过程，更提醒了现有的外泌体提取方式的局限性可能是病毒感染患者人群中外泌体研究的瓶颈。

关键词：肾移植巨细胞病毒 BK病毒外泌体

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供者特异性抗体与抗体介导的排斥反应

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中华医学杂志 2018年第3期98卷 161-163页

作者：石炳毅袁清解放军第三0九医院全军器官移植研究所北京市器官移植和免疫调节重点实验室 100091

抗体介导的排斥反应（AMR）是影响移植肾长期存活的最主要的危险因素，其关键在于供者特异性抗体．（DSA）的产生和效应，尤其是术后新生的DSA（dnDSA）。近期国际上对dnDSA的风险分层、

关键词：特异性抗体排斥反应抗体介导供者危险因素长期存活移植肾

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基于16SrDNA高通量测序技术对肾移植术前后肠道菌群变化的研究

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中华实验外科杂志 2019年第1期36卷 150-153页

作者：李钢贺腾辉罗用文唐倩解俊杰李超药晨孙忠蔚李昆柏宏伟王洪阳陈荣刘双刘兆宇肖征张晓石炳毅钱叶勇宋阳解放军第三0九医院全军器官移植研究所暨北京市器官移植与免疫调节重点实验室北京100091 解放军第三0九医院检验科北京100091 青岛大学附属医院肾移植科 266071 解放军总医院检验医学中心北京100853 解放军总医院海南分院检验科三亚572013

目的探讨肾移植患者手术前、后肠道菌群的变化。方法根据纳入排除标准选取在解放军第309医院全军器官移植研究所行肾移植手术的7例患者作为研究对象,收集术前3 d内及术后第21天共计14份粪便标本,提取标本中原核生物全基因组后采用16S r... 详细信息

目的探讨肾移植患者手术前、后肠道菌群的变化。方法根据纳入排除标准选取在解放军第309医院全军器官移植研究所行肾移植手术的7例患者作为研究对象,收集术前3 d内及术后第21天共计14份粪便标本,提取标本中原核生物全基因组后采用16S rDNA高通量测序方法分析菌群结构。结果在门分类水平上,肾移植术后较术前,变形菌门相对丰度显著升高(P<0.01),厚壁菌门相对丰度下降(P>0.05);在纲、目、科、属分类水平上,相对丰度增加的菌属包括隶属于厚壁菌门的芽孢杆菌纲(P<0.05)及其所属的乳杆菌目(P<0.05)和肉杆菌科、颗粒链菌属;减少的菌属包括隶属于厚壁菌门梭菌纲梭菌目的毛螺旋菌科、胃瘤球菌科、真细菌属、粪球菌属以及隶属于放线菌门的红蝽菌目。术后组Shannon指数较术前呈降低趋势(P>0.05,Wilcoxon符号秩检验)。主坐标分析(PCoA)显示术前组的各标本间距离小于术后组各标本间距离,且术后组各标本在坐标中呈散在分布。结论肾移植术后肠道菌群的改变主要包括:多样性较术前呈减少趋势;变形菌门相对丰度升高,厚壁菌门相对丰度降低。由于肠道菌群结构具有高度的个体差异,不太可能以某种特定细菌类别作为统一适用于移植术后并发症的诊断标志物。但是,纵向来看,每个移植患者肠道菌群变化所遵循的规律有可能预示移植术后患者的健康或疾病状态,并指导移植术后的治疗策略。

关键词：肠道菌群肾移植 16S rDNA

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亲属活体肾移植受者术后新发糖尿病的危险因素及预后影响

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中华器官移植杂志 2018年第8期39卷 454-460页

作者：徐俊楠许亮韦星袁清李响蔡明解放军第三○九医院全军器官移植研究所泌尿外科北京市器官移植与免疫调节重点实验室北京100091

目的探讨亲属活体肾移植术后新发糖尿病(PTDM)的危险因素及其对预后的影响。方法回顾性分析2009至2013年273例接受亲属活体肾移植受者的临床资料,根据PTDM诊断标准,将受者分为PTDM组和非PTDM组。利用单因素初筛潜在危险因素后纳入logis... 详细信息

目的探讨亲属活体肾移植术后新发糖尿病(PTDM)的危险因素及其对预后的影响。方法回顾性分析2009至2013年273例接受亲属活体肾移植受者的临床资料,根据PTDM诊断标准,将受者分为PTDM组和非PTDM组。利用单因素初筛潜在危险因素后纳入logistic回归模型进行多因素分析。比较两组间不良事件发生率,同时通过Kaplan-Meier生存曲线并进行Log-rank检验分析受者和移植物的存活情况。结果在术后5年随访期内,PTDM发生率为22.71%(62/273)。经单因素分析和多因素分析,结果显示,体重指数≥25(OR为3.911,95%可信区间为1.811~8.445),男性(OR为2.291,95%可信区间1.184~4.436),家族糖尿病史(OR为3.225,95%可信区间1.4477.186),急性排斥反应(OR为4.481,95%可信区间1.908~10.522),使用他克莫司(OR为3.678,95%可信区间1.807~7.483),以及术后1周出现空腹血糖受损(IFG)(OR为3.925,95%可信区间1.997~7.716)。术后PTDM组感染发生率为16.12%,显著高于非PTDM组的7.11%(P=0.045);而两组受者间CVD、蛋白尿、排斥反应发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。PTDM组和非P1、DM组术后5年受者存活率分别为85.71%和88.48%(P=0.52);移植物存活率分别为71.43%和78.10%(P=0.23),剔除死亡受者后移植物存活率分别为83.33%和89.47%(P=0.21)。结论高体重指数、家族糖尿病病史、男性、使用他克莫司、急性排斥反应病史、术后第1周出现IFG是亲属活体肾移植受者术后发生PTDM的独立危险因素。发生PTDM会增加术后感染的风险,但对术后5年内受者和移植物的存活率无明显影响。

关键词：肾移植术后糖尿病危险因素

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肾移植:从质量控制到质量提升计划

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中华移植杂志（电子版） 2018年第3期12卷 97-101页

作者：石炳毅刘志佳解放军第三〇九医院全军器官移植研究所北京市器官移植和免疫调节重点实验室北京100091

目前,医院之间的医疗设备、医疗技术差距正在缩小,而以疗效为核心的医疗质量差距逐渐成为全社会关注的焦点,也是当前医疗供给侧改革的重点之一。开展肾移植质量控制的目的是缩小各中心医疗质量差距,全面提升肾移植质量。在初步建立我国... 详细信息

目前,医院之间的医疗设备、医疗技术差距正在缩小,而以疗效为核心的医疗质量差距逐渐成为全社会关注的焦点,也是当前医疗供给侧改革的重点之一。开展肾移植质量控制的目的是缩小各中心医疗质量差距,全面提升肾移植质量。在初步建立我国肾移植数据库之后,除原有的医学指标评估外,借鉴美国经验,在肾移植质量控制工作中开展前瞻性的质量提升计划,其核心是准确性、前瞻性、包含多种临床结局的临床数据库,将肾移植带入信息化、大数据、多中心合作的时代,为移植受者提供更高质量的医疗服务,实现从医学质量评价(控制)到医疗质量提升的良性循环,不断推进我国肾移植事业的发展。

关键词：肾移植质量控制质量提升医疗质量

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膜型HLA-G及其受体的表达与肾移植术后排斥反应以及CMV活动性感染的相关性

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中华医学杂志 2017年第2期97卷 104-107页

作者：毕丽丽高钰孙玉洁孔祥瑞何秀云马锡慧张文慧肖漓石炳毅解放军第三〇九医院全军器官移植研究所北京市器官移植与免疫调节重点实验室北京100091

目的研究膜型人类白细胞抗原G（mHLA－G）及其受体免疫球蛋白样转录物2（ILT2）在淋巴细胞上的表达率与肾移植术后发生排斥反应和巨细胞病毒（CMV）感染的相关性。方法选取2014年2月至2016年2月解放军第三〇九医院全军器官移植中心施行... 详细信息

目的研究膜型人类白细胞抗原G（mHLA－G）及其受体免疫球蛋白样转录物2（ILT2）在淋巴细胞上的表达率与肾移植术后发生排斥反应和巨细胞病毒（CMV）感染的相关性。方法选取2014年2月至2016年2月解放军第三〇九医院全军器官移植中心施行初次肾移植受者88例，按照术后是否单纯发生排斥反应，将受者分为排斥反应组（12例）和肾功能稳定组（41例）；肾移植术后未发生排斥反应，仅单纯发生CMV活动性感染为CMV阳性组（24例）；肾移植术后未发生排斥反应，曾经发生CMV活动性感染，后又转阴的受者为CMV阴性组（11例）。通过流式细胞术检测mHLA－G、ILT2在T、B淋巴细胞的表达，分析不同组间差异。结果肾移植术后发生排斥反应时T、B淋巴细胞mHLA－G的表达率最低（0.42%±0.35%、0.88%±0.47%），与肾功能稳定组、CMV阳性组差异均有统计学意义（均P〈0.01）；而在CMV阳性组（CMV活动性感染时），T、B淋巴细胞mHLA－G的表达率最高（1.31%±0.69%、2.01%±0.91%），与排斥反应组差异有统计学意义（均P〈0.001）；B淋巴细胞mHLA－G的表达率在CMV阳性组与CMV阴性组差异有统计学意义（P〈0.05）。B淋巴细胞ILT2表达率在4组间差异无统计学意义（P〉0.05），T细胞ILT2的表达率在CMV阳性组较高（36.91%±14.91%），与其余3组间差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论肾移植受者术后mHLA－G在T、B淋巴细胞的表达过低容易发生排斥反应。mHLA－G和ILT2在淋巴细胞表达过高容易发生CMV活动性感染。

关键词：肾移植 HLA抗原移植物排斥巨细胞病毒感染免疫球蛋白样转录物

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国内外肾移植领域近期研究热点

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中华医学杂志 2017年第2期97卷 81-84页

作者：石炳毅袁清解放军第三〇九医院全军器官移植研究所北京市器官移植与免疫调节重点实验室北京100091

1954年美国外科医师Murry成功完成了世界上第一例肾移植手术，开辟了器官移植的新纪元。1960年我国吴阶平院士率先实施了中国第一例人体肾移植。在这60多年的发展历程中，国内外肾移植取得了许多突破性进展，但仍然存在诸多领域有待肾... 详细信息

1954年美国外科医师Murry成功完成了世界上第一例肾移植手术，开辟了器官移植的新纪元。1960年我国吴阶平院士率先实施了中国第一例人体肾移植。在这60多年的发展历程中，国内外肾移植取得了许多突破性进展，但仍然存在诸多领域有待肾移植同道们的深入探究。本文就肾移植近期的研究热点进行概述。

关键词：肾移植手术国内外外科医师器官移植吴阶平

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磺胺药物使用对肾移植术后肠道菌群结构的影响

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中华实验外科杂志 2018年第12期35卷 2208-2211页

作者：李钢药晨解俊杰李超唐倩罗用文贺腾辉孙忠蔚李昆柏宏伟王洪阳陈荣刘双刘兆宇肖征张晓石炳毅钱叶勇宋阳解放军第三〇九医院全军器官移植研究所暨北京市器官移植与免疫调节重点实验室北京100091 解放军第三〇九医院检验科北京100091 青岛大学附属医院肾移植科 266071 解放军总医院检验医学中心北京100853 解放军总医院海南分院检验科三亚572013

目的观察肾移植术后磺胺药物使用对移植患者肠道菌群结构的影响。方法根据纳入排除标准选取在解放军第309医院全军器官移植研究所行肾移植手术的10例患者作为研究对象,收集每例患者术前3d内及术后第30天的粪便样本各1份,共计20份粪便标... 详细信息

目的观察肾移植术后磺胺药物使用对移植患者肠道菌群结构的影响。方法根据纳入排除标准选取在解放军第309医院全军器官移植研究所行肾移植手术的10例患者作为研究对象,收集每例患者术前3d内及术后第30天的粪便样本各1份,共计20份粪便标本,提取标本中原核生物全基因组后采用16SrDNA高通量测序方法分析菌群结构。结果使用磺胺药物后的OTU数量仅为术前OTU数量的50%,差异有统计学意义(P=0.003);门水平:术前检测到10个菌门的细菌,而术后使用磺胺药物后仅检测到8个菌门的细菌,各类菌门丰度同样也在前后发生了显著的变化,厚壁菌门和拟杆菌门的平均相对丰度分别由术前73.20%和10.64%下降到了使用磺胺使用后的50.17%和3.13%,而变形菌门平均相对丰度由术前13.79%上升至了磺胺使用后的42.87%;属水平:术前肠道内丰度最高的20类细菌多为文献已报道或研究已表明的人体正常的共生菌,而使用磺胺类药物后肠道内丰度最高的20类细菌新出现的菌种却大多为致病菌。结论磺胺类药物在移植术后的使用会明显破坏肠道菌群结构,一些共生菌和益生菌的种类明显减少,致病菌反而增加,甚至对肠道免疫和肠黏膜屏障功能也可能存在影响,这些都不同程度的增加了二次感染的风险。

关键词：肾移植磺胺肠道菌群 16S rDNA

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相对定量分析异烟肼、链霉素单耐药与多耐药结核分枝杆菌临床分离株的蛋白质组差异

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微生物学报 2018年第7期58卷 1182-1190页

作者：朱传智赵雁林黄香玉逄宇庄玉辉何秀云解放军第三〇九医院器官移植与免疫调节北京市重点实验室北京100091 首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所分子生物学实验室耐药结核病研究北京市重点实验室北京101149 中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心国家结核病参比实验室北京102206

【目的】探讨异烟肼(isoniazid,INH)、链霉素(streptomycin,SM)单耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)与INH/SM多耐药MTB蛋白质组差异。【方法】应用i TRAQ结合Nano LC-MS/MS定量蛋白质组学技术,分析临床分离INH、SM或INH/SM耐药MTB与H37Rv标准株间均表达差异蛋白;并以INH/SM耐药MTB与H37Rv比值为对照,相对定量分析单耐药与多耐药MTB蛋白表达差异倍数;运用DAVID 6.7分析差异蛋白生物功能;STITCH 5.0分析差异蛋白与INH和SM相互作用。【结果】与H37Rv标准株比较,58个蛋白在INH、SM耐药与INH/SM耐药MTB间均有表达差异,共同差异蛋白生物功能主要为氧化还原酶活性和转移酶活性;主要参与丙酸代谢信号通路。共同差异蛋白中,与INH/SM耐药MTB比较,Rv2986c和Rv1908c在INH、SM耐药MTB均表达上调>1.25倍;Rv3133c和Rv0577则均表达下调<0.7倍;生物信息学预测发现以上4种蛋白可直接或间接与INH、SM进行相互作用。【结论】INH、SM单耐药和INH/SM多耐药MTB蛋白表达谱有较大差异,蛋白Rv2986c、Rv1908c、Rv3133c和Rv0577表达水平及相互作用可能与INH和SM耐药有关。

关键词：结核分枝杆菌异烟肼链霉素定量蛋白质组

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人类白细胞抗原-G1蛋白纯化及其免疫耐受机制初探

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实用器官移植电子杂志 2017年第2期5卷 112-115页

作者：毕丽丽孙玉洁孔祥瑞高钰马锡慧韩永肖漓石炳毅解放军第三0九医院全军器官移植研究所北京市器官移植与免疫调节重点实验室北京100091

目的原核体系诱导表达并纯化人类白细胞抗原-G1(human leukocyte antigen-G,HLA-G1)蛋白,研究HLA-G1分子对人B淋巴细胞内白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达水平的影响,进而探究HLA-G1在肾移植受者中B细胞介导的免疫耐受机制。方... 详细信息

目的原核体系诱导表达并纯化人类白细胞抗原-G1(human leukocyte antigen-G,HLA-G1)蛋白,研究HLA-G1分子对人B淋巴细胞内白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达水平的影响,进而探究HLA-G1在肾移植受者中B细胞介导的免疫耐受机制。方法通过原核表达体系,构建表达并纯化HLA-G1蛋白,经过蛋白免疫印迹试验(Western Blot)鉴定后,与人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)共培养,利用流式细胞仪检测B淋巴细胞内IL-10的表达情况。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)、Western Blot结果表明,纯化后的蛋白分子量大小约为38.2 kDa,符合HLA-G1蛋白的分子量;人PBMC与HLA-G1蛋白共培养后,随着HLA-G1蛋白浓度的升高(浓度梯度:0、50、100和200 ng/ml),B细胞内IL-10的表达水平明显增加,分别为0.1%、0.36%、0.57%、0.73%。结论通过原核表达系统获得HLA-G1蛋白,纯度达95%以上,HLA-G1蛋白与人PBMC共培养后,可诱导B淋巴细胞表达IL-10,并具有浓度依赖性,提示其对肾移植免疫耐受的建立具有重要作用。

关键词：肾移植人类白细胞抗原-G1蛋白纯化 B淋巴细胞白细胞介素-10 免疫耐受

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