检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2001年第3期17卷 37-39页

作者：成军夏小兵王刚刘妍钟彦伟王琳杨继珍解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心

目的　克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。... 详细信息

目的　克隆杜氏利什曼原虫 (Leishmaniadonovani,Ld) 1S株蛋白磷酸酶 2C(PP2C)的编码基因 ,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法　体外培养杜氏利什曼原虫 1S株无鞭毛体 ,常规方法从虫体提取制备基因组DNA。以夏科氏利什曼原虫 (Leishmaniachagasi,Lc)的PP2C基因序列为参照 ,设计并合成利什曼原虫PP2C基因序列特异性的引物。结果　以杜氏利什曼原虫的基因组为模板 ,利用多聚酶链反应 (PCR)技术 ,扩增获得了杜氏利什曼原虫PP2C的全长编码基因。基因序列测定结果表明 ,杜氏利什曼原虫 1S株PP2C基因序列长度为 1317bp ,开放读码框架由 12 2 1bp组成 ,编码产物为 40 6个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫 1S株的PP2C基因与来源于夏科氏利什曼原虫的PP2C氨基酸残基序列的同源性为 95 % (387/ 40 6 )。结论　本研究克隆了杜氏利什曼原虫的PP2C基因。

关键词：杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶2C 基因疫苗 T细胞抗原基因克隆化序列分析

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亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的克隆化与序列分析

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中国地方病学杂志 2001年第3期20卷 175-177页

作者：成军钟彦伟刘妍杨继珍董菁解放军第三二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　克隆亚马逊利什曼原虫 (***)无鞭毛体蛋白 (am astin)的编码基因 ,并对其同源基因序列进行分析。方法　根据我们首次克隆的硕大利什曼原虫 (L.m ajor)无鞭毛体蛋白的编码基因 ,设计并合成核苷酸序列特异性引物 ,以亚马逊利什曼原... 详细信息

目的　克隆亚马逊利什曼原虫 (***)无鞭毛体蛋白 (am astin)的编码基因 ,并对其同源基因序列进行分析。方法　根据我们首次克隆的硕大利什曼原虫 (L.m ajor)无鞭毛体蛋白的编码基因 ,设计并合成核苷酸序列特异性引物 ,以亚马逊利什曼原虫基因组 DNA为模板 ,以多聚酶链反应 (PCR)技术扩增无鞭毛体蛋白的编码基因 DNA片段 ,并进行核苷酸序列测定以及核苷酸序列的同源性分析。结果　克隆了亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因 ,含有单一开放读框 ,长度为 5 5 2 bp,编码的无鞭毛体蛋白由 183个氨基酸残基 (aa)组成。亚马逊利什曼原虫与硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白编码基因之间高度同源 ,在核苷酸与氨基酸残基序列水平上的同源性分别为 96 %和 94%。

关键词：利什曼原虫无鞭毛体基因克隆化序列分析

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分子灯塔技术及其在基因检测研究中的应用

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中华检验医学杂志 2001年第2期24卷 118-120页

作者：洪源成军杨守纯北京解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心 100039

　　分子灯塔(Molecular beacons)是近年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术，由纽约市公共健康研究协会的Tyagi等［1］于1996年首先建立。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光，故称为“分子灯塔”。它的... 详细信息

　　分子灯塔(Molecular beacons)是近年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术，由纽约市公共健康研究协会的Tyagi等［1］于1996年首先建立。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光，故称为“分子灯塔”。它的建立为研究核酸分子的组成、含量及对PCR过程中进行实时监测提供了快速、特异、方便的新方法，在基因检测领域有着广阔的应用前景。现试就其构成、原理、热力学特性、优缺点及在基因检测中的应用作一简要综述。　　一、分子灯塔的构成、原理及热力学特性　　分子灯塔是具有“发夹”样结构的单链寡核苷酸探针，一般为含20～30个核苷酸的2部分组成：环状部分及茎部。环状部分为单链核酸，与目标链形成特异的互补结合，茎部的2条核苷酸链互补，形成双链分子，大多含有5对碱基。茎部的末端分别与荧光素(5′端)和淬火物质(3′端)结合，淬火物质大多为4-4′二甲氮基苯偶氮苯甲酸，荧光素和淬火物质因研究目的不同可自行设计。茎部的双链互补结构使末端的荧光素和淬火物质紧靠在一起，因荧光素共振能量转移［2］作用而使荧光被吸收，这样荧光素就不能发光。当分子灯塔的环状部分与目标链特异性结合时，所形成的杂交分子比茎部双链结构更稳定，它的刚性使茎部双链分子分离，也就使荧光素和淬火物质相分离，通过自发构型重组作用，在室温下就可使荧光素发光得以恢复，通过荧光仪或合适配置的显微镜可观察到。在分子灯塔与目标链结合的过程中，因环境温度的不同，存在着3种不同的状态：在低温时与目标链结合，即为结合态，当温度升高至42℃时，分子灯塔与目标链的复合物变性，成为“发夹”样结构，导致荧光强度的下降。当温度升高至54℃时，出现茎部结构的变性，分子灯塔成为松散的随机卷曲状态，荧光强度上升。相比之下，如果分子灯塔与目标链有一个核苷酸不能互补，则解链温度要相应地下降约14℃［3］。

关键词：分子灯塔技术基因检测构成原理热力学特性

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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

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中国病毒学 2001年第3期16卷 220-223页

作者：成军施双双钟彦伟夏小兵王刚王琳刘妍陈菊梅解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有H... 详细信息

利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV E2 ScFv基因的噬菌体克隆 ,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经Ncol/NotI酶切鉴定后 ,该ScFv基因由 75 0bp组成 ,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV E2 ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性 ,对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表述的HCV E2 ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV E2 ScFv的分子量为 2 8kD。为应用HCV E2 ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白单链可变区抗体表达大肠杆菌

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抗HBsAg人源单链可变区抗体的筛选与可溶性抗体的表达

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中国病毒学 2001年第2期16卷 105-108页

作者：钟彦伟成军施双双夏小兵李克董菁刘妍杨继珍解放军三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

采用噬菌体表面展示技术 ,以从乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附洗脱扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv... 详细信息

采用噬菌体表面展示技术 ,以从乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附洗脱扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv)克隆并提取质粒 ,经SfiⅠ /NotⅠ酶切鉴定后 ,亚克隆到 pCANTAB5E表达载体中 ,转化大肠杆菌XL1 Blue。经IPTG诱导后 ,表达的可溶性HBsAg特异性ScFv以 5 0 %硫酸胺沉淀 ,经SDS PAGE电泳表明 ,XL1 Blue中表达的HBsAg可溶性ScFv的分子量约 2 8kD。免疫活性检测结果表明 ,该单链抗体具有较强的抗原结合活性和特异性。HBsAg人源单链抗体的筛选和表达成功 ,为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。

关键词： HBsAg 噬菌体单链抗体筛选表达 HBV

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外周血中乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白基因的克隆化与序列分析

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中华肝脏病杂志 2001年第3期9卷 163-165页

作者：董菁成军王勤环王刚施双双刘妍夏小兵斯崇文解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京大学第一医院感染疾病科

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法采用特异性引物设计，以多聚酶链反应（ＰＣＲ）自患者血清中扩增全Ｓ基因片段，测序以明确变异的部位，并与既往已发表的ＨＢＶａｄｒ亚型进行序列比较。结果经... 详细信息

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性感染者体内存在的特殊状态。方法采用特异性引物设计，以多聚酶链反应（ＰＣＲ）自患者血清中扩增全Ｓ基因片段，测序以明确变异的部位，并与既往已发表的ＨＢＶａｄｒ亚型进行序列比较。结果经测序发现慢性ＨＢＶ感染者体内存有变异病毒株编码的截短型表面抗原中蛋白基因，并存有ＨＢｓＡｓ和多聚酶区缺陷型病毒基因。结论在外周血中存在ＨＢＶ截短型囊膜蛋白编码基因，可能与患者不良预后有关。

关键词：乙型肝炎病毒截短型囊膜蛋白聚合酶链反应突变准种克隆序列分析

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大鼠肝再生增强因子假基因的克隆化与序列分析

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中华肝脏病杂志 2001年第2期9卷 105-107页

作者：董菁成军刘友昭王勤环王刚施双双斯崇文解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 北京大学第一医院感染疾病科

目的　研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆ　ｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法　以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）... 详细信息

目的　研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆ　ｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法　以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，连入ｐＧＥＭＴｅａｓｙＶｅｃｔｏｒ后测序。结果ＰＣＲ法扩增出两条产物，其一经测序发现为ＡＬＲ的假基因，预测氨基酸序列与ＡＬＲ的同源性为８８．８％。结论　作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子，大鼠ＡＬＲ存在假基因，提示可能存在ＡＬＲ多基因家族。为研究ＡＬＲ分子的进化规律提供了依据。

关键词：肝再生多聚酶链反应假基因克隆序列分析

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乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白与白细胞介素18联合核酸免疫HBV表面抗原转基因小鼠的实验研究

乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白与白细胞介素18联合核酸免疫HBV...

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白真核表达载体并免疫小鼠,并观察同时接种白细胞介素18(IL-18)质粒对基因免疫的辅助作用.方法:构建并验证质粒pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18,肌注C57HBsAg转基因小鼠;3组小鼠分别注射100μg pVR101... 详细信息

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原中蛋白真核表达载体并免疫小鼠,并观察同时接种白细胞介素18(IL-18)质粒对基因免疫的辅助作用.方法:构建并验证质粒pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18,肌注C57HBsAg转基因小鼠;3组小鼠分别注射100μg pVR1012(4只),pVR1012-M(7只),pVR1012-M和pcDNA3.1-IL-18质粒(7只),每2周1次,共3次.每次免疫2周后眼眶采血,检测血清抗-HBs、HBsAg和丙氨酸氨基转移酶(ALT),并对肝脏进行病理学检查.结果:免疫后未检测出

关键词： HBV 乙型肝炎病毒核酸免疫白细胞介素

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乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测的初步研究

乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测的初步研究

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

目的:以乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)变异来探讨HBV准种在慢性感染者中的存在意义.方法:以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV CP序列,克隆入pGEM Teasy质粒,随机... 详细信息

目的:以乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)变异来探讨HBV准种在慢性感染者中的存在意义.方法:以中国株HBV基因序列为依据,设计特异性多聚酶链反应(PCR)引物,自9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV CP序列,克隆入pGEM Teasy质粒,随机挑选37克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度.结果:测序结果发现HBV CP序列是变异的高发区,在直接重复序列(DR)I上

关键词：乙型肝炎病毒 HBV 初步研究基因启动子异质性

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乙型肝炎病毒逆转录酶区基因序列准种与变异特点研究

乙型肝炎病毒逆转录酶区基因序列准种与变异特点研究

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中华医学会第七次全国感染病学术会议

以乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶(P)逆转录酶(RT)区及表面抗原主蛋白(HBsAg)序列异质性来探讨对HBV准种群状态.多聚酶链反应(PCR)方法自3例慢性HBV患者血清中扩增靶基因,克隆入T载体,随机挑选13株克隆测序发现:2株克隆出现大段缺失,另11株序... 详细信息

以乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶(P)逆转录酶(RT)区及表面抗原主蛋白(HBsAg)序列异质性来探讨对HBV准种群状态.多聚酶链反应(PCR)方法自3例慢性HBV患者血清中扩增靶基因,克隆入T载体,随机挑选13株克隆测序发现:2株克隆出现大段缺失,另11株序列之间总差异率为5.1%,RT和HBsAg氨基酸序列差异率分别为4.9%和7.5%,并发现缺失突变、终止突变等多种突变类型.结果提示HBV慢性患者体内有HBV准种群,并存在缺陷型HBV病毒.

关键词：乙型肝炎病毒变异特点 HBV 基因序列

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