检索结果-内蒙古大学图书馆

胃肠病学和肝病学杂志 2008年第7期17卷 591-593页

作者：白文林刘妍楼敏徐东平解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第302医院感染8科北京100039

目的对丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A)反式激活靶基因1(NS4ATP1)进行生物信息学分析,并进行原核表达。方法应用生物信息学方法对NS4ATP1基因编码产物进行分析。设计并合成序列特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增NS4ATP1基因,产物... 详细信息

目的对丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A)反式激活靶基因1(NS4ATP1)进行生物信息学分析,并进行原核表达。方法应用生物信息学方法对NS4ATP1基因编码产物进行分析。设计并合成序列特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增NS4ATP1基因,产物克隆入原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),以0.1 mol/L IPTG诱导,SDS-PAGE和West-ern Blot方法检测NS4ATP1在原核细胞中的表达。结果NS4ATP1定位于染色体3q12.2,其氨基酸含有3个N端糖基化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点、9个酪蛋白激酶II磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和4个N端酰基化位点。利用pET32a(+)原核表达载体和相应的BL21(DE3)菌株,在体外成功表达了57.0 kDa的NS4ATP1与His标签的融合蛋白。结论生物信息学技术可以全面分析新基因NS4ATP1的染色体定位及潜在的功能位点。新基因NS4ATP1在大肠杆菌中成功表达,为进一步研究其生物学功能提供平台。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白4A 反式激活生物信息学原核表达

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抗人红细胞抗体和HIV抗原融合蛋白的构建及活性鉴定

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第1期21卷 76-78页

作者：胡燕杨健洋朱雷侯俊沈宏辉貌盼勇解放军第三0二医院传染病研究所病毒研究室北京100039

目的构建及表达抗红细胞（RBC）单链抗体（ScFv）和HIV抗原的融合蛋白，并做活性测试。方法将鼠抗人红细胞单链抗体可变区重链、轻链基因与HIV抗原基因相连，重组于高效表达载体中，并在大肠埃希菌中表达。结果经ELISA检测和红细胞... 详细信息

目的构建及表达抗红细胞（RBC）单链抗体（ScFv）和HIV抗原的融合蛋白，并做活性测试。方法将鼠抗人红细胞单链抗体可变区重链、轻链基因与HIV抗原基因相连，重组于高效表达载体中，并在大肠埃希菌中表达。结果经ELISA检测和红细胞凝集检测，证明表达的融合蛋白具有HIV抗原和抗人红细胞的双重活性，可使含有HIV抗体的红细胞悬液凝集。结论融合蛋白构建成功，可用于HIV的快速检测。

关键词：融合蛋白 HIV 凝集试验

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HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测试剂盒的研制与评价

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第4期21卷 391-393页

作者：胡燕侯俊冯燕青冯长访史素娟沈宏辉王志杰王保君貌盼勇解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室 100039 解放军第三○二医院传临床检验中心 100039 北京科卫临床诊断试剂有限公司

目的研制HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测酶免疫试剂盒并评价其实用性。方法联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,研制了联合检测H... 详细信息

目的研制HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测酶免疫试剂盒并评价其实用性。方法联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,研制了联合检测HIV1/2抗体和P24抗原的ELISA诊断试剂,并对其特异性、敏感性、稳定性等进行评价和临床考评。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0.2ng/ml;与雅培公司试剂比较检测78份AIDS患者血清和85份正常人血清、对照检测中国药品生物制品检定所研制的HIV参比血清,特异度和灵敏度均为100%。临床考核检测12051份各种血清,灵敏度为100%(543/543),特异度为99.48%(11448/11508)。试剂在37℃放置6d后,试验结果无明显差异。结论本试剂盒具备特异度强、敏感度高、稳定性好、操作简便等优点,可以一步检出HIV特异性抗体和HIVP24抗原,缩短了HIV感染的检测窗口期,适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。

关键词： HIV 抗原病毒抗体单克隆试剂盒诊断

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HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体相互作用位点的确定

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中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2007年第2期1卷 68-71页

作者：程勇前王琳成军刘妍徐东平钟彦伟李晓东戴久增解放军第三二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal... 详细信息

目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal的酵母四缺培养基上培养观察。结果转化了CAML不同剪接体及CAML缺失突变体pGADT7/CAML-1-211,pGADT7/CAML-1-57的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上均有菌落生长,并且菌落呈现蓝色。转化了CAML缺失突变体pGADT7/CAML-58-211,pGADT7/CAML-234-296的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上未见菌落生长。结论HCVNS4A与CAML的相互结合位点位于CAML的N-末端1～57位氨基酸残基,CAML不同剪接体与HCVNS4A均可以相互结合。

关键词：丙型肝炎病毒钙离子信号调节亲环素配体结合位点

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自身免疫性肝炎新型抗原分子高迁移率族蛋白B1的克隆表达鉴定及蛋白纯化

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实用预防医学 2007年第1期14卷 53-56页

作者：赵擎辛绍杰胡燕侯俊貌盼勇解放军军医进修学院北京100853 解放军第三O二医院感染三科解放军第三O二医院传染病研究所病毒研究室

目的获得高纯度的人高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1),为制备单克隆抗体及研究其与自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的关系打基础。方法应用PCR从乳腺文库中扩增得到HMGB1基因片段,并将其克隆到pET2... 详细信息

目的获得高纯度的人高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1),为制备单克隆抗体及研究其与自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的关系打基础。方法应用PCR从乳腺文库中扩增得到HMGB1基因片段,并将其克隆到pET28a(+)载体上,对获得的pET28a(+)-HMGB1重组质粒扩增后进行PCR、酶切和测序鉴定。将鉴定完全正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析和Western blotting鉴定。最后进行大量诱导并纯化,得到带His标签的HMGB1蛋白。结果成功构建pET28a(+)-HMGB1重组质粒,并经诱导表达,得到了纯化的His-HMGB1蛋白。结论构建pET28a(+)-HMGB1重组质粒并得到其表达蛋白,为今后深入研究HMGB1在AIH中的作用机理提供有力的实验工具。

关键词：高迁移率族蛋白B1 自身免疫性肝炎克隆表达蛋白纯化

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病毒感染相关microRNA的研究进展

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胃肠病学和肝病学杂志 2007年第1期16卷 90-94页

作者：刘妍徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

MicroRNA(miRNA)是继小干涉RNA(siRNA)后新发现的一类调节基因表达的小分子单链非编码RNA,虽然长度只有－22个核苷酸(nt)大小,却能够广泛参与细胞分化、增殖、凋亡、代谢以及肿瘤发生等多种生物学过程,在转录后水平调控基因表达,逐渐成... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是继小干涉RNA(siRNA)后新发现的一类调节基因表达的小分子单链非编码RNA,虽然长度只有－22个核苷酸(nt)大小,却能够广泛参与细胞分化、增殖、凋亡、代谢以及肿瘤发生等多种生物学过程,在转录后水平调控基因表达,逐渐成为当今分子生物学领域的研究热点。结合生物信息学分析和直接基因克隆的方法已经鉴定出4039种miRNA,包括462种人miRNA(release8.2,http://***),这些miRNA约占人类基因组的1%,调控着大约人类30%－50%基因的表达,一旦miRNA自身表达的调节出现异常,就可能导致人类疾病的发生。此外,最近的研究还发现一些引起人类或哺乳动物疾病的病毒基因组也编码miRNA。[第一段]

关键词： microRNA 非编码RNA 病毒感染基因调控

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HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测试剂盒的研制与评价

HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测试剂盒的研制与评价

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全军第十次传染病学学术研讨会

作者：胡燕冯长访候俊史素娟朱雷沈宏辉王保君貌盼勇解放军第三0二医院传染病研究所病毒研究室北京 100039 北京科卫临床诊断试剂有限公司北京 100043

艾滋病是人体感染了人类免疫缺陷病毒(HIV)所导致的传染病，随着艾滋病在全球范围内的的迅速蔓延，艾滋病的不可治愈性给人类带来极大的恐慌。虽然多年来国际社会为防治艾滋病作出了积极努力，但艾滋病传播仍未得到有效控制。艾滋病已... 详细信息

艾滋病是人体感染了人类免疫缺陷病毒(HIV)所导致的传染病，随着艾滋病在全球范围内的的迅速蔓延，艾滋病的不可治愈性给人类带来极大的恐慌。虽然多年来国际社会为防治艾滋病作出了积极努力，但艾滋病传播仍未得到有效控制。艾滋病已成为全世界15～59岁成年人死亡和有效生命年损失的主要原因。由于尚无有效的抗HIV药物和预防用HIV疫苗，尽早筛查控制传染源、切断HIV传播途径，是防止HIV传播的重要途径。本研究在建立了联合测定HIV抗原和抗体方法的基础上，研制HIV 1/2抗体和P24抗原联合检测试剂盒，并对该试剂盒的实用性进行了评价，得到了满意的结果。

关键词：艾滋病 HIV-1抗体 P24抗原联合检测试剂盒人类免疫缺陷病毒 HIV疫苗

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人类肠道病毒分子生物学分型鉴定方法的建立及应用

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第2期20卷 69-71页

作者：侯文俊杨健洋胡燕孙颖貌盼勇解放军军医进修学院北京100039 解放军第三二医院传染病研究所病毒研究室

目的建立人类肠道病毒(HEV)分子生物学分型鉴定方法,用于临床分离肠道病毒的分型鉴定。方法根据已知各型别人类肠道病毒基因的核苷酸序列和文献资料,分别合成HEV种属特异性和分型鉴定引物;提取病毒RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)... 详细信息

目的建立人类肠道病毒(HEV)分子生物学分型鉴定方法,用于临床分离肠道病毒的分型鉴定。方法根据已知各型别人类肠道病毒基因的核苷酸序列和文献资料,分别合成HEV种属特异性和分型鉴定引物;提取病毒RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒cDNA,通过琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列分析,鉴定病毒并分型,并与血清中和试验相互验证。结果采用种属特异性引物鉴定18株疑似HEV毒株,其中17株阳性;型特异性引物鉴定结果:18株病毒中4株为科萨奇病毒A24型,3株为科萨奇病毒B3型;科萨奇病毒B2、A9、A15型、埃可病毒3、6、7、9、11、14、33型和鼻病毒9型各1株,分型结果与中和试验相符。结论建立的人类肠道病毒分子生物学分型鉴定方法,具有特异性强、敏感性高、快速简便等优点,可以直接鉴定并分型诊断人类肠道病毒感染,适用于人类肠道病毒感染的实验室诊断和流行病学研究。

关键词：肠道病毒属分子诊断技术逆转录聚合酶链反应

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乙型肝炎患者特异性细胞免疫功能检测的初步研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 33-35页

作者：赫兢辛绍杰沈宏辉杨建洋朱雷胡燕侯俊貌盼勇解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室北京100039

目的通过酶联免疫斑点法检测乙型肝炎(乙肝)患者特异性细胞免疫功能,初步研究各型乙肝患者特异性细胞免疫功能的差异。方法选择急、慢性乙肝、肝炎肝硬化(乙型)、乙肝病毒(HBV)既往感染,接种乙肝疫苗后血清乙肝病毒学标志中仅表面抗体... 详细信息

目的通过酶联免疫斑点法检测乙型肝炎(乙肝)患者特异性细胞免疫功能,初步研究各型乙肝患者特异性细胞免疫功能的差异。方法选择急、慢性乙肝、肝炎肝硬化(乙型)、乙肝病毒(HBV)既往感染,接种乙肝疫苗后血清乙肝病毒学标志中仅表面抗体阳性及未接种过乙肝疫苗、未感染过HBV、血清HBV标志全部阴性者共6组研究对象,每组4例,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测其外周血单个核细胞中γ-干扰素分泌细胞的数量。结果急性乙肝患者、慢性乙肝患者及急性乙肝患者、肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞γ-干扰素分泌细胞数量明显不同(P=0·0209及P=0·0211)。结论通过ELISPOT检测乙肝患者外周血单个核细胞γ-干扰素分泌细胞的数量可以了解乙肝患者特异性细胞免疫功能。急性乙肝患者特异性细胞免疫功能明显强于慢性乙肝患者及肝炎肝硬化患者。

关键词：肝炎,乙型免疫,细胞酶联免疫斑点法

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抑制性消减杂交技术筛选重组IFNβ下调HepG2细胞靶基因

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第3期20卷 273-275页

作者：钟彦伟成军曲建慧张黎颖郭江李晓东徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的利用抑制性消减杂交（SSH）技术构建重组干扰素β（IFNβ）刺激人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库，筛选IFNβ下凋HepG2相关基因。方法重组IFNβ2000U／ml刺激对数生长期HepG2细胞，以生理盐水作用的HepG2细胞为阴性对... 详细信息

目的利用抑制性消减杂交（SSH）技术构建重组干扰素β（IFNβ）刺激人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库，筛选IFNβ下凋HepG2相关基因。方法重组IFNβ2000U／ml刺激对数生长期HepG2细胞，以生理盐水作用的HepG2细胞为阴性对照；制备细胞裂解液，从中提取mRNA并逆转录为cDNA，经Rsa Ⅰ酶切后将实验组cDNA分成两份，分别与两种不同的接头连接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果成功构建重组IFNβ刺激HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后，得到58个阳性克隆，进行菌落PCR分析，均得到200～1000bp插入片段。随机挑选其中35个插入片段测序，并通过生物信息学分析，结果共获得12种编码基因。结论应用SSH技术成功构建了IFNβ刺激HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库，为进一步了解IFNβ在肝细胞内的免疫调节机制提供了依据。

关键词：干扰素β 杂交减量调节

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