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中国病原生物学杂志 2017年第4期12卷 289-293页

作者：白雪娟阳幼荣梁艳张晓燕张俊仙吴雪琼解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的克隆、表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv1813c,分析其免疫活性。方法应用生物信息学方法分析Rv1813c蛋白序列,根据H37Rv基因组序列合成引物,PCR扩增Rv1813c基因,克隆至pGEM-T载体;挑取阳性克隆测序,将正确编码基因克隆到pE... 详细信息

目的克隆、表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv1813c,分析其免疫活性。方法应用生物信息学方法分析Rv1813c蛋白序列,根据H37Rv基因组序列合成引物,PCR扩增Rv1813c基因,克隆至pGEM-T载体;挑取阳性克隆测序,将正确编码基因克隆到pET30a载体上,在大肠埃希菌BL21菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。以金属螯合层析分离纯化重组蛋白,采用ELISA法分析其免疫反应性。结果 Rv1813c蛋白第34位氨基酸残基之前含有跨膜区及信号肽部分,可能是一个胞外蛋白。对重组质粒pET30a-Rv1813c测序,与设计的序列相同。重组蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式表达,IPTG诱导3h-4h重组蛋白在大肠埃希菌中的表达量较高,表达量约占细菌总蛋白的40%以上。纯化的重组Rv1813c蛋白纯度>95%。ELISA分析重组Rv1813c蛋白与结核患者血清有较强的反应性,A450值为0.50±0.34,显著高于健康组A450值0.23±0.18及非结核呼吸疾病组A450值0.30±0.27(P<0.05)。结论成功构建的结核分枝杆菌重组质粒能高效表达Rv1813c蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为结核病的免疫机制研究奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1813c 克隆表达血清学反应

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结核潜伏感染蛋白Rv2657cT细胞和B细胞表位的预测与分析

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实用医学杂志 2017年第1期33卷 55-58页

作者：杨丹白雪娟阳幼荣林明贵吴雪琼河北北方学院河北省张家口市075000 解放军第三O九医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室北京市100091

目的:预测结核分枝杆菌Rv2657c蛋白的抗原表位,了解其免疫原性。方法:应用DNAStar软件预测Rv2657c蛋白的T细胞和B细胞表位;Blast方法分析该蛋白氨基酸序列与人类蛋白序列的相似性;SYFPEITHI超基序法、BIMAS量化基序法及Net CTL法预测蛋... 详细信息

目的:预测结核分枝杆菌Rv2657c蛋白的抗原表位,了解其免疫原性。方法:应用DNAStar软件预测Rv2657c蛋白的T细胞和B细胞表位;Blast方法分析该蛋白氨基酸序列与人类蛋白序列的相似性;SYFPEITHI超基序法、BIMAS量化基序法及Net CTL法预测蛋白的CTL表位;RANKPEP及SYFPEITHI超基序法远程预测Th细胞表位。结果:DNAStar软件预测Rv2657c蛋白有5个B细胞抗原表位,6个T细胞抗原表位。SYFPEITHI超基序法、BIMAS量化基序法及Net CTL法预测该蛋白有6个CTL表位;RANKPEP及SYFPEITHI超基序法预测该蛋白有38个Th表位。结论:Rv2657c蛋白既有B细胞表位也有T细胞表位,可能成为结核病诊断抗原分子和候选疫苗抗原。

关键词：结核病 Rv2657c 表位预测

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四种结核分枝杆菌增殖期抗原基因抗小鼠结核感染的比较研究

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中国防痨杂志 2017年第2期39卷 129-133页

作者：梁艳张晓燕王小美宋晶莹白雪娟阳幼荣张俊仙王兰许飞虹史迎昌吴雪琼解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的研究、比较4种结核分枝杆菌增殖期抗原基因抗小鼠结核感染的作用，为开发新型结核病免疫治疗制剂提供实验依据。方法将70只BALB／c小鼠采用数字表法随机分为7组，每组10只。以6．4×10^5菌落形成单位（CFU）结核分枝杆菌标准株H... 详细信息

目的研究、比较4种结核分枝杆菌增殖期抗原基因抗小鼠结核感染的作用，为开发新型结核病免疫治疗制剂提供实验依据。方法将70只BALB／c小鼠采用数字表法随机分为7组，每组10只。以6．4×10^5菌落形成单位（CFU）结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射感染小鼠后第3天，分别用生理盐水、pVAX1载体、微卡菌苗、ag85a DNA、rv1291cDNA、rv1419 DNA和rv2223cDNA进行肌内注射，每2周1次，共3次，免疫结束后2周杀鼠，分别取肺和脾观察其病理改变、称取肺和脾的质量、做菌落计数。结果肺组织病理显示：生理盐水组肺组织病变严重、广泛；载体组病变也较严重、广泛，但比生理盐水组略轻；微卡菌苗组、ag85aDNA组、rv1291cDNA组、rv1419DNA组和rv2223cDNA组肺组织病变有不同程度减轻，病变局限，部分区域肺泡结构完整、清晰，细胞分布均匀。与生理盐水组相比，agaSaDNA组、rv1291cDNA组、rv1419DNA组肺菌落计数分别减少0．53lgCFU、0．67lgCFU、0．41lgCFU（χ2=27．07，P〈0．01）；脾菌落计数分别减少0．43lgCFU（t〉3．004，P〈0．05）、0．34lgCFU（t〈3．004，P〉0．05）、0．41lgCFU（t〉3．004，P〈0．05）；微卡菌苗组和rv2223cDNA组肺、脾菌落计数与生理盐水组比较均有所减少，但差异无统计学意义（t值均〈3．004，P值均〉0．05）。结论结核分枝杆菌增殖期抗原基因rv1291c和rv1419DNA与ag85aDNA具有相似的抗结核治疗效果，而rv2223cDNA无明显治疗作用。

关键词：分枝杆菌 ,结核细菌素质粒基因组成分免疫疗法疗效比较研究动物, 实验

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提高结核实验室检验水平促进与临床诊断协调发展

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中国防痨杂志 2017年第12期39卷 1261-1263页

作者：吴雪琼解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

“实验室检验”是医学诊断的一门重要学科，也是医学研究的重要组成部分。其通过实验室各种检测技术、实验仪器设备，正确地收集和检测各种临床标本，提供准确、及时的分析报告，为临床疾病的诊断、治疗、预后、随访等提供重要的实验依... 详细信息

“实验室检验”是医学诊断的一门重要学科，也是医学研究的重要组成部分。其通过实验室各种检测技术、实验仪器设备，正确地收集和检测各种临床标本，提供准确、及时的分析报告，为临床疾病的诊断、治疗、预后、随访等提供重要的实验依据，是现代实验室科学技术与基础医学、临床医学相结合而产生的一门多学科交叉、渗透的新兴学科。

关键词：实验室检验临床诊断协调发展结核实验仪器设备检测技术多学科交叉医学诊断

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重视并进一步探索结核病的免疫治疗

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中国防痨杂志 2017年第2期39卷 111-113页

作者：吴雪琼解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

结核病（TB）是全球感染性疾病的头号“杀手”。根据WHO2016年报告，2015年全球有1040万例TB患者、48万例耐多药结核病（MDR—TB）患者和10万例单耐利福平的TB患者，合计180万例患者死于TB。我国是全球22个TB高负担国家之一，也是27个T... 详细信息

结核病（TB）是全球感染性疾病的头号“杀手”。根据WHO2016年报告，2015年全球有1040万例TB患者、48万例耐多药结核病（MDR—TB）患者和10万例单耐利福平的TB患者，合计180万例患者死于TB。我国是全球22个TB高负担国家之一，也是27个TB耐药严重的国家之一，TB疫情控制并不十分理想。

关键词：耐多药结核病免疫治疗 TB患者感染性疾病疫情控制利福平

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活动性结核患者单核来源巨噬细胞中C-X-C型趋化因子受体4的表达研究

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国际呼吸杂志 2017年第3期37卷 178-182页

作者：刘艳华王若程小星解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的研究活动性结核患者单核来源巨噬细胞（ monocyte-derived macrophage ,MDM ） C-X-C 型趋化因子受体 4 （ C-X-Cchemokinereceptor4 , CXCR4 ）的表达水平。方法收集活动性肺结核患者和健康者抗凝血,分离纯化... 详细信息

目的研究活动性结核患者单核来源巨噬细胞（ monocyte-derived macrophage ,MDM ） C-X-C 型趋化因子受体 4 （ C-X-Cchemokinereceptor4 , CXCR4 ）的表达水平。方法收集活动性肺结核患者和健康者抗凝血,分离纯化单核细胞并体外培养使其分化为初始型（ M0 ）巨噬细胞,然后分别用细菌脂多糖（lipopolysaccharides , LPS ）/干扰素 -γ （ interferonγ , IFN-γ ）和 IL-4 刺激,使其向促炎症型（ M1 ）型巨噬细胞和抗炎症型（ M2 ）巨噬细胞极化,收集细胞并提取总 RNA ,荧光定量聚合酶链反应（ PCR ）检测 CXCR4mRNA 的表达。 T 检验分析两组数据的差异。结果活动性结核患者和健康者 M1 型 MDM 中 CXCR4 的表达量分别为 0.026±0.009 和 0.034±0.014 ,与健康者相比,活动性结核患者 M1 型 MDM 中 CXCR4 的表达显著降低（ t =2.064 , P ＜0.05 ）。活动性结核患者和健康者 M2 型 MDM 中 CXCR4 的相对表达量分别为 0.048±0.013 和 0.064±0.019 ,与健康者相比,活动性结核患者 M2 型 MDM 中 CXCR4 的表达显著降低（ t =2.823 , P ＜0.01 ）。结论活动性结核患者极化的 MDM 细胞中 CXCR4 的表达降低,提示巨噬细胞 CXCR4 参与结核病的免疫反应。

关键词：肺结核活动性 C-X-C型趋化因子受体4 单核来源巨噬细胞极化

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Rv1813c在结核分枝杆菌潜伏感染诊断中的价值

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标记免疫分析与临床 2017年第4期24卷 361-365页

作者：白雪娟梁艳阳幼荣吴雪琼解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的研究重组结核分枝杆菌潜伏感染蛋白Rv1813c在诊断结核分枝杆菌潜伏感染方面的价值。方法 20例结核潜伏感染者和79例健康志愿者均行胸部X线检查、PPD皮肤试验、结核抗体检测,同时应用ELISA联合重组融合蛋白CFP10-ESAT6和潜伏感染蛋白... 详细信息

目的研究重组结核分枝杆菌潜伏感染蛋白Rv1813c在诊断结核分枝杆菌潜伏感染方面的价值。方法 20例结核潜伏感染者和79例健康志愿者均行胸部X线检查、PPD皮肤试验、结核抗体检测,同时应用ELISA联合重组融合蛋白CFP10-ESAT6和潜伏感染蛋白Rv1813c进行IGRA检测。结果所有受试者中,PPD皮肤试验和抗体检测的阳性率分别为50%和28%。Rv1813c刺激潜伏感染者后产生IFN-γ的水平显著高于健康对照(P<0.05),其刺激PPD强阳性组(皮试直径≥15mm)产生的IFN-γ值低于弱阳性组(5mm≤皮试直径<15mm),但无统计学意义,而CFP10-ESAT6刺激PPD强阳性组后产生的IFN-γ值高于弱阳性组(P<0.05)。CFP10-ESAT6和Rv1813c刺激抗体阴性及阳性组后产生的IFN-γ水平没有显著性差异(P>0.05)。Rv1813c诊断结核感染的ROC曲线下面积为0.834,特异性80%时,灵敏度为85%;特异性为90%时,灵敏度为45%。结论同时检测Rv1813c及CFP10-ESAT6抗原特异的IFN-γ值有可能筛选出潜伏感染者中的活动感染人群,对于结核分枝杆菌潜伏感染诊断有重要的应用价值。

关键词：结核潜伏感染 CFP10-ESAT6融合蛋白 Rv1813c蛋白 γ干扰素释放试验诊断

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结核病的细胞免疫治疗进展

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中国防痨杂志 2017年第5期39卷 439-441页

作者：凌彦博吴雪琼解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

结核病是一直受到广泛关注的世界性健康问题，耐药结核病的不断增长是有效控制结核病的主要威胁，结核病的防控形势非常严峻。因此，以细胞治疗为代表的生物治疗得到广泛应用，细胞免疫治疗将有机会成为复治、难治结核病个体化综合治疗... 详细信息

结核病是一直受到广泛关注的世界性健康问题，耐药结核病的不断增长是有效控制结核病的主要威胁，结核病的防控形势非常严峻。因此，以细胞治疗为代表的生物治疗得到广泛应用，细胞免疫治疗将有机会成为复治、难治结核病个体化综合治疗的重要组成部分及研究热点。作者就结核病的细胞免疫治疗研究进展结合参考文献进行重点阐述。

关键词：结核病免疫疗法组织疗法综合疗法评论

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合理应用药物敏感性试验提高耐多药结核病诊断率

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中国防痨杂志 2017年第3期39卷 222-225页

作者：吴雪琼张俊仙解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

耐多药结核病（MDR-TB）是目前临床结核病治疗的难题之一,快速检出耐多药的结核分枝杆菌（MTB）,指导临床选择有效抗结核药物,制定合理的化疗方案,是控制MDR-TB的关键.目前抗结核药物的药物敏感性试验（简称“药敏试验”）方法主要有下... 详细信息

耐多药结核病（MDR-TB）是目前临床结核病治疗的难题之一,快速检出耐多药的结核分枝杆菌（MTB）,指导临床选择有效抗结核药物,制定合理的化疗方案,是控制MDR-TB的关键.目前抗结核药物的药物敏感性试验（简称“药敏试验”）方法主要有下列三类：一是建立在细菌生长基础上的药敏试验方法;二是建立在基因多态性分析基础上的分子药敏试验方法;三是建立在耐药MTB特异组分基础上的色谱、质谱方法.作者概要地介绍了MTB的药敏试验方法,以及联合应用现有药敏检测技术以提高临床对MDR-TB的诊断率.

关键词：分枝杆菌,结核药物耐受性微生物敏感性试验

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结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位预测

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生物医学工程学杂志 2016年第2期33卷 325-331页

作者：王东方白雪娟刘银萍梁艳吴雪琼林明贵河北北方学院张家口075000 解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

本文应用生物信息学技术预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位,为结核病的诊断和疫苗研发筛选合适的抗原靶位。通过Blast分析发现Rv2004c蛋白与人类蛋白的同源性较低;采用DNAStar软件包中的Protean软件分析其二级结构、... 详细信息

本文应用生物信息学技术预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位,为结核病的诊断和疫苗研发筛选合适的抗原靶位。通过Blast分析发现Rv2004c蛋白与人类蛋白的同源性较低;采用DNAStar软件包中的Protean软件分析其二级结构、亲水性、抗原性、柔韧性及表面可能性,预测该蛋白有10个候选B细胞抗原表位;应用RANKPEP及SYFPEITHI法预测该蛋白有37个候选Th细胞抗原表位,主要位于第200位氨基酸之后,其中HLA-DRB1*0401及HLA-DRB1*0701表型相对的表位数目较多且某些候选表位的主要组织相容性复合体(MHC)限制类型存在交叉重叠;应用SYFPEITHI法、BIMAS法及NetCTL法预测该蛋白有10个候选细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,其中以HLA-A2限制性表位数目较多、分值较高。由此得出结论:Rv2004c蛋白含有较多潜在的T细胞和B细胞抗原表位,可作为新的结核病诊断试剂和疫苗研发的候选靶蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 Rv2004c 表位预测生物信息学

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