检索结果-内蒙古大学图书馆

临床肺科杂志 2020年第2期25卷 167-171页

作者：孙卫国曹志红李改平杨秉芬刘艳华贺雄张灵霞解放军第309医院结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091 解放军第309医院呼吸科北京100091

目的利用原核表达系统表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2660c,评价其在血清学方面用于结核病诊断的价值。方法合成Rv2660c全基因核酸序列,构建pET28a-Rv2660c融合表达载体,在原核系统内进行重组表达,亲和层析纯化重组Rv2660c蛋... 详细信息

目的利用原核表达系统表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2660c,评价其在血清学方面用于结核病诊断的价值。方法合成Rv2660c全基因核酸序列,构建pET28a-Rv2660c融合表达载体,在原核系统内进行重组表达,亲和层析纯化重组Rv2660c蛋白,采用Western-Blot、ELISA实验分析重组蛋白的免疫反应。结果pET28a-Rv2660c在大肠杆菌内成功表达重组Rv2660c蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白分子量为10.2 KD,与预期一致,Western-Blot结果表明重组蛋白Rv2660c只能与活动性结核患者血清反应,出现一条杂交条带;ELISA结果发现重组Rv2660c蛋白与结核患者血清能产生较强的反应,结核病菌阳患者组、菌阴患者组、潜伏感染组以及健康对照组A450平均值分别为0.52、0.48、0.28和0.25。结论重组结核分枝杆菌Rv2660c蛋白具有一定的免疫原性,对活动性结核病的诊断具有一定的价值,但对结核分枝杆菌潜伏感染的诊断没有价值。

关键词：结核分枝杆菌重组蛋白 Rv2660c 血清学反应

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结核分枝杆菌Rv3425-Rv1168c蛋白融合表达与血清学评价

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中国人兽共患病学报 2019年第1期35卷 1-4,10页

作者：胡永亮孙卫国张灵霞梁晓博中国人民解放军第309医院皮肤科北京100091 解放军第309医院结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的原核表达结核分枝杆菌Rv3425-Rv1168c融合蛋白并进行纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法评价重组蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,通过重叠PCR扩增得到Rv3425-Rv1168c全核酸序列克隆至表... 详细信息

目的原核表达结核分枝杆菌Rv3425-Rv1168c融合蛋白并进行纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法评价重组蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,通过重叠PCR扩增得到Rv3425-Rv1168c全核酸序列克隆至表达载体pET-24b中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,通过ELISA检测100份确诊结核病人、20例非结核呼吸疾病患者、100份健康人血清,评价融合蛋白进行临床血清学诊断的可行性。结果 Rv3425-Rv1168c融合蛋白在原核系统内获得高表达,纯化的融合蛋白经ELISA方法测定,在血清学实验中敏感性为54%,特异性为95%。结论 Rv3425-Rv1168c融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫原性,在结核病血清学诊断方面具有很大的应用价值。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3425蛋白 Rv1168c蛋白血清学诊断

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活动性肺结核患者PBMCs中INHBA基因的表达

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临床肺科杂志 2019年第5期24卷 782-785页

作者：杨秉芬翟斐安红娟曹志红王若程小星解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的研究活动性肺结核患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中抑制素βA亚基(inhibin, beta A, INHBA)基因的表达特点。方法使用密度梯度离心法分离PBMCs,然后用TRIzol提取细胞RNA,逆转成cDNA后,进行荧光定... 详细信息

目的研究活动性肺结核患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中抑制素βA亚基(inhibin, beta A, INHBA)基因的表达特点。方法使用密度梯度离心法分离PBMCs,然后用TRIzol提取细胞RNA,逆转成cDNA后,进行荧光定量PCR分析INHBA的表达。结果结核分枝杆菌H37Rv菌体裂解液和结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP-10的多肽,显著性提高PBMCs中INHBA基因的表达,配对t检验p值分别为0.019和0.0013;在无抗原刺激的情况下,活动性肺结核与正常对照之间无显著差别(P=0.52);当使用结核分枝杆菌H37Rv菌体裂解液和结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP-10的多肽刺激PBMCs,INHBA在活动性肺结核患者组的表达显著性的高于正常对照组,t检验P值分别为0.016和0.010。结论 INHBA在结核抗原刺激后在PBMCs表达显著性升高,且在活动性肺结核患者组显著高于正常对照组,可能作为活动性肺结核的诊断标志物。

关键词： INHBA 活动性肺结核抗原

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提高结核抗体试剂质量加强临床筛选评估研究

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中国防痨杂志 2018年第1期40卷 5-8页

作者：吴雪琼解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

全球结核病（TB）疫情依然相当严重。根据WHO 2017年报告，2016年全球有1040万例TB患者、49万例耐多药结核病（MDR-TB）患者和11万例单耐利福平的TB患者；只有57％的肺结核患者是经细菌学证实的，自2013年以来菌阳患者逐年减少，合计167... 详细信息

全球结核病（TB）疫情依然相当严重。根据WHO 2017年报告，2016年全球有1040万例TB患者、49万例耐多药结核病（MDR-TB）患者和11万例单耐利福平的TB患者；只有57％的肺结核患者是经细菌学证实的，自2013年以来菌阳患者逐年减少，合计167．4万例患者死于TB。中国的TB疫情相当严重，2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查结果表明，15岁及以上人群肺结核的患病率为459／10万，其中涂阳酶结核怒病率为66／10万，菌阳肺结核患病率为119／10万，由此可见，我国50％以上为菌阴肺结核患者。

关键词：结核抗体试剂质量临床筛选耐多药结核病肺结核患者 TB患者菌阳肺结核评估

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结核分枝杆菌IgG和IgM抗体检测试剂临床应用价值的研究

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中国防痨杂志 2018年第1期40卷 53-57页

作者：张俊仙阳幼荣王杰梁建琴安慧茹凌彦博梁艳王兰吴雪琼解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的评估结核分枝杆菌IgG和IgM抗体检测试剂的临床价值。方法评估实验分2次进行：（1）于 2014年5月选择于解放军第三〇九医院就诊的患者,经病历回顾性分析分为肺结核组（92例）和非结核对照组（99例）,同时,选取94名健康对照者。（2... 详细信息

目的评估结核分枝杆菌IgG和IgM抗体检测试剂的临床价值。方法评估实验分2次进行：（1）于 2014年5月选择于解放军第三〇九医院就诊的患者,经病历回顾性分析分为肺结核组（92例）和非结核对照组（99例）,同时,选取94名健康对照者。（2）于2016年12月至2017年3月共选取解放军第三〇九医院就诊的118例患者血清标本,经病历回顾性分析分为结核病组（62例）和非结核对照组（56例）。对痰和支气管灌洗液进行涂片检查,收集研究对象血清标本应用结核分枝杆菌IgG和IgM抗体检测试剂盒（胶体金免疫层析法）进行检测。结果第1次实验：应用结核分枝杆菌IgG和IgM抗体检测试剂盒检测研究对象血清中抗结核抗体的敏感度为64.1%（59/92）,特异度为89.1%（172/193）,阳性预测值为73.8%（59/80）,阴性预测值为83.9%（172/205）,一致率为81.1%（231/285）。92例肺结核患者中,IgG抗体检测的阳性率为64.1%（59/92）,其中涂阳肺结核患者的阳性率为73.8%（31/42）,涂阴肺结核患者的阳性率为56.0%（28/50）,差异无统计学意义（χ2=3.15,P=0.076）;而IgM检测均为阴性。第2次实验：应用结核分枝杆菌IgG和IgM抗体检测试剂盒检测118例研究对象血清中不同抗结核抗体的敏感度为45.2%（28/62）,特异度为78.6%（44/56）,阳性预测值为70.7%（29/41）,阴性预测值57.1%（44/77）,一致率为61.9%（73/118）。62例结核病患者中,IgG抗体检测的阳性率为45.2%（28/62）,其中,涂阳肺结核患者的阳性率为56.3%（18/32）,明显高于涂阴肺结核患者的29.2%（7/24）,差异有统计学意义（χ2=4.07,P=0.044）;而IgM检测只有1例阳性,阳性率为1.6%（1/62）。结论结核分枝杆菌IgG和IgM抗体检测试剂中,IgG检测对活动性结核病具有较好的辅助诊断价值,而IgM检测的临床价值尚需进一步评估。

关键词：分枝杆菌,结核抗体免疫球蛋白G 免疫球蛋白M 试剂盒,诊断评价研究

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结核分枝杆菌耐药检测及其临床意义

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临床药物治疗杂志 2018年第4期16卷 18-22页

作者：阳幼荣吴雪琼解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

耐药结核病(TB)尤其是耐多药结核病(MDR-TB)、广泛耐药结核病(XDR-TB)的快速诊断和有效治疗是TB防控中亟需解决的难题。结核分枝杆菌(Mtb)耐药的主要机制是由于药物作用靶标或药物代谢酶编码基因突变所致。临床上常用的Mtb药物敏感性试... 详细信息

耐药结核病(TB)尤其是耐多药结核病(MDR-TB)、广泛耐药结核病(XDR-TB)的快速诊断和有效治疗是TB防控中亟需解决的难题。结核分枝杆菌(Mtb)耐药的主要机制是由于药物作用靶标或药物代谢酶编码基因突变所致。临床上常用的Mtb药物敏感性试验方法主要包括表型药敏方法和分子药敏方法,本文还简要地概述了通过药敏试验所揭示的一些值得临床医师关注的临床意义。

关键词：结核分枝杆菌药物敏感性试验耐药耐药基因

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人血小板衍生生长因子BB亚型包涵体复性与纯化

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生物技术通讯 2018年第3期29卷 382-386页

作者：孙卫国郑本献熊志红杨秉芬刘艳华张灵霞解放军第309医院结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091 军事科学院第61研究所门诊部北京100141

目的:优化人血小板衍生生长因子BB亚型(PGDF-BB)包涵体复性方法与纯化条件,获得具有较好生物活性的重组PGDF-BB蛋白。方法:对PGDF-BB包涵体以梯度尿素进行变性,选择最佳包涵体变性浓度;比较不同复性条件下的复性率,稳定PGDF-BB包涵体复... 详细信息

目的:优化人血小板衍生生长因子BB亚型(PGDF-BB)包涵体复性方法与纯化条件,获得具有较好生物活性的重组PGDF-BB蛋白。方法:对PGDF-BB包涵体以梯度尿素进行变性,选择最佳包涵体变性浓度;比较不同复性条件下的复性率,稳定PGDF-BB包涵体复性方法;参照该蛋白的理化性质,选择适合PGDF-BB重组蛋白的纯化方法。结果:原核系统内实现了PGDF-BB的高表达;通过优化包涵体复性方法,重组蛋白的包涵体复性率可达40%以上;经过多个纯化方法相结合,PGDF-BB的纯度达到95%。结论:通过实验条件的优化,提高了PGDF-BB包涵体复性率,获得高纯度、高生物活性的重组PGDF-BB蛋白。

关键词：血小板衍生生长因子BB亚型(PGDF-BB) 包涵体复性纯化

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活动性肺结核患者CD4-＋T细胞中T-bet表达与IFN-γ和TNF-α表达负相关

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细胞与分子免疫学杂志 2017年第1期33卷 72-76页

作者：杨秉芬翟斐蒋静孙卫国王若安红娟程小星解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的检测在活动性肺结核患者CD4^+T细胞中转录因子T细胞表达的T盒(T-bet)与γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)表达的关系。方法用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)筛... 详细信息

目的检测在活动性肺结核患者CD4^+T细胞中转录因子T细胞表达的T盒(T-bet)与γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)表达的关系。方法用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)筛选结核分枝杆菌(MTB)潜伏感染者,用流式细胞术检测CD4^+T细胞中T-bet与IFN-γ、TNF-α、IL-2表达的关系。结果潜伏感染者PBMC用MTBH 37Rv裂解液刺激后IFN-γ表达显著性升高;在活动性肺结核患者用MTB H37Rv裂解液刺激,在CD4^+IFN-γ+细胞中的T-bet显著性高于潜伏感染者;在MTB抗原特异性的CD4^+T细胞中T-bet-细胞IFN-γ和TNF-α的表达显著性高于T-bet+细胞;而在MTB抗原特异性的CD4^+T细胞中T-bet-细胞与T-bet+细胞的IL-2的表达无显著差异。结论在活动性肺结核患者外周血抗原特异性CD4^+T细胞中T-bet与IFN-γ、TNF-α表达负相关。

关键词： T细胞表达的T盒(T-bet) γ干扰素(IFN-γ) 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 白细胞介素2(IL-2)

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CD244与活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞表型及功能的关系研究

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中国免疫学杂志 2017年第5期33卷 721-725页

作者：杨秉芬翟斐蒋静王心静曹志红程小星解放军第三〇九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的:探索CD244与活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞表型及功能的关系。方法:用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),用流式细胞术检测活动性肺结核患者与正常对照者CD56^(bright)NK细胞表面CD244、CD94、NKG2D表达差异,进一... 详细信息

目的:探索CD244与活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞表型及功能的关系。方法:用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),用流式细胞术检测活动性肺结核患者与正常对照者CD56^(bright)NK细胞表面CD244、CD94、NKG2D表达差异,进一步检测活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞CD244与Tim3、CD27、CD62L、CCR7、CD107a、IFN-γ表达的关系。结果:不经过结核菌抗原刺激的外周血中的CD56^(bright)NK细胞表面CD244表达在活动性肺结核患者和正常对照中并没有显著性差异;经过结核菌抗原刺激的活动性肺结核患者CD56^(bright)NK细胞表面CD244表达显著高于正常对照者;CD56^(bright)NK细胞表面CD94和NKG2D表达,在活动性肺结核患者与健康对照者之间无显著性差异;活动性肺结核患者CD244+CD56^(bright)NK细胞表面Tim3^+细胞显著性升高,而细胞表面CD62L显著性降低,细胞内IFN-γ显著性降低;然而CD244^+CD56^(bright)NK细胞和CD244^-CD56^(bright)NK细胞之间CD107a表达无显著性差异。结论:在活动性肺结核患者PBMCs中CD56^(bright)NK细胞表面高表达CD244,可能与抑制受体Tim3协同抑制IFN-γ的表达,但是与NK细胞的脱颗粒作用无关。

关键词： CD56^brightNK细胞 CD244 Tim3 IFN-γ CD107a

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活动性肺结核患者PBMCs实时定量PCR内参基因的选择

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临床肺科杂志 2018年第11期23卷 1941-1945,1958页

作者：翟斐杨秉芬王若曹志红程小星中国人民解放军军事科学院军事医学研究院北京100091 解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的筛选适用于活动性肺结核患者PBMCs的内参基因。方法用密度梯度离心方法分离活动性肺结核患者PBMCs,然后使用结核分枝杆菌H37Rv裂解液、CFP-10和ESAT-6多肽库、共刺激因子CD28共孵育,或者不添加任何刺激物,培养过夜后收集细胞;使用Tr... 详细信息

目的筛选适用于活动性肺结核患者PBMCs的内参基因。方法用密度梯度离心方法分离活动性肺结核患者PBMCs,然后使用结核分枝杆菌H37Rv裂解液、CFP-10和ESAT-6多肽库、共刺激因子CD28共孵育,或者不添加任何刺激物,培养过夜后收集细胞;使用Trizol提取mRNA,逆转录获得c DNA,然后用6个常用的内参基因ACTB、B2M、DDX5、GAPDH、YWHAZ和18sRNA的特异性引物进行实时定量PCR检测,结果用ge Norm、Norm Finder和Bestkeeper软件进行数据分析。结果 18sRNA基因丰度太高,在PBMCs表达不稳定,DDX5、YWHAZ和B2M的稳定最好,适合作为活动性肺结核患者PBMCs的内参基因,而ACTB和GAPDH稳定性略低。结论筛选出稳定的内参基因DDX5、YWHAZ和B2M,可用于活动性肺结核患者PBMCs基因表达分析。

关键词：内参基因实时定量PCR 结核外周血单个核细胞

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