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中国防痨杂志创刊80周年纪念暨学术会议

作者：白雪娟梁艳阳幼荣张晓燕张俊仙张翠英冯金栋吴雪琼 100091 解放军第三○九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室

目的评价结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2029c、Rv2659c、Rv2628 及Rv1813c 对活动性感染与潜伏感染鉴别诊断价值.方法应用基因工程技术克隆、表达并纯化结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2029c、Rv2659c、Rv2628及Rv1813c.用4 种重组... 详细信息

目的评价结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2029c、Rv2659c、Rv2628 及Rv1813c 对活动性感染与潜伏感染鉴别诊断价值.方法应用基因工程技术克隆、表达并纯化结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2029c、Rv2659c、Rv2628及Rv1813c.用4 种重组蛋白刺激376 例中国人PBMC,其中未感染结核健康对照组103 例、结核潜伏感染组51 例、活动性结核病组116 例、BCG 接种组49 例(Rv1813c 无此组)、非结核呼吸疾病组57 例,用ELISPOT 技术检测分泌IFN-γ 的效应T 细胞斑点数(SFC),比较其在不同人群中的差异;以潜伏感染组为阳性组,以活动性结核病组为阴性组,绘制各个潜伏抗原的ROC 曲线,在特异度80％及90％两个点取SFC 的cut-off 值,以此评价并且比较潜伏感染蛋白对结核活动性感染与潜伏感染的鉴别诊断效能.结果 (1)本研究制备并获得纯度较高的4 种重组蛋白.(2)4 种重组蛋白刺激中国潜伏感染人群后分泌IFN-γ 的效应T 细胞数显著高于活动性结核病组(P＜0.05),也显著高于未感染正常对照组(P＜0.05);Rv2029c、Rv2659c、Rv1813c 在非结核呼吸疾病组显著低于结核潜伏感染组(P＜0.05),Rv2628 在非结核呼吸疾病组低于潜伏感染组,但差异不明显(P＞0.05),与未感染健康对照组无显著差别(P＞0.05);BCG 接种3 个月后PPD 阳转者与健康对照组潜伏蛋白特异的SFC 值进行比较,两者之间差异不明显(P＞0.05),BCG 接种前后潜伏感染蛋白刺激的SFC 值差异无统计学意义(P＞0.05).(3)ROC 曲线分析结果：Rv2029c 蛋白的曲线下面积最高达到89.1％,高于Rv2659c(69.9％)、Rv2628(68.8％)及Rv1813c(39％).Rv2029c、Rv2659c 及Rv2628 蛋白诱导潜伏感染组产生细胞免疫应答的阳性率最高.进一步评价各潜伏蛋白对鉴别结核活动感染与潜伏感染效能,Rv2029c 敏感度最高,在潜伏感染人群中的阳性率达到80％以上,但在未感染结核的健康组和活动性结核病组的假阳性率较高;Rv2659c 虽然敏感度不及Rv2029c,但其在未感染结核的健康组和活动性结核病组的假阳性率低;Rv2628 的敏感度与Rv2659c 相当,但其假阳性率高于Rv2659c,低于Rv2029c.结论 (1)本研究成功地构建了4 种高表达结核潜伏感染相关蛋白的基因工程菌株.(2)Rv2029c、Rv2659c、Rv2628 及Rv1813c 可被结核潜伏感染人群识别,诱导其效应T 细胞产生的免疫应答强于活动性结核病患者,且不受BCG 接种(Rv1813c 无此组)及其他非结核感染因素影响.(3)重组Rv2659c 蛋白通过ELISPOT 技术诊断结核潜伏感染、鉴别活动性结核感染的效能最高,有望成为针对中国人群结核潜伏感染的新型诊断标志物.总之,本研究结果为其潜伏感染相关抗原的研究奠定了基础,也为潜伏感染诊断标志物及潜伏感染疫苗的研究提供了丰富的实验依据.

关键词：结核分枝杆菌潜伏感染结核病免疫蛋白

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我国结核病基础研究的回顾与展望

我国结核病基础研究的回顾与展望

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《中国防痨杂志》创刊80周年纪念暨学术会议

作者：张俊仙梁艳吴雪琼解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室

结核病基础科研围绕着人体与结核分枝杆菌斗争的方方面面全方位地展开,从结核分枝杆菌的基因组DNA到转录组RNA,从其表达的蛋白质到其代谢的产物,再到结核分枝杆菌对人体的致病作用及人体对其产生的免疫应答,希望寻找出干预的措施、控制... 详细信息

结核病基础科研围绕着人体与结核分枝杆菌斗争的方方面面全方位地展开,从结核分枝杆菌的基因组DNA到转录组RNA,从其表达的蛋白质到其代谢的产物,再到结核分枝杆菌对人体的致病作用及人体对其产生的免疫应答,希望寻找出干预的措施、控制的手段。研究内容非常丰富,篇幅所限,难以面面俱到,笔者只是根据中文文献试图阐述我国在细菌学、免疫学、分子生物学、疫苗、新药方面的主要研究和取得的重要进展,也试图指出研究的前景和存在的问题。

关键词：结核基础研究基因免疫疫苗细菌

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不同剂量结核病DNA疫苗的电转染免疫原性研究

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中国防痨杂志 2014年第6期36卷 424-428页

作者：梁艳肖漓白雪娟高钰阳幼荣张晓燕陈丹王兰史迎昌张俊仙李忠明吴雪琼解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室北京100091 武汉海规生物科技有限公司

目的研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10... 详细信息

目的研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMC）分泌IFN-γ的辅助性T细胞（helper T cell,Th）1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[（646.05±342.53） pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]显著高于生理盐水组[（1.73±3.88）pg/ml]（f值分别为4.065、4.647,P值均＜0.05）和10 μg Ag85A DNA组[（87.83±120.82）pg/ml]（t值分别为3.513、4.094,P值均＜0.05）;10 μg Ag85A DNA电转染组[（357.06±105.18） pg/ml]显著高于生理盐水组（t=2.247,P＜0.05）,高于100 μg Ag85ADNA电转染组[（86.08±135.73） pg/ml],但差异无统计学意义（t=1.706,P＞0.05）;50 μg Ag85ADNA电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]显著高于生理盐水组（t=4.081,P＜0.05）和100 μg Ag85A DNA电转染组（t=3.539,P＜0.05）.与直接肌内注射组IFN-γ水平[（87.83±120.82） pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[（357.06 pg/ml）/（87.83 pg/ml）]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[（646.05±342.53） pg/ml]与电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]比较,差异无统计学意义（t=-0.016,P＞0.05）;100 μg Ag85A DNA电转染组[（86.08±135.73）pg/ml]较肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]降低88.35％（t=4.105,P＜0.05）.小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.39±0.84）％;50 μg Ag85A DNA：（1.55±0.33）％;100 μg Ag85A DNA：（2.13±0.47）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±0.47）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.88±0.51）％; 100 μg Ag85ADNA：（1.43±0.68）％]均高于生理盐水组[（0.65±0.31）％]（t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05）,但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义（t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05）.小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±1.18）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.14±0.78）％; 100 μg Ag85A DNA：（1.24±0.76）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.19±1.09）％; 50 μg Ag85A DNA：（2.06±0.96）％;100 μgAg85A DNA：（1.47±0.65）％]均显著低于生理盐水电转染组[（4.14±2.55）％]（t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05）,但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义（t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05）.结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果.

关键词：分枝杆菌,结核疫苗,DNA 电穿孔免疫

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我国结核病基础研究的回顾与展望

我国结核病基础研究的回顾与展望

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中国防痨杂志创刊80周年纪念暨学术会议

作者：张俊仙梁艳吴雪琼 100091 北京解放军第三Ο九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室

结核病基础科研围绕着人体与结核分枝杆菌斗争的方方面面全方位地展开,从结核分枝杆菌的基因组DNA到转录组RNA,从其表达的蛋白质到其代谢的产物,再到结核分枝杆菌对人体的致病作用及人体对其产生的免疫应答,希望寻找出干预的措施、控制的手段.研究内容非常丰富,篇幅所限,难以面面俱到,笔者只是根据中文文献试图阐述我国在细菌学、免疫学、分子生物学、疫苗、新药方面的主要研究和取得的重要进展,也试图指出研究的前景和存在的问题.

关键词：结核病发病机制鉴别诊断临床治疗

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IL-1A和IL-1B基因多态性与结核病易感性相关性的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第5期33卷 319-325页

作者：张俊仙朱冬林安慧茹赵卫国梁艳阳幼荣吴雪琼解放军第309医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室北京100091 中山大学附属第三医院检验科广州510630 解放军第309医院呼吸科

目的研究白细胞介素（IL）-1A和IL-1B基因多态性及其与结核易感性之间的关系。方法应用PCR-时间飞行质谱技术（PCR-MassARRAY）分析1032例结核病患者和1008例非结核病患者的IL-1A和IL-1B基因多态性，并通过统计学分析IL-1A和IL-1B各单... 详细信息

目的研究白细胞介素（IL）-1A和IL-1B基因多态性及其与结核易感性之间的关系。方法应用PCR-时间飞行质谱技术（PCR-MassARRAY）分析1032例结核病患者和1008例非结核病患者的IL-1A和IL-1B基因多态性，并通过统计学分析IL-1A和IL-1B各单核苷酸多态性（SNP）位点基因型与活动性结核病之间的关系。结果在筛选出的5个IL-1A和IL-1B标签SNP位点中，rs2853550和rs3783526的等位基因频率在结核组和对照组间存在分布差异（分别为P=0．047和P：0．034）。IL-1BSNPlrs2853550（P=0．025，OR=1．302，95％CI=1．034～1．640，***）具有显著的结核风险，而其他两个IL-1B位点及IL-1A的2个SNP位点则与结核发病无显著关联。在Akaike信息标准（AIC）定义的显性遗传模型下，IL-1BSNPlrs2853550[P=0．019，OR：1．308，95％CI=1．045—1．638，（TC＋TT）***]位点表现出显著的结核风险。而在隐性遗传模型下发现IL-1ASNP2rs3783526[P=0．040，OR=0．764，95％CI：0．591～0．988，GGVS．（AA＋GA）]位点具有结核抗性，结核风险减少。在IL一1B基因的单体域中，“TG”相比频率最高的“CA”表现出显著的结核风险（P=0．032，OR=1．265，95％CI=1．020～1．567）。IL-1A内单体型中含“GA”的双单体型和IL-1B的单体型中含“TG”的双单体型，1份拷贝时，都表现出显著的结核风险（P=0．014，OR=1．403，95％CI=1．072—1．836；P=0．013，OR=1．339，95％CI=1．063～1．688）。IL-1B的单体型中含“CG”的双单体型，在2份拷贝时，则带有结核抗性（P=0．006，OR=0．664，95％CI=0．494～0．891）。结论IL-1Brs2853550基因多态性可能与结核易感性密切相关，IL-1Ars3783526基因GG基因型可能具有结核抗性。

关键词：结核易感性 IL一1A IL-1B 基因多态性 MassARRAY

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中医药治疗肾结核的研究进展

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中国中医药现代远程教育 2013年第21期11卷 152-154页

作者：王小美刘光陵吴雪琼解放军第三O九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室北京100091

肾结核是常见的肺外结核之一,通常被忽视,诊断治疗不及时会引起严重的后果。目前西医治疗肾结核可采用化疗或肾脏切除术,但是化疗药物有对肝肾损害等副作用及外科手术会给病者带来不少的恐惧、痛苦、经济上的重大损失,而中医药具有抑菌... 详细信息

肾结核是常见的肺外结核之一,通常被忽视,诊断治疗不及时会引起严重的后果。目前西医治疗肾结核可采用化疗或肾脏切除术,但是化疗药物有对肝肾损害等副作用及外科手术会给病者带来不少的恐惧、痛苦、经济上的重大损失,而中医药具有抑菌、杀菌及增强免疫功能,改善相关临床症状,提高临床疗效及降低或减轻化疗药物的毒副作用的优势,所以本文简要地概述近年来有关中医药治疗肾结核的研究进展。

关键词：中医药肾结核综述

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人类与结核分枝杆菌

人类与结核分枝杆菌

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中国防痨协会80周年纪念暨2013年全国学术大会

作者：吴雪琼解放军第三○九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室

从新石器时代人遗骨中发现有骨结核,从古埃及木乃伊中也发现有结核病,说明结核病的历史可追朔到公园前2400至3400年。而人类与结核分枝杆菌斗争了几千年,仍然不能将其消灭。这种古老的传染病仍在全世界流行,是危害人类的主要杀手。人类... 详细信息

从新石器时代人遗骨中发现有骨结核,从古埃及木乃伊中也发现有结核病,说明结核病的历史可追朔到公园前2400至3400年。而人类与结核分枝杆菌斗争了几千年,仍然不能将其消灭。这种古老的传染病仍在全世界流行,是危害人类的主要杀手。人类对结核病的认识和研究是一个逐步发展的过程,过去的研究成就使我们人类受益非浅。1998年结核分枝杆菌H37Rv菌株的全基因组序列的阐明,是继结核分枝杆菌发现后结核分枝杆菌研究的又一重要里程碑,标志着结核分枝杆菌的研究进入一个崭新的基因组学、蛋白组学研究的时代,

关键词：结核分枝杆菌结核病

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新型结核病疫苗的研究现状与发展趋势

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中国防痨杂志 2012年第3期34卷 133-137页

作者：吴雪琼解放军第三〇九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室北京100091

目前结核病依然是全球感染性疾病的第一＂杀手＂,Mtb耐药问题越来越严重,艾滋病、移民和贫困等社会问题使得结核病在一些发达国家开始回升。我国的结核病疫情和耐药情况都较严重,2011年全国第五次结核病流行病学抽样调查结果显示我国结... 详细信息

目前结核病依然是全球感染性疾病的第一＂杀手＂,Mtb耐药问题越来越严重,艾滋病、移民和贫困等社会问题使得结核病在一些发达国家开始回升。我国的结核病疫情和耐药情况都较严重,2011年全国第五次结核病流行病学抽样调查结果显示我国结核病年发病人数约为130万,占全球发病的14.3%,位居全球第2位。

关键词：结核病疫苗耐药情况感染性疾病结核病疫情发达国家社会问题发病人数调查结果

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2010年驻京部队入伍新兵结核潜伏感染情况的调查

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结核病与肺部健康杂志 2012年第2期1卷 -页

作者：梁艳吴雪琼王兰王志耘张翠英阳幼荣张俊仙解放军第三○九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室北京100091

目的应用酶联免疫斑点试验(enzyme linked-immunospot assay,ELISPOT)检测入伍新兵结核潜伏感染情况,评价ELISPOT在检测结核潜伏感染中的价值.方法以结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)皮肤试验为对照,应用ELISPOT试剂盒检测128例2010年驻京... 详细信息

目的应用酶联免疫斑点试验(enzyme linked-immunospot assay,ELISPOT)检测入伍新兵结核潜伏感染情况,评价ELISPOT在检测结核潜伏感染中的价值.方法以结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)皮肤试验为对照,应用ELISPOT试剂盒检测128例2010年驻京部队入伍新兵外周血中分泌结核分枝杆菌抗原特异性γ干扰素(IFN-γ)的T淋巴细胞数,对于PPD和ELISPOT均为阴性的45例入伍新兵接种卡介苗.结果 128例入伍新兵中,PPD皮肤试验和ELISPOT阳性率分别为50.00％(64/128)和28.13％(36/128).64例PPD皮肤试验阴性和64例PPD皮肤试验阳性者中,分别有19例(29.69％)和17例(26.56％)ELISPOT阳性,两者的一致率为48.44％(62/128),两者的检测结果差异具有统计学意义(x2=9.766,P=0.0018).在有卡介苗接种者中,PPD皮肤试验阳性率为57.44％(58/101),ELISPOT阳性率为26.73％(27/101)[斑点形成细胞数(SFC):23.52±11.01]；在无卡介苗接种者中,PPD皮肤试验阳性率为22.22％(6/27),ELISPOT阳性率为33.33％(9/27)(SFC:32.78±24.06).结论 ELISPOT具有较好的特异度和敏感度,能够更有效地筛查结核分枝杆菌感染.

关键词：结核分枝杆菌,结核酶联免疫斑点试验结核菌素试验军事人员敏感性与特异性

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结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗抗结核作用的研究

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中国防痨杂志 2012年第3期34卷 181-183页

作者：梁艳吴雪琼张俊仙白雪娟阳幼荣李宁余琦李忠明王兰史迎昌解放军第三〇九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室北京100091 上海海规生物科技有限公司

结核病是由Mtb引起的一种呼吸道传染病,全球结核病疫情仍然十分严峻,而卡介苗预防结核病的效果并不理想,研究新型结核病疫苗已成为国内外结核病研究的热点之一。将本课题组自1998年至今研究MtbAg85ADNA疫苗的免疫原性、治疗效果进行综... 详细信息

结核病是由Mtb引起的一种呼吸道传染病,全球结核病疫情仍然十分严峻,而卡介苗预防结核病的效果并不理想,研究新型结核病疫苗已成为国内外结核病研究的热点之一。将本课题组自1998年至今研究MtbAg85ADNA疫苗的免疫原性、治疗效果进行综合与概述,结果表明Mtb Ag85ADNA疫苗可诱导小鼠体液免疫和Th1型细胞免疫应答,可减少小鼠组织中的Mtb尤其是耐多药Mtb的数目,该疫苗与常规化疗联合不仅可提高机体免疫力,并可有效地杀灭或抑制Mtb,从而提高化疗效果。

关键词：疫苗 DNA 抗原85A 抗原细菌结核/治疗

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