检索结果-内蒙古大学图书馆

肾母细胞瘤过度表达基因促进人神经干细胞增殖和向神经元分化的实验观察(英文)

中国临床康复 2005年第5期9卷 202-204,i004页

作者：李成仁李巍陈德英蔡文琴苏炳银解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

背景:肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)编码的NOV蛋白是一种胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF)结合蛋白,它对人神经干细胞的增殖和分化有什么影响作用呢?目的:探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。设计:以细... 详细信息

背景:肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)编码的NOV蛋白是一种胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF)结合蛋白,它对人神经干细胞的增殖和分化有什么影响作用呢?目的:探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。设计:以细胞为研究对象,单因素方差分析实验研究。单位:一所军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室。材料:实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学教研室完成。对象为10～14周人胚大脑皮质培养的HNSCs。干预:NOV基因重组质粒转染COS-7细胞,收集COS-7细胞和NOV基因修饰COS-7细胞的条件培养液(COS-CM和NOV-CM),作用于培养的HNSCs。主要观察指标:3H-TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖,免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。结果:COS-CM和NOV-CM均能明显促进HNSCs对3H-TdR的摄入,其中NOV-CM组的1/min比COS-CM组要高(P<0.05),说明NOV-CM中含有促进HNSCs增殖的成分,另外NOV-CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系;免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示,在NOV-CM组内有较多的NF-200阳性细胞,在对照组和COS-CM组可见到大量GFAP阳性细胞。结论:NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和向神经元分化的作用。

关键词：基因,肾母细胞瘤干细胞胚胎/细胞学神经系统细胞分化,细胞分裂

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神经前体细胞纹状体注入对帕金森病模型大鼠行为的影响(英文)

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中国临床康复 2006年第13期10卷 167-169,i0006页

作者：唐军徐海伟范晓棠吴旋曹娟高恩泉解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

背景:胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞,再进行脑内移植,依旧具备增殖与分化的潜能,与宿主神经组织整合,使其有强的可塑性,这将有助于帕金森病的治疗效果观察。目的:观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞,以及定点移植对改进型帕金森... 详细信息

背景:胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞,再进行脑内移植,依旧具备增殖与分化的潜能,与宿主神经组织整合,使其有强的可塑性,这将有助于帕金森病的治疗效果观察。目的:观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞,以及定点移植对改进型帕金森病大鼠模型行为学的影响。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室和神经生物学教研室。材料:健康成年Wistar大鼠50只,随机分为实验组45只,对照组5只。方法:①实验组大鼠黑质致密部与中脑腹侧背盖区两点各注射6-羟基多巴5μL(2g/L)制备帕金森病大鼠模型,对照组注射生理盐水5μL/点,术后1周开始行为学检测,测定模型成功率,1次/周,连续7周。②选取成功帕金森病模型大鼠20只实施纹状体神经前体细胞移植,剂量为2μL[细胞悬液记数为(5～8)×106个/μL]。另取5只模型大鼠纹状体注射生理盐水2μL为生理盐水对照组。主要观察指标:①帕金森病模型成功率。②神经前体细胞移植对帕金森病模型大鼠旋转次数的影响。③移植的神经前体细胞在体分布,存活与分化情况。结果:①6周后实验组45只大鼠中共有33只(73%)达到成功帕金森病模型标准。②细菌培养皿上用无血清培养基培养形成胚胎体5d后,约85%胚胎干细胞分化为Nestin阳性的神经前体细胞。③神经前体细胞脑内移植后的帕金森病大鼠的旋转次数明显少于生理盐水对照组。多数移植的神经前体细胞存活,部分分化为TH阳性神经元。结论:小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后,分化为TH阳性神经元,帕金森病大鼠旋转次数明显减少。

关键词：帕金森病疾病模型动物干细胞移植

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神经干细胞移植促进脊髓损伤大鼠脊髓功能的恢复

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中国临床康复 2004年第29期8卷 6364-6366,i004页

作者：李成仁李巍蔡文琴陈德英苏炳银解放军第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

目的:观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠L4NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理... 详细信息

目的:观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠L4NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理盐水。术后个2月,采用BBB评分、皮层体感诱发电位CSEP和辣根过氧化物酶()()逆行示踪技术观察大鼠脊髓运动和传导功能的恢复程度。HRP结果:术后个月2BBB评分损伤组、移植组大鼠有所恢复,但都未达到正常水平,其中移植组的大鼠恢复较好,评分较高,与损伤组有显著性差异。脊髓损伤后,损伤组、移植组的CSEP波消失,术后2个月移植组的波形有所恢复,但潜伏期延长。对照组脊髓前角可见到许多HRP标记阳性神经元,损伤组未见阳性神经元,移植组可见有阳性神经元,但数目较对照组少。结论:NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。

关键词：神经干细胞移植大鼠脊髓损伤对照组阳性神经元术后 BBB 结论等量培养

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衰老可导致间充质干细胞氧化损伤修复能力降低

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中国组织工程研究 2013年第10期17卷 1801-1808页

作者：张岳余瑾张艺石家仲黄亚琴杨劲解放军第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆市400038

背景:DNA损伤及损伤后的应答异常会导致基因组不稳定,基因组不稳定是肿瘤形成的重要因素之一。在细胞衰老过程中,衰老细胞基因组稳定性下降,对于端粒、端粒酶的研究以及对于原癌基因和抑癌基因的研究,表明细胞衰老和肿瘤有密切的联系。... 详细信息

背景:DNA损伤及损伤后的应答异常会导致基因组不稳定,基因组不稳定是肿瘤形成的重要因素之一。在细胞衰老过程中,衰老细胞基因组稳定性下降,对于端粒、端粒酶的研究以及对于原癌基因和抑癌基因的研究,表明细胞衰老和肿瘤有密切的联系。目的:以氧化损伤为模型,探索DNA损伤应答异常是衰老细胞基因组不稳定性的直接原因。方法:培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术进行检测鉴定。衰老相关β-半乳糖苷酶检测细胞衰老情况,BrdU掺入实验检测细胞增殖情况。建立体外培养人间充质干细胞衰老模型,通过CCK-8法检测细胞存活情况,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧,单细胞凝胶电泳观察细胞DNA损伤情况。结果与结论:人间充质干细胞经长期培养发生衰老,培养40代以后,衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多,BrdU掺入能力显著下降,提示间充质干细胞长期培养后发生衰老。生存曲线结果显示H2O2作用下,年轻间充质干细胞存活率明显高于衰老间充质干细胞;活性氧及单细胞凝胶电泳结果显示,H2O2处理后衰老间充质干细胞DNA损伤更严重,修复时间更长,说明衰老间充质干细胞比年轻间充质干细胞对H2O2损伤更为敏感。

关键词：干细胞干细胞培养与分化间充质干细胞衰老 DNA损伤修复氧化损伤衰老相关β-半乳糖苷酶活性氧单细胞凝胶电泳国家自然科学基金干细胞图片文章

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纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用(英文)

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中国临床康复 2003年第23期7卷 3170-3171,T001页

作者：徐海伟吴旋黎海蒂范晓棠曹娟唐军解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038

目的:观察采用ITSF和N2无血清培养方法诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法:小鼠胚胎干细胞的培养和N2无血清条件培养基诱导为神经前体细胞,细菌培养皿法或悬滴法制备胚体,小鼠胚胎干细胞采用N... 详细信息

目的:观察采用ITSF和N2无血清培养方法诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法:小鼠胚胎干细胞的培养和N2无血清条件培养基诱导为神经前体细胞,细菌培养皿法或悬滴法制备胚体,小鼠胚胎干细胞采用NBT/BCIP染色,神经前体细胞的nestin免疫组化染色采用ABC法。结果:细菌培养皿法或悬滴法培养胚体、ITSF或N2无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养表面,对胚体的贴壁情况影响不大,但能使无血清培养后存活的神经前体细胞明显增多。结论:小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2培养基均能分化为神经前体细胞,在N2培养基中加入纤维连接蛋白能使存活的神经前体细胞数量增多。

关键词：纤维连接蛋白小鼠胚胎干细胞诱导神经前体细胞作用免疫组化

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宏基因组学:基本策略及在医学研究领域中的可能应用

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生命的化学 2007年第1期27卷 10-11页

作者：丛延广胡福泉解放军第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

宏基因组学(metagenomics)的提出是分子生物学领域的一个重要进展。在自然生境中有大量不可培养微生物的存在,无法通过培养法进行研究,而宏基因组学的策略则突破了这一束缚。宏基因组学是从生境中取得全部微生物的基因组,并进行系统研... 详细信息

宏基因组学(metagenomics)的提出是分子生物学领域的一个重要进展。在自然生境中有大量不可培养微生物的存在,无法通过培养法进行研究,而宏基因组学的策略则突破了这一束缚。宏基因组学是从生境中取得全部微生物的基因组,并进行系统研究的方法。该文介绍宏基因组学的基本情况,并着重探讨其在医学研究领域中的可能应用。

关键词：宏基因组学宏基因组医学研究微生物

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不同分化程度胶质瘤细胞增殖和凋亡相关差异表达基因的鉴定(英文)

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中国临床康复 2006年第24期10卷 170-172,F0003页

作者：郭德玉杨忠曹健王志成解放军第三军医大学西南医院病理学研究所重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学新桥医院药剂科重庆市400038

背景:胶质瘤的发生、发展不仅涉及细胞周期调控基因,也涉及到细胞侵袭、转移和细胞凋亡的调节基因。目的:用基因芯片技术分析不同分化程度的胶质瘤细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤细胞的增殖和凋亡机制奠定基础。... 详细信息

背景:胶质瘤的发生、发展不仅涉及细胞周期调控基因,也涉及到细胞侵袭、转移和细胞凋亡的调节基因。目的:用基因芯片技术分析不同分化程度的胶质瘤细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤细胞的增殖和凋亡机制奠定基础。设计:开放性实验。单位:解放军第三军医大学,西南医院病理学研究所,基础医学部神经生物学教研室,新桥医院药剂科。材料:人脑恶性胶质瘤细胞系CHG-5(WHO分级为Ⅱ级)由本实验室建立并保存培养;SHG-44(WHO分级为Ⅳ级),由苏州医学院附属二院脑肿瘤研究室提供,小牛血清由杭州四季青生物材料研究所生产并提供。实验中还采用了RPMI-1640培养基(Gibco)、Trizol试剂盒(Gibco-BRL)、RNAsecureTM溶液(Ambion,Austin,Texas)、光度适应计(Eppendorf,Hamburg,Germany)。基因芯片含9,984个人类cDNA片段,由香港城市大学准备和提供(UniGEMV2cloneset已知的基因和ESTs购自Incyte公司),SuperscriptⅡ反转录酶由Gibco-BRL公司提供,荧光染料Cy3&Cy5为AmershamPharmacia公司产品。方法:实验于2001/2003在重庆第三军医大学和香港城市大学完成。用Trizol试剂盒抽提总RNA,用SuperscriptⅡ反转录酶进行反转录聚合酶链反应,并用荧光染料Cy3&Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测人胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44瘤细胞基因表达的差异,特别是与细胞增殖和凋亡相关基因表达的差异,并用Northernblot杂交来验证芯片结果。主要观察指标:不同分化程度的人胶质瘤细胞基因表达的差异;Northern杂交结果与相应基因芯片结果的比较。结果:①与CHG-5相比,SHG-44细胞中检测到了有120个基因表达明显上调和22个基因表达明显下调,这些差异表达基因的种类很多,其中凋亡类相关基因共6个,上调基因有3个,下调基因3个;细胞周期与增殖类相关基因共12个,上调基因有5个,下调基因7个。②芯片结果进一步得到Northernblot杂交结果的支持。结论:初步揭示了胶质瘤进展的差异表达基因,特别是与细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因。

关键词：肿瘤细胞,培养的基因表达脱噬作用遗传学技术

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含核受体真核表达载体的构建及其转染真皮多能干细胞(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第40期13卷 7919-7924页

作者：王涛邱安春李露斯刘雁平屈纪富徐文岳解放军第三军医大学西南医院急救部重庆市400038 四川省隆昌县中医院骨二科四川省内江市642100 解放军第三军医大学西南医院神经内科重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆市400038

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基... 详细信息

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基因学实验,于2007-03/12在解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室完成。材料:成年SD大鼠1只,由解放军第三军医大学实验动物研究所提供;真皮多能干细胞由解放军第三军医大学全军复合伤研究所分离培养;质粒载体pEGFPN1及细菌DH5α由徐文岳教授惠赠。方法:首先以大鼠的大脑组织总RNA为模板,RT-PCR扩增出含核受体的编码cDNA序列,T/A克隆至pMDl8-T载体上,然后用BamHI、HindⅢ双酶切释放出经测序鉴定为阳性的重组质粒pMDl8-T-TLX中的含核受体片段,亚克隆到真核载体pEGFPN1中,从而构建真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,最后采用阳性脂质体将pEGFPN1-TLX转染到真皮多能干细胞中。主要观察指标:转染后24h荧光显微镜下观察绿色荧光,RT-PCR检测含核受体mRNA的表达,免疫组化染色观察向神经细胞的分化情况。结果:PCR、酶切和测序结果证明,成功地将含核受体全长cDNA克隆到pEGFPN1质粒中,并成功构建pEGFPN1-TLX重组质粒。与未转染真皮多能干细胞相比,10d后可见pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞继续生长,并于15d时形成抗性克隆,荧光显微镜下有绿色荧光蛋白表达;而未转染的真皮多能干细胞10d时已全部死亡。RT-PCR结果显示,pEGFPN1-TLX转染真皮多能干细胞表达TLXmRNA。诱导后3d与单纯真皮多能干细胞比较,pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞诱导成NF200阳性细胞数明显增加,诱导成GFAP阳性细胞数明显减少。结论:实验成功构建含核受体真核表达载体,并成功转染了真皮多能干细胞。转染后能明显提高真皮多能干细胞向神经元分化的效率,而向胶质细胞分化受到抑制。

关键词：核受体含核受体克隆真皮多能干细胞

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大鼠毛囊干细胞的体外分离培养及增强型绿色荧光蛋白示踪

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第8期12卷 1481-1484页

作者：杨珂姜自林杨恬解放军第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆市400038 重庆大学生物工程学院重庆市400044

目的：毛囊干细胞具有分化为表皮、皮脂腺和毛囊的能力，在烧伤、创伤及大面积皮肤缺损的细胞治疗和基因治疗等方面均有很好的应用前景，但其特异性标志物和体外培养条件等方面存在争议。实验拟进一步探讨毛囊干细胞体外分离培养的方法... 详细信息

目的：毛囊干细胞具有分化为表皮、皮脂腺和毛囊的能力，在烧伤、创伤及大面积皮肤缺损的细胞治疗和基因治疗等方面均有很好的应用前景，但其特异性标志物和体外培养条件等方面存在争议。实验拟进一步探讨毛囊干细胞体外分离培养的方法，以及增强型绿色荧光蛋白作为其示踪标志物的可行性。方法：实验于200705／09在解放军第三军医大学细胞生物教研室完成。①材料：新生7d龄SPF级SD大鼠5只，由解放军第三军医大学实验动物中心提供，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。pEGFP-N1质粒由本实验室保存。②实验方法：大鼠在体视显微镜下分离出含真皮鞘的完整毛囊，dispase消化，将毛囊从真皮鞘中挤出，收集形态完好且处于生长期的毛囊，分别在毛球部上端、皮脂腺下端横切毛囊，取中间部分置于胰酶和EDTA中联合消化，向所得细胞悬液中添加含10％胎牛血清DMEM／F12完全FAD培养基，常规培养7d后，采用Ⅳ型胶原快速贴壁法两次筛选以分离纯化大鼠毛囊干细胞。待筛选后的细胞生长至70％～80％融合后，进行pEGFP-N1质粒细胞转染。③实验评估：通过超微结构观察与流式细胞仪检测CD34、α6-integrin的表达，对分离纯化的大鼠毛囊干细胞进行鉴定。转染24—72h后，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，以毛囊干细胞克隆形成率判定标记细胞的增殖能力。结果：①细胞形态及超微结构：筛选后的毛囊干细胞形态均一，呈铺路石状，透射电镜显示细胞胞体小，核浆比例大，核仁明显，细胞器发育不成熟，处于原始状态。②细胞表型：高表达CD34和α6-integrin，细胞阳性率≥90％。③pEGFP-N1质粒转染及示踪：转染16h左右细胞出现微弱绿色荧光，经G418筛选后稳定表达绿色荧光蛋白。④细胞克隆形成率：与转染前比较，转染后细胞克隆形成率明显降低（r=4．541，P〈0．01）。结论：①利用二步酶消化法联合Ⅳ型胶原快速贴壁法可以获得较高纯度的毛囊干细胞。②增强型绿色荧光蛋白能稳定标记毛囊干细胞，是较理想的示踪方法，但细胞增殖能力受一定影响。

关键词：毛囊干细胞增强型绿色荧光蛋白细胞示踪细胞增殖

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创伤死亡不同血糖水平患者存活时间、感染率和MODS发生率病历调查

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第三军医大学学报 2006年第1期28卷 75-77页

作者：王占科柴长春何凤田邓宏许霖水刘敏荣解放军第94医院检验科南昌330002 解放军第94医院医务处南昌330002 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 解放军第94医院病案室南昌330002

目的研究创伤死亡不同血糖水平患者院前创伤评分(revised traum a score,RTC;glasgow com a scale,GCS)、3 d后死亡构成比、感染率和多器官功能不全综合征(mu ltipe organ dysfunction syndrom e,MODS)发生率的变化。方法随机抽查本院1... 详细信息

目的研究创伤死亡不同血糖水平患者院前创伤评分(revised traum a score,RTC;glasgow com a scale,GCS)、3 d后死亡构成比、感染率和多器官功能不全综合征(mu ltipe organ dysfunction syndrom e,MODS)发生率的变化。方法随机抽查本院1999年1月至2005年1月455份住院创伤死亡病历,根据空腹血糖水平及正常参考范围分为创伤死亡正常血糖组57例和创伤死亡高血糖组298例。统计创伤死亡不同血糖水平组RTC、GCS、3 d后死亡构成比、感染率和MODS发生率及的变化,并计算创伤死亡患者血糖与MODS相关定量指标的相关系数。结果①创伤死亡高血糖组RTC为6.31±1.04,GCS为4.23±0.52;创伤死亡正常血糖组RTC为4.43±0.22,GCS为2.21±0.34。创伤死亡高血糖组院前创伤评分明显高于创伤死亡组正常血糖(P<0.01)。②创伤死亡高血糖组3 d后死亡构成比为67.34%,创伤死亡正常血糖组3 d后死亡构成比为17.54%。创伤死亡高血糖组3 d后死亡构成比明显高于创伤死亡正常血糖组(P<0.01)。③创伤死亡高血糖组感染率为83.92%,MODS发生率为71.86%;创伤死亡正常血糖组感染率为21.05%,MODS发生率为10.53%。创伤死亡高血糖组感染率和MODS发生率均明显高于创伤死亡正常血糖组(P<0.01)。④455例创伤死亡患者血糖水平与血ALT、AST、BUN、CRE、PCO2、CK明显正相关(P值均<0.01)。结论创伤死亡高血糖患者院内存活时间长,感染率和MODS发生率高。创伤死亡正常血糖患者伤情重,存活时间短,感染率和MODS发生率低。创伤高血糖患者死亡因素以感染和MODS为主,创伤正常血糖患者死亡因素以非MODS因素(大出血和颅脑直接损伤等)为主。创伤血糖水平升高可作为创伤MODS预警指标,但血糖正常预后也不一定好。

关键词：创伤死亡病历血糖创伤评分感染 MODS

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