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第十届全国免疫学学术大会

作者：吴雪琼白雪娟梁艳阳幼荣张俊仙王兰解放军第三O九医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室

结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)是结核研究的热点和难点之一,但目前对于"潜伏感染"的定义、发生机制、临床诊断、临床转归等问题尚未完全阐明,存在一些争议。本课题组在下列方面对结核分枝杆菌潜伏感染开展研究:(1)应用PPD和ELIS... 详细信息

结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)是结核研究的热点和难点之一,但目前对于"潜伏感染"的定义、发生机制、临床诊断、临床转归等问题尚未完全阐明,存在一些争议。本课题组在下列方面对结核分枝杆菌潜伏感染开展研究:(1)应用PPD和ELISPOT技术在907例入伍新兵中开展LTBI的流行病学研究;(2)结核分枝杆菌潜伏机制的研究;(3)LTBI检测新方法的研究;(4)LTBI发病率的研究;(5)结核分枝杆菌潜伏感染抗原DNA疫苗免疫原性的研究。本文也试图阐述目前存在的问题及其展望。

关键词：结核分枝杆菌潜伏感染诊断

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结核分枝杆菌Rv3287c的克隆、表达、纯化

结核分枝杆菌Rv3287c的克隆、表达、纯化

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全国结核病诊疗与防控暨第二届抗结核药物不良反应防治新进展研讨会

作者：李江英白雪娟梁艳阳幼荣张俊仙吴雪琼 100091 北京解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室

目的制备Rv3287c重组蛋白,以期发现一种新型的针对潜伏感染的诊断标记物或候选疫苗.方法基因合成结核分枝杆菌Rv3287c,复苏穿刺菌,提取质粒puc57-rv3287c,双酶切凝胶回收rv3287c基因片段,连接到pET30a载体上,构建pET30a-rv3287c重组质...

目的制备Rv3287c重组蛋白,以期发现一种新型的针对潜伏感染的诊断标记物或候选疫苗.方法基因合成结核分枝杆菌Rv3287c,复苏穿刺菌,提取质粒puc57-rv3287c,双酶切凝胶回收rv3287c基因片段,连接到pET30a载体上,构建pET30a-rv3287c重组质粒,然后转化*** BL21 (DE3),筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定,经IPTG诱导表达后,应用Ni+-NTA亲和柱纯化重组蛋白.结果成功构建pET30a-rv3287c重组质粒,得到重组蛋白Rv3287c,其在*** BL21 (DE3)中主要以包涵体形式表达,分子量(15kDa)与预期相符.结论成功制备结核分枝杆菌Rv3287c重组蛋白为结核潜伏感染的预防和控制奠定实验基础.

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结核分枝杆菌Rv0574c的克隆、表达、纯化

结核分枝杆菌Rv0574c的克隆、表达、纯化

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全国结核病诊疗与防控暨第二届抗结核药物不良反应防治新进展研讨会

作者：白雪娟李江英梁艳阳幼荣张俊仙吴雪琼 100091 北京解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室

目的构建结核分枝杆菌Rv0574c蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原.方法将编码结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的基因克隆到pET-30a载体,构建pET30a-rv0574c重组质粒,然后转化*** BL21 (DE3),筛选阳...

目的构建结核分枝杆菌Rv0574c蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原.方法将编码结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的基因克隆到pET-30a载体,构建pET30a-rv0574c重组质粒,然后转化*** BL21 (DE3),筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定,经IPTG诱导表达后,应用Ni+-NTA亲和柱纯化重组蛋白.结果成功构建pET30a-rv0574c重组质粒,得到重组蛋白Rv0574c,其在*** BL21 (DE3)中主要以包涵体形式表达,分子量(41kDa)与预期相符.结论高纯度结核分枝杆菌Rv0574c重组蛋白的获得为研究结核潜伏感染在结核病血清诊断中的价值.

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γ干扰素释放试验临床应用的价值、问题与展望

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中国防痨杂志 2015年第7期37卷 722-727页

作者：吴雪琼梁艳王国治解放军第三O九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091 中国食品药品检定研究院菌苗一室

我国的结核病疫情和结核分枝杆菌（Mtb）感染情况都相当严重。潜伏结核感染（latenttubercu-losisinfection，LTBI）是宿主感染Mtb后、没有结核病临床表现和影像学改变的一种带菌状态。

关键词：临床应用释放试验 γ干扰素结核病疫情价值结核分枝杆菌潜伏结核感染影像学改变

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结核分枝杆菌Rv1419蛋白抗原表位的预测

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中国防痨杂志 2015年第1期37卷 52-55页

作者：刘银萍王全立张俊仙梁艳阳幼荣白雪娟吴雪琼军事医学科学院附属医院输血科北京100071 解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室

目的预测结核分枝杆菌Rv1419蛋白的抗原表位。方法利用DNAStar软件包中Protean软件对Rvl419氨基酸序列进行分析，采用包括二级结构、亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、电荷分布等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果Rvl41... 详细信息

目的预测结核分枝杆菌Rv1419蛋白的抗原表位。方法利用DNAStar软件包中Protean软件对Rvl419氨基酸序列进行分析，采用包括二级结构、亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、电荷分布等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果Rvl419蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段，含有少数潜在的B细胞抗原肽表位（可能在67-70、72-82、142-154、131-137位氨基酸残基或其附近），这些表位抗原性较好，都含有B转角和无规则卷曲结构，呈现在表面的可能性和柔韧性都较大。该蛋白含有较多潜在的T细胞抗原肽表位（可能在5-15、18-22、29-32、43-55、58-62、64--68、86-97、99-109、110-114、117-123、126-128、136-140位氨基酸残基或其附近）。结论结核分枝杆菌Rv1419蛋白是一个T细胞抗原表位占优势的蛋白抗原，也存在B细胞抗原表位，本研究结果为该蛋白抗原表位的进一步研究、应用奠定了基础。

关键词：表位细菌蛋白质类蛋白质结构二级结核分枝杆菌

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结核分枝杆菌Rv3407免疫原特性及研究进展

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中国医师杂志 2015年第1期17卷 151-152页

作者：赵亚静吴雪琼赵卫国河北北方学院河北省张家口075000 解放军第三○九医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室

据WHO估计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌（MTB），其中5％～10％会发展成结核病（TB）患者，大部分人会以潜伏感染状态持续终生。结核潜伏性感染（LTBI）是宿主感染结核分枝杆菌后皮肤结核菌素实验阳性，而无活动性结核的临床表现... 详细信息

据WHO估计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌（MTB），其中5％～10％会发展成结核病（TB）患者，大部分人会以潜伏感染状态持续终生。结核潜伏性感染（LTBI）是宿主感染结核分枝杆菌后皮肤结核菌素实验阳性，而无活动性结核的临床表现，无影像学改变或细菌学证据的一种尚未发病的特殊状态。潜伏感染阶段，MTB无代谢，无DNA复制和毒力。虽然休眠的MTB的毒力和对宿主细胞的破坏能力降低，但是同时也容易逃避免疫防御，通常难以被清除。

关键词：分枝杆菌结核/免疫学疫苗综述

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中药复方牛贝消核提取物治疗结核病相关靶标的研究

中药复方牛贝消核提取物治疗结核病相关靶标的研究

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全国结核病诊疗与防控暨第二届抗结核药物不良反应防治新进展研讨会

作者：凌彦博杨春玮罗华锋刘光陵吴雪琼梁艳王小美王兰张俊仙阳幼荣白雪娟陈实兵刘军 100091 北京解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室广东奇方药业有限公司

目的研究中药复方牛贝消核提取物治疗结核病的相关靶标,阐明其作用机制.方法 9只BALB/c小鼠随机分成三组：空白对照组,感染组,中药牛贝消核治疗组,每组3只.提取小鼠全血总RNA,反转录后与小鼠基因表达芯片杂交,检测小鼠基因表达量.应用...

目的研究中药复方牛贝消核提取物治疗结核病的相关靶标,阐明其作用机制.方法 9只BALB/c小鼠随机分成三组：空白对照组,感染组,中药牛贝消核治疗组,每组3只.提取小鼠全血总RNA,反转录后与小鼠基因表达芯片杂交,检测小鼠基因表达量.应用IPA数据库分析并比较不同组小鼠的基因表达结果. 结果感染组和正常组共有差异表达基因5647条,其中2898条上调,2749条下调,1278个上调基因参与了细胞过程的调节,1092个参与了代谢过程的调节;感染组和牛贝消核治疗组共有差异表达基因7051条,其中3454条上调,3597条下调,1258个上调基因参与了细胞过程,940个参与了代谢过程.从通路水平的分析结果可以看到,治疗后,JNK通路有明显的整体下调.而正常小鼠感染结核分枝杆菌后,JNK通路明显的整体明显上调.结论在小鼠结核感染后表达明显上调和下调的部分基因中,我们推测,牛贝消核药物可能具有部分针对免疫调节通路上的调节作用,也使加强细胞运动的基因(细胞骨架重排、内吞作用)表达上调,加强抗结核免疫,是否有药物副作用需进一步研究证实.该信息提示我们,***感染后,相关因子刺激可能引起JNK通路的上调,牛贝消核中药提取物可能具有在感染后调节该通路下调的功能.

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胸腔积液结核感染T细胞斑点实验检测对结核性胸膜炎的辅助诊断价值

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中国煤炭工业医学杂志 2015年第7期18卷 1094-1097页

作者：曹秀丽王兰河北北方学院附属第三医院河北省张家口市075000 解放军第三〇九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室

目的探讨结核感染T细胞斑点实验(***)在结核性胸膜炎临床辅助诊断的应用效果,评价***在诊断结核性胸膜炎中的价值。方法对该医院诊断、治疗的42例结核性胸膜炎患者相关资料进行分析,将其设置为结核性胸膜炎组,选择同期入院诊治的30例非... 详细信息

目的探讨结核感染T细胞斑点实验(***)在结核性胸膜炎临床辅助诊断的应用效果,评价***在诊断结核性胸膜炎中的价值。方法对该医院诊断、治疗的42例结核性胸膜炎患者相关资料进行分析,将其设置为结核性胸膜炎组,选择同期入院诊治的30例非结核性胸膜炎患者为非结核性胸膜炎组,对二组入院患者抽取胸腔积液,并采用***方法检测,分析***在结核性胸膜炎临床辅助诊断价值,判断其诊断结核性胸膜炎的敏感性和特异性。结果结核性患者中90.5%***检测阳性,高于非结核性患者(23.8%)(P<0.05);结核性患者13.3%***阴性,低于非结核性患者(P<0.05);确诊结核组病例42例中39例检测结果为阳性,检测敏感度92.8%(39/42),阳性预测值为92.8%,均高于对照组[检测结果阳性3例,阴性27例,特异度90%(27/30),阴性预测值为90%](P<0.05)。结论胸腔积液***检测法有较高的敏感度和特异度,对结核性胸膜炎有较大的辅助诊断价值,且这种诊断方法相对比较简单,值得推广使用。

关键词：结核性胸膜炎胸腔积液结核感染T细胞斑点试验辅助诊断

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重组人γ-干扰素在耐多药结核病小鼠治疗作用中的研究

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中国防痨杂志 2015年第3期37卷 295-299页

作者：侯江厚李琦张灵霞王仲元孙卫国赵伟杰操敏解放军第三○九医院结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091 首都医科大学附属北京胸科医院肺功能室结核三病区药物研究室

目的探讨重组人γ干扰素（rh-IFN-γ）在MDRTB小鼠中的治疗作用及其免疫学机制。方法72只成年雄性Balb／c小鼠，用含耐多药Mtb的气溶胶感染，感染后第2天处死4只以确定小鼠肺脏植入的菌量，感染后21d（设定治疗0周）脱颈处死4只小鼠作... 详细信息

目的探讨重组人γ干扰素（rh-IFN-γ）在MDRTB小鼠中的治疗作用及其免疫学机制。方法72只成年雄性Balb／c小鼠，用含耐多药Mtb的气溶胶感染，感染后第2天处死4只以确定小鼠肺脏植入的菌量，感染后21d（设定治疗0周）脱颈处死4只小鼠作空白对照；余下64只小鼠采用随机数字表法分为对照组、rh-IFN-γ组、莫西沙星组和联合治疗组（莫西沙星＋rh-IFN-γ每组16只，于治疗0周开始给药。治疗4、8、16、20周各组分别脱颈处死4只，以测定小鼠的肺、脾质量指数和肺、脾菌落形成单位（CFU）、8周血清细胞因子IFN-γ和白细胞介素（IL）-10的水平。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用SNK法和Games-Howell法。结果肺脾质量指数：莫西沙星组8周肺指数为“5．99±0．72”、低于对照组的“8．01±0．91”（F=6．28，P〈0．01）；莫西沙星组8周脾指数为“2．87±0．15”，低于对照组的“3．87±0．41”（F=8．37，P〈0．01）。肺、脾CFU：莫西沙星组、联合治疗组4周肺组织CFU分别为（4．37±0．20）lgcFu／ml和（4．35±0．18）lgCFU／ml，均低于对照组[（5．30±0．21）lgCFU／ml]和rh-IFN-7组[（5．29±0．13）lgCFU／m1]（F=35．55，P〈0．01），莫西沙星组、联合治疗组8周肺组织CFU分别为（2．86±0．29）lgCFU／ml和（2．63±0．08）lgCFu／ml，均低于对照组[（5．00±0．23）lgCFU／m1]和rh_IFN-γ组[（4．82±0．55）lgCFU／ml]（F=56．83，P〈0．01），且均于16周始无菌化（即无Mtb生长）；rh-IFN-γ组20周脾组织CFU为（3．21±0．40）lgCFU，低于对照组的（4．31±0．06）lgCFU／ml（t=5．45，P〈0．01）；莫西沙星组和联合治疗组的脾组织从4周始无菌化。治疗8周小鼠血清r干扰素和IL-10的水平：rh-IFN-γ组、莫西沙星组和联合治疗组血清IFN-γ水平分别为（3．40±0．64）ng／L、（1．32±0．53）ng／L和（0．47±0．44）ng／L，低于对照组的（10．34±2．09）ng／L（F=55．973，P〈0．01），莫西沙星组和联合治疗组血清IFN_7水平分别为（1．32±0．53）ng／L和（0．47±0．44）ng／L，低于rh-IFN-γ组的（3．40±0．64）ng／L（F=55．973，P〈0．01）。对照组、rh-IFN-γ组、莫西沙星组和联合治疗组血清IL-10水平分别为（6．68±1．30）ng／L、（9．76±3．97）ng／L、（8．74±4．48）ng／L和（21．34±17．58）ng／L，差异无统计学意义（F=2．013，P〉0．05）。结论rh-IFN-γ可降低MDR-TB小鼠脾组织的菌量负荷，下调小鼠血清γ-干扰素水平，但对降低肺组织的菌量负荷和减轻肺脾组织炎症上无明显作用。rh-IFN-7辅助莫西沙星治疗耐多药结核病小鼠，在降低病变器官的菌量负荷和减轻炎症方面无辅助作用。

关键词：结核抗多种药物性/药物疗法干扰素γ 小鼠

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结核分枝杆菌Rv3407蛋白抗原表位的预测

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中国病原生物学杂志 2014年第6期9卷 486-488页

作者：赵亚静白雪娟梁艳张俊仙阳幼荣赵卫国吴雪琼河北北方学院河北张家口解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室北京100009

目的预测结核分枝杆菌Rv3407的抗原表位。方法利用DNAStar软件包中Protean软件对Rv3407氨基酸序列进行分析,采用包括二级结构、亲水性、抗原性、表面可能性、柔韧性等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果 Rv3407蛋白具有... 详细信息

目的预测结核分枝杆菌Rv3407的抗原表位。方法利用DNAStar软件包中Protean软件对Rv3407氨基酸序列进行分析,采用包括二级结构、亲水性、抗原性、表面可能性、柔韧性等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果 Rv3407蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段,潜在的B细胞抗原表位较少,可能位于11-26、28-43、50-61、66-74、76-99位氨基酸残基或其附近,这些区域基本上含有β转角结构,亲水性、表面可能性和柔韧性指数都较高。该蛋白潜在的T细胞抗原表位较多,可能位于2-12、22-26、34-37、40-44、56-60、75-79、86-93位氨基酸残基或其附近。结论结核分枝杆菌Rv3407是一个T细胞抗原表位占优势的蛋白抗原,B细胞抗原表位略少,预测结果为该蛋白抗原表位的进一步研究与应用奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌抗原表位 Rv3407蛋白二级结构

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